中国农业科学

当期目录

2008年第41卷第10期刊出日期：2008-10-10

作物遗传育种·种质资源·分子遗传学

共转化获得无抗性标记的转反义蜡质基因籼稻

中国农业科学. 2008, 41(10): 2909-2915 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.001

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【目的】利用转基因技术将反义蜡质基因导入籼稻成熟胚愈伤组织中，改良籼稻稻米直链淀粉含量。【方法】用根癌农杆菌介导的方法将p13W8质粒（含反义蜡质基因）和pCAMBIA1300质粒（含抗潮霉素抗性基因）对2个籼稻品种的成熟胚愈伤组织进行遗传共转化。【结果】供试材料愈伤组织继代培养18～24 d后具有较高的转化频率和分化频率，可作为共转化的良好受体；抗性愈伤组织PCR检测结果表明，抗潮霉素抗性基因的阳性检测率为97.6%，反义蜡质基因的阳性检测率为27.1%。在46株转基因潮霉素抗性植株中，反义蜡质基因阳性株为5株，占转基因植株的10.9%。经PCR检测，发现上述4个株系T1群体中发生抗潮霉素抗性基因和反义蜡质基因片段的分离，从286个T1单株中筛选到了39个单株只带反义蜡质基因片段，而无潮霉素抗性基因的转基因植株，占T1单株总数的13.6%。部分转反义蜡质基因植株种子的直链淀粉含量有不同程度的降低。【结论】通过农杆菌介导的遗传共转化方法，将反义蜡质基因Waxy导入籼稻成熟胚愈伤组织，获得了直链淀粉含量明显降低的仅含反义蜡质基因籼稻株系。

两种水稻OsRhoGDIs基因启动子的克隆及分析

中国农业科学. 2008, 41(10): 2916-2922 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.002

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【目的】OsRacD属于水稻小GTP结合蛋白Rho家族,是与光敏核不育水稻光周期育性转换相关的关键基因,功能之一是通过控制花粉管的延伸生长影响水稻的育性。在采用酵母双杂交技术,筛选到与OsRacD相互作用的两种鸟苷酸解离抑制因子的编码基因OsRhoGDI1和OsRhoGDI2的基础上，为深入分析OsRhoGDIs的调控机制以及与OsRacD的关系，对其上游调控序列进行克隆和分析。【方法】采用PCR方法克隆了OsRhoGDI1和OsRhoGDI2的上游调控序列，并利用网络工具对启动子顺式作用元件进行预测。【结果】两种OsRhoGDIs基因具有与激素应答、光调控及胁迫诱导应答相关元件,且一些元件相同或相似；OsRhoGDIs与OsRacD启动子元件的比较显示，都具有与花粉管萌发相关的多个元件。【结论】OsRhoGDIs的表达调控方式复杂，可能受多条信号通路的共同调控；同时也提示OsRhoGDIs与OsRacD基因可能通过协同表达控制光敏核不育水稻的育性。

中国小麦品种黄色素含量基因等位变异分子检测及其分布规律研究

中国农业科学. 2008, 41(10): 2923-2930 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.003

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【目的】八氢番茄红素合成酶（phytoene synthase，Psy）基因是影响小麦黄色素含量的关键基因，利用分子标记检测中国冬小麦品种（系）Psy-A1基因的等位变异及其与黄色素含量的关系，进一步验证Psy-A1基因分子标记的有效性。【方法】利用7A染色体上Psy-A1基因的分子标记YP7A检测该基因在中国217份冬小麦品种（系）中的等位变异，分析不同等位变异与黄色素含量的相关性及变化趋势。【结果】Psy-A1基因标记YP7A为共显性标记，在高、低黄色素含量的小麦材料中分别扩增出194 bp和231 bp片段，相应的等位基因为Psy-A1a和Psy-A1b（GenBank编号分别为EF600063和EF600064）。在217份冬小麦品种（系）中，含有等位基因Psy-A1a和Psy-A1b的品种(系)分别占62.2%和37.8%，二者黄色素含量平均值差异达到极显著水平（P＜0.01）。其中，北方冬麦区、黄淮冬麦区、长江中下游冬麦区及西南冬麦区Psy-A1a等位基因的分布频率分别为75.0%、72.0%、25.9%和33.3%。【结论】分子标记YP7A可以作为小麦品种黄色素含量选择的辅助工具。

小麦品种中梁88375抗条锈病基因的分子作图

中国农业科学. 2008, 41(10): 2931-2936 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.004

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【目的】中梁88375是甘肃省天水市农业科学研究所以中4/S394//咸农4号复合杂交选育而成的冬小麦品系，对小麦三锈免疫。明确其抗条锈病基因及遗传特点，建立与其连锁的微卫星标记，以利于抗源筛选和培育持久抗病新品种。【方法】将中梁88375与感病品种铭贤169杂交、自交和测交并对双亲及其杂交后代进行苗期抗性鉴定。用小麦条锈菌条中31号对其进行遗传分析；采用SSR技术，选用普通小麦的320对微卫星引物对中梁88375及铭贤169的基因组DNA进行PCR扩增和电泳分析。【结果】中梁88375对多个条锈菌小种具有良好的抗病性,对CY31的抗病性由1对显性核基因控制，把该基因暂命名为Yr88375。建立了与Yr88375连锁的6个微卫星标记Xgwm335、Xwmc289、Xwmc810、Xgdm116、Xbarc59与 Xwmc783，并将Yr88375定位于小麦5BL。距离Yr88375 最近的两个微卫星位点是Xgdm116、Xwmc810，遗传距离分别是3.1 cM和3.9 cM，最远的标记Xwmc783与Yr88375之间的遗传距离为13.5 cM。【结论】系谱分析结合分子标记结果表明，Yr88375很有可能是一个来自中间偃麦草(E.intermedium)并与已知抗条锈病基因不同的新基因。

贮藏蛋白组分对小麦面团流变学特性和食品加工品质的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 2937-2946 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.005

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【目的】贮藏蛋白组成与组分含量显著影响食品加工品质，研究贮藏蛋白组分含量对加工品质的影响，指导小麦品质改良。【方法】选用近几年北方冬麦区育成的优质品种和高代品系及山东省主栽品种为材料，采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）和凝胶色谱（SE-HPLC）方法对贮藏蛋白组分进行量化，并分析它们与面团流变学特性、面包、面条和馒头加工品质的关系。【结果】谷蛋白总量（Glu）、高分子量麦谷蛋白亚基（HMW-GS）含量和低分子量麦谷蛋白亚基（LMW-GS）含量与反映面筋强度的和面时间、稳定时间、拉伸面积和最大抗延阻力呈1%显著正相关（r = 0.61～0.83），与面包品质均呈显著正相关（r = 0.34～0.85），而醇溶蛋白与谷蛋白含量比（Gli/Glu）与这些参数均呈显著负相关（r = -0.37～-0.85，P<0.05）。SDS不溶性谷蛋白聚合体百分含量（%UPP）与面团稳定时间和最大抗延阻力呈对数关系，决定系数分别达0.84和0.86；与面包总分呈显著正相关（r = 0.76，P＜0.001），决定系数为0.58。Glu、HMW-GS、LMW-GS和%UPP与面条的色泽、硬度、总分和馒头的光滑度呈5%显著负相关（r = -0.36～-0.63），而Gli/Glu与这些参数呈5%显著正相关（r = 0.37～0.57）。醇溶蛋白总量及各组分含量与馒头的压缩张驰性呈1%显著正相关，与馒头的总评分呈显著负相关。【结论】贮藏蛋白组分含量对面团流变学特性和面包品质影响较大，当Glu和%UPP分别达到32.5 AU和48.9%时，面筋强度（稳定时间大于10.0 min）和面包品质较优，而对面条和馒头品质影响相对较小，且多为负向效应。

新疆陆地棉主栽品种部分产量性状QTL的标记与定位

中国农业科学. 2008, 41(10): 2947-2956 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.006

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【目的】在新疆特有的“矮密早”陆地棉栽培技术体系下，利用不同主栽品种（Gossypium hirsutum L.）组配F2组合筛选产量及其构成因素的QTL，为利用分子标记辅助选择提高新疆陆地棉育种效率提供理论依据。【方法】用新陆中10号、中棉所35号、军棉1号和新陆早7号4个品种构建了3个F2作图群体，连锁群构建及QTL定位使用MAPMAKER/EXP（Version 3.0b）、MapQTL5和WinQTLCartV2.5。【结果】3个作图群体图谱覆盖了除D4和D12外的棉花所有染色体，将筛选出皮棉产量、单铃重、衣分、籽指、结铃数等性状在位置、效应一致的QTL认为是一个QTL，共鉴定、筛选出产量构成因子QTL 11个。其中与籽指有关的QTL共3个，分别位于A1、A5和A7上；与衣分有关的QTL 3个，分别位于A7、A13和连锁群6上；与铃重有关的QTL 4个，定位在A7上有3个、D3上1个；与皮棉产量有关的QTL1个，定位在D3上。涉及到单铃重、衣分和籽指等与产量性状相关的QTL大部分都分布在A7染色体上的同一区域。【结论】产量相关性状的QTL分布在棉花染色体同一区域，并在不同群体或两年环境中稳定表达，这些QTL可能有助于今后新疆陆地棉分子标记辅助育种的提高。部分籽指QTL在染色体水平上的定位（A1和A5）与前人研究相同，其余QTL在染色体水平上的定位（A7、D3和A13）与前人研究不同。

转CryIA和CpTI双价抗虫基因大豆的获得与稳定表达

中国农业科学. 2008, 41(10): 2957-2962 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.007

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【目的】将抗虫基因转入栽培大豆中，提高大豆的抗食心虫能力。【方法】利用大豆未成熟子叶体细胞胚发生系统高效转化体系，将携带有人工合成的CryIA杀虫基因和CpTI基因的高效双价杀虫基因植物表达载体pGBI121S4ABC转化到大豆主栽品种吉林20与吉林27中。【结果】GUS活性分析、PCR、Southern blot检测证明，目的基因已整合到受体大豆基因组中。T1代转基因大豆抗虫测定表明，转基因材料虫食率比对照显著降低，抗虫能力显著提高。【结论】T3～T5连续3代接虫测定结果表明，转基因大豆株系0-195和0-150的虫食率均比对照低大约30%，其抗虫能力已基本稳定。

基于加性-显性效应的杂种表现分子标记预测模型

徐新福,唐章林,李加纳,柴友荣,王瑞,谌利

中国农业科学. 2008, 41(10): 2963-2972 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.008

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【目的】以甘蓝型油菜为研究材料，探索杂种表现分子标记预测模式。【方法】以6份甘蓝型油菜隐性核不育两型系、11份恢复系为亲本按NCⅡ设计配制成66个杂交组合。利用F1的9个性状的表型值对亲本材料的SSR和AFLP标记位点进行筛选，建立标记效应和标记型值估算体系，估算这些特异标记位点对性状表现的效应及杂种标记型值，进而分析杂种标记型值与杂种表现的相关性，应用逐步回归分析建立9个性状杂种表现的分子标记预测模型。【结果】114个SSR和205个AFLP标记位点中，在0.01显著水平下9个性状筛选到的特异性标记位点分别为39～85个；不同标记位点对性状表现的效应大小、方向及作用方式存在广泛差异；9个性状的杂种F1标记型值与性状表现间的相关性均达到极显著水平，相关系数为0.6824～0.8113。9个预测模型中分别包括了6～14个标记位点，可决系数R2为0.5191～0.6783，预测模型稳定性强，精确度较高。【结论】利用标记型值预测作物杂种表现是一种有效的新途径，可以利用较少的标记位点建立甘蓝型油菜杂种表现预测模型。

利用Cre/lox定位重组系统获得无选择标记GFP转基因烟草

宋洪元,任雪松,司军,李成琼,宋明

中国农业科学. 2008, 41(10): 2973-2982 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.009

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【目的】利用Cre/lox系统具有的特异重组特性，以绿色荧光蛋白GFP为目的基因，获得无选择标记的GFP转基因烟草。【方法】将Bar基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与GFP基因表达盒融合后获得相应植物表达载体，转化烟草后获得抗除草剂Basta的GFP转基因植株。GFP转基因植株叶盘二次转化导入重组酶Cre基因后，实现与GFP基因连锁的Bar基因表达盒剔除，剔除Bar基因的植株开花后自交使重组酶Cre基因分离，获得无选择标记的GFP转基因烟草。【结果】将含Bar基因表达盒以及GFP基因表达盒的植物表达载体转化烟草Wisconsin 38后获得了抗除草剂Basta以及GFP荧光表达的转基因植株。随机抽取5株转基因植株二次转化导入Cre基因，所获得的再生植株叶盘进行Basta的抗性检测，绝大多数单株对应叶盘在含8 mg•L-1 PPT（phosphinothricin）的筛选培养基上无法再生死亡，删除效率在76%～100%。对Bar基因删除后区域片段进行克隆测序分析显示，Bar基因表达盒已经被精确删除。Bar基因删除植株开花后自交，获得的自交后代进行NPTⅡ抗性检测，NPTⅡ敏感植株分子检测显示均只含有GFP基因。【结论】利用Cre/lox系统获得烟草无选择标记的转基因植物是稳定可行的,可广泛应用于其它无选择标记转基因植物的培育。

茶树花蕾14-3-3蛋白基因的分子克隆及差异表达分析

中国农业科学. 2008, 41(10): 2983-2991 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.010

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【目的】从分子水平研究茶树花蕾发育阶段的相关基因表达，了解茶树花蕾的发育机理，利用分子生物学技术抑制茶树的生殖生长、促进营养生长。【方法】利用cDNA-AFLP技术对茶树花蕾发育早期和晚期的差异表达进行分析。采用RACE技术克隆到花蕾发育晚期阶段特异表达的、在花蕾发育中可能起重要作用的14-3-3基因，通过RT-PCR和Western-blot方法研究该基因转录水平和蛋白质表达水平的特点。【结果】在测定的大约1 110个茶树花蕾cDNA片段中，122个（10.9%）是差异性表达的，其中87个在发育晚期特异表达，包括茶树14-3-3蛋白基因（GenBank登录号：DQ444463），其全长为1 072 bp，包含1个由783个核苷酸组成的ORF，编码260个氨基酸，5′非翻译区和3′非翻译区分别有67和222个核苷酸，该基因与其它植物的14-3-3蛋白基因在核苷酸序列和推导的氨基酸序列方面均有着比较高的相似性。RT-PCR和Western-blot分析表明该基因在茶树的晚期发育花蕾中特异表达。【结论】14-3-3蛋白仅存在于茶树发育晚期的花蕾中。cDNA-AFLP技术能用于茶树花蕾不同发育时期的基因分离研究。

根瘤菌基因组内简单重复序列的分析

中国农业科学. 2008, 41(10): 2992-2998 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.011

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【目的】分析根瘤菌基因组中的简单重复序列（simple sequence repeats，SSRs），为其在根瘤菌遗传多样性研究中的应用提供有益的信息。【方法】利用公共的微生物串联重复序列数据库资源，对已测序的3种根瘤菌基因组中SSRs的结构类型、分布、丰度等进行系统的比较分析。【结果】大豆慢生根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum）、百脉根根瘤菌（Mesorhizobium loti）和苜蓿中华根瘤菌（Sinorhizobium meliloti）基因组中的SSRs分别为1 410个、859个和638个，3种根瘤菌基因组中长重复的四、五、六核苷酸基序更为丰富，变异性更高。数目最少的为单碱基重复。【结论】3种根瘤菌的SSR在结构类型和分布规律上均具有一定的相似性。

披碱草属野生种质资源苗期耐盐性评价及相关生理机制研究

中国农业科学. 2008, 41(10): 2999-3007 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.012

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【目的】对披碱草属野生种质资源进行苗期耐盐性评价，并对其生理机制进行初步研究，用以发掘和利用具有优良耐盐性状的披碱草野生种质资源，并为利用生理生化指标进行苗期快速准确鉴定提供依据。【方法】设置对照（0）、0.4%、0.6%、0.8%和1.0%等5个土壤盐浓度水平，对披碱草属20份野生种质材料的苗期生长参数进行测定，在此基础上采用极差分类进行种质材料的耐盐性排序。测定不同盐浓度胁迫下的游离脯氨酸含量和细胞膜透性，以及抗坏血酸过氧化物酶（APX）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性的变化。【结果】随着盐浓度的增加，各供试材料的株高、分蘖、存活率及植株干重均呈现下降趋势，但不同材料对盐胁迫的响应有较大差异。随着盐浓度的升高，参试材料叶组织中游离脯氨酸含量呈上升趋势，在0.8%和1.0%盐浓度胁迫下，耐盐材料G5和G13的相对游离脯氨酸含量显著高于其它材料（P＜0.05）；而相对细胞膜透性显著低于其它材料（P＜0.05）；APX和SOD酶的活性也随着盐浓度的升高而升高，在0.8%和1.0%盐浓度胁迫下，耐盐材料G5、G13叶组织中APX和SOD的活性显著高于其它材料（P＜0.05）。【结论】20份野生披碱草种质材料在耐盐性上存在较大差异，耐盐性强的披碱草可作为耐盐性种质资源加以利用。植株苗期的游离脯氨酸、细胞膜透性、APX酶和SOD酶活性对盐胁迫浓度的变化响应灵敏，且在耐盐性不同的材料中变化差异显著，可以作为快速鉴定披碱草野生种质材料耐盐性的生理生化指标。

耕作栽培·生理生化

转PEPC+PPDK双基因水稻的光合特性

中国农业科学. 2008, 41(10): 3008-3014 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.013

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【目的】系统研究ATP处理后转PEPC+PPDK双基因水稻的光合特性,证明ATP是增强转C4基因水稻光合能力的关键因子。【方法】以原种和转PEPC+PPDK双基因水稻为材料，进行了PCR检测，C4光合酶活性的测定。通过ATP处理后，分析了光、温—光合曲线和活性氧代谢有关指标，统计分析了相关的产量构成因素。【结果】原种中虽有全套的C4光合酶，但活性很低。PCR检测出玉米的PEPC和PPDK基因转入普通水稻后，转PEPC+PPDK双基因水稻高表达了C4光合酶活性。在高光和高温条件下，同未施ATP的相比, ATP处理后转PEPC+PPDK双基因水稻光合速率分别提高17%和12%。在光氧化条件下，耐光氧化能力进一步增强，产量提高15%。【结论】ATP处理后,转PEPC+PPDK双基因水稻增强了光合生产力,表明ATP是设计类似C4水稻的关键因子。

不同施氮量条件下灌溉量对小麦氮素吸收转运和分配的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3015-3024 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.014

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【目的】研究灌溉量和施氮量对氮素吸收转运特性的影响及其与籽粒蛋白质含量的关系。【方法】试验在山东农业大学实验农场防雨池栽条件下进行，选取高产强筋小麦品种济麦20为试验材料。利用15N同位素示踪技术，于开花期和收获期分别测定各器官中不同来源氮素的吸收量与分配比例、成熟期籽粒产量、水分利用率等。【结果】施氮量和灌溉量对植株吸氮量、籽粒产量、籽粒蛋白质含量的影响存在互作，其中灌溉量的效应大于施氮量的效应，是影响以上诸项指标的主导因素。同一施氮量条件下，增加灌溉量，成熟期氮素吸收总量增加，但籽粒蛋白质含量降低；随灌溉量增加，土壤氮的吸收量和占总氮量的比例增大，肥料氮的吸收量和占总氮量的比例减小，表明增加灌溉量导致氮素吸收总量的增加主要是通过提高土壤氮的吸收量和占总氮量的比例实现的；增加灌溉量对籽粒蛋白质含量的稀释效应则主要表现为，增加灌溉量抑制开花后营养器官中积累的氮素向籽粒的转移，最终不利于籽粒蛋白质含量的提高。灌溉量不变，施氮量由120 kg•ha-1增加到240 kg•ha-1，各营养器官中氮素的积累量增加，但开花后营养器官中积累的氮素向籽粒的转移率降低，最终籽粒蛋白质含量亦不高。【结论】施氮量为120 kg•ha-1，全生育期灌溉底墒水和拔节水（W2N1）的处理，小麦植株吸收的氮素向籽粒分配量大，开花前营养器官中积累的氮素向籽粒转移率高，籽粒蛋白质含量最高，水分利用率亦最高，但籽粒产量仅为5 534.26 kg•ha-1；施氮量为120 kg•ha-1，全生育期灌溉底墒水、拔节水和开花水（W3N1）的处理，小麦植株吸收的氮素向籽粒分配量、氮素向籽粒转移率、水分利用率均较高，籽粒蛋白质含量达14.54%，籽粒产量达7 411.37 kg•ha-1，是本试验的最佳处理。

镉对玉米幼苗活性氧代谢、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性及其基因表达的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3025-3032 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.015

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【目的】研究镉胁迫对玉米（Zea Mays）幼苗活性氧代谢，超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性及其基因表达的影响。【方法】用营养液培养的方法研究了不同镉浓度（0﹑5﹑20和100μmol•L-1）和处理时间（12﹑24﹑48﹑96和168 h）下玉米幼苗内活性氧代谢、SOD和CAT活性及其基因表达的变化。【结果】镉处理后植株内超氧自由基（）产生速率迅速升高，24 h（叶）或48 h（根）后又逐步下降；H2O2随镉浓度和处理时间的增加而大量积累。镉处理的植物SOD活性开始随镉浓度升高，48 h后被消耗和抑制逐步下降，但后期100μmol•L-1镉处理的活性仍显著高于其它处理；CAT活性除叶中100μmol•L-1镉处理被抑制降低外均被诱导,开始随镉浓度升高，随后随镉浓度和胁迫时间逐步下降。镉诱导的SOD基因表达与其活性变化相似，而CAT基因表达随镉浓度和处理时间逐步增强，说明在玉米幼苗内镉通过抑制SOD的基因转录抑制其活性，而对CAT，镉胁迫导致其产生了翻译后蛋白修饰。【结论】镉处理诱导了玉米幼苗内活性氧产生、SOD和CAT的活性及基因表达增加，随胁迫的加剧，SOD和CAT的活性和SOD表达被抑制，CAT则产生转录后或翻译后修饰。

子叶供氮对不同基因型大豆种子组分的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3033-3041 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.016

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【目的】本研究通过种子快速生长期对3个不同基因型大豆（Evans-低蛋白品种；PI132.217-高蛋白稳定品种；Proto-高蛋白品种）供氮以了解供氮是否能提高种子蛋白质含量并改变种子组分，为大豆合理施氮和育种提供参考。【方法】采用液体组培法，即在植株开花后第18天，采集体积相同的种子，将子叶培养在含氮量不同的营养液中（0、37、75和150 mmol•L-1谷氨酰胺）。在植株开花后的第24，30，36和42天以及在液体组培的第6，12，18和24天，分别收集种子和子叶测定干重（DW）和种子组分。【结果】供氮条件下种子鲜重（FW）和干重的积累速率明显比在植株上快。与植株上种子相比，Evans和Proto在供给 37 mmol•L-1谷氨酰胺时种子生长迅速，蛋白质-N积累量较高；供氮量超过75 mmol•L-1种子中积累较多的非蛋白-N，脂肪积累量下降。PI132.217在供氮条件下种子生长速率和蛋白质含量均未增加，供氮量超过37 mmol•L-1种子脂肪和淀粉含量下降。3个基因型大豆植株供氮能力存在差异，PI132.217植株供氮能力较高（约40 mmol•L-1谷氨酰胺），而Evans和Proto植株供氮力较低（约20 mmol•L-1谷氨酰胺），所以种子生长和蛋白质积累对供氮反应敏感。【结论】由于大豆植株供氮量不足，所以供氮可明显使低蛋白质品种种子蛋白质含量提高，但过量供氮可能因种子细胞中C源不足和N利用率低而限制种子生长和蛋白质积累。不同基因型品种在供氮量和氮利用率上存在遗传差异，通过遗传育种进行基因改良，提高种子的供氮能力和氮代谢能力可能是提高大豆种子蛋白质含量的重要途径。

棉籽包衣淀粉基缓释缩节安的释放特性

中国农业科学. 2008, 41(10): 3042-3051 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.017

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【目的】用改性交联淀粉囊化的缩节安（SRD）对棉花种子进行包衣，研究其在水中和土壤中的释放特性。【方法】用水中溶出法、土壤恒温培养法、14C-DPC同位素标记法和生物试法测试。【结果】SRD在水中的释放动态为S形曲线，完全溶出的时间约为15 min，较对照（CK，缩节安直接拌种）延长10 min左右，在1.5、5和10 min的累积释放率分别相当于CK的40.3%、24.8%和64.0%。SRD在土壤中的释放动态为抛物线，这是释放和降解互相抵消后的结果，SRD累积释放率达到的最高值（此时释放与降解的速度相等）仅为CK的1/3左右，达到最高值的时间较CK推迟约10 d，在土壤中的存留时间为50 d以上，较CK延长2倍多；14C-DPC同位素标记试验表明，种子表面的SRD在土壤中呈非匀速减少，且在70 d内的减少速度一直慢于CK，这使其棉花幼苗体内的14C放射性活度低于CK；SRD包衣种子在出苗后30 d内的株高一直高于CK，0～10 d的株高日增量大于CK，10～20 d与CK相当，20～30 d又大于CK。【结论】SRD具有缓释性能，且呈非匀速释放，这有利于延长缩节安的有效作用期、减少棉田用工、并提高棉花化控技术的标准化水平。

植物保护

水稻播种期对灰飞虱及其传播的条纹叶枯病发生流行的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3052-3059 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.018

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【目的】了解水稻播种期对灰飞虱及其传播的条纹叶枯病发生流行的影响。【方法】2006～2007年2年田间设置4个播种期，调查分析水稻灰飞虱种群动态和条纹叶枯病发病的程度。【结果】播种期是影响条纹叶枯病的重要因子。在浙江北部，单季晚稻随着播种期的推迟，病情递减；秧田期株发病率与播种期的关系可以Weibull方程来描述、与秧田期灰飞虱种群动态曲线下面积（AUCPD，即累计虫日）或高峰期密度则呈Logistic关系；本田稳定期发病率则可以以播种期、秧田期灰飞虱高峰期密度、秧田末期的株发病率来描述，而本田期的AUCPD并不是描述该阶段的发病率的必要变量。【结论】在综合治理中，适期播种是控制该病害流行的最有效方法之一，在浙江北部单季粳稻移栽的适宜播种期为5月底～6月上旬。

黄淮麦区126个小麦品种（系）抗条锈病基因的分子检测

中国农业科学. 2008, 41(10): 3060-3069 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.019

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【目的】鉴定黄淮麦区近年小麦主栽品种和后备品种对当前条锈菌流行小种的抗性水平；了解抗条锈病基因在该区小麦品种中分布状况，为小麦安全生产与品种合理布局提供依据。【方法】以中国小麦条锈菌当前流行小种条中32（CYR32）和水源致病类型14对黄淮麦区126个小麦品种（系）进行苗期抗性鉴定；分别用Yr9（1B/1R）、Yr5、Yr10、Yr15和Yr26基因有效的分子标记检测其在参试品种（系）中的分布状况。【结果】在126个供试材料中，对CY32和水源致病类型14均表现免疫或近免疫的品种（系）只有11个，占8.73%；携带Yr9基因的小麦－黑麦1B/1R 易位系的频率仍高达41.6%；分子检测表明，14份抗CY32的小麦品种（系）中，6份可能含有Yr5基因，4份可能含有Yr10基因，4份可能含有Yr15基因，3份可能含有Yr26基因；周麦17、0020-332和N19等3份材料未检测到上述Yr基因（分子标记）的存在，其对CYR32的抗性可能是受其它未知基因控制。【结论】黄淮麦区小麦品种（系），特别是主栽品种对当前条锈菌流行小种的抗性水平较低，对新小种具有良好抗性的Yr5、Yr10、Yr15和Yr26基因在小麦品种（系）中的分布频率很低，亟待将这些抗条锈病基因转育至小麦品种中。

叶锈菌侵染的小麦细胞间隙液中激发子的分离纯化

中国农业科学. 2008, 41(10): 3070-3076 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.020

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【目的】在已经证明小麦与叶锈菌互作的小麦细胞间隙液（IWF）中存在具有蛋白质性质的激发子活性物质的基础上，以期通过试验得到激发子的纯品制剂，为进一步研究激发子的组成和结构、激发子受体以及寄主产生过敏性反应的信号转导机制提供基础条件。【方法】提取叶锈菌小种165侵染的小麦品种洛夫林10细胞间隙液，通过盐析、凝胶过滤柱层析和离子交换柱层析等分离纯化技术，对IWF中具有激发子活性的蛋白质组分进行分离纯化。【结果】分离出能诱导洛夫林10健康叶片PAL、PO活性增高并诱发洛夫林10悬浮细胞程序性死亡的激发子活性组分。该组分经SDS-PAGE电泳呈现单一条带，分子量约为32 kD。【结论】经硫酸铵分段盐析、凝胶过滤柱层析和离子交换柱层析等方法，从感染叶锈菌小种165的洛夫林小麦叶片细胞间隙液中分离出具有激发子活性的蛋白质组分。

小麦赤霉菌绿色荧光蛋白标记突变体的侵染研究

中国农业科学. 2008, 41(10): 3077-3082 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.021

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【目的】赤霉病是危害大麦、小麦生产的世界性病害，研究病原菌的致病过程对于病害的控制有重要意义。【方法】本研究利用绿色荧光蛋白（GFP）标记的禾谷镰刀菌回复突变体以单花滴注方法进行人工接种研究不同突变体的致病力差异及其在小麦穗部的侵染过程。【结果】269株回复突变体的致病力存在明显分化。接种6 d后，致病力明显降低的突变体，只有接种小穗发病，致病力明显增强的突变体，病症可扩展至5个小穗。GFP荧光信号检测表明，弱致病突变体在接种后仅在接种小穗内生长、延伸，并终止于小穗基部的致密组织处。而强致病力突变体在接种小穗内生长2 d后，即能够通过小穗基部的致密组织到达小麦穗轴，并沿着穗轴内部微管束组织和皮层组织向上和下延伸，侵入邻近小穗。【结论】病原菌在接种小穗中生长后，沿着柱头、子房或内、外稃内表面，经过靠近穗轴的致密组织，侵入邻近小穗，感染整个麦穗，直至到达茎秆。

玉米新病害—鞘腐病研究初报

中国农业科学. 2008, 41(10): 3083-3087 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.022

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【目的】明确中国玉米产区发生的新病害—鞘腐病的症状及其致病病原菌的种类。【方法】田间调查进行症状描述，采集不同地区玉米鞘腐病典型病斑，对分离获得的可疑病原物进行培养、致病性测定以及ITS序列测定分析。【结果】玉米鞘腐病菌的形态学与已报道的层出镰孢菌[Fusarium proliferatum ]相同，ITS序列测定分析该菌与层出镰孢菌的同源性达100%;人工接种寄主表现与田间自然发病相同症状。病菌生长适宜温度为25～30℃，最适温度为28℃。病菌大、小两型分生孢子的萌发适宜温度均为25～30℃。【结论】玉米鞘腐病为中国玉米发生的一种新病害，其病原菌为层出镰孢菌[Fusarium proliferatum （Mats.）Nirenberg]。

斜纹夜蛾核型多角体病毒少多角体遗传突变株的鉴定

中国农业科学. 2008, 41(10): 3088-3093 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.023

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【目的】研究病毒基因感染昆虫宿主的分子机制。【方法】从自然界分离和鉴定斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus，SpltMNPV）的遗传突变株,筛选到少多角体基因突变株-SpltMNPV B型株，克隆该株的少多角体基因（fp25K）。对不同株系SpltMNPV的fp25K进行序列分析、病毒感染的细胞培养和虫体感染试验。【结果】核苷酸序列分析表明，与中国株相比，A型和C型分别发生了4个和3个核苷酸改变，但编码的氨基酸不变；B型株3′端核苷酸发生了多处缺失和一处插入，导致FP25K蛋白C端21个氨基酸改变。病毒感染的细胞培养试验表明，fp25K基因突变导致多角体明显减少的表型。虫体试验表明，感染fp25K突变的SpltMNPV B型株的宿主液化减弱。【结论】SpltMNPV B型株是一株自然的少多角体遗传突变株，该突变株可用于更深入地解析少多角体表型成因、病毒感染后虫尸降解和液化作用的分子机制。

中国西部草地毒草危害及治理对策

中国农业科学. 2008, 41(10): 3094-3103 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.024

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西部草原是中国西部地区居民的主要生活生产资料来源。多年来，受超载过牧、滥垦、滥挖、人口增长等因素的影响，草场大面积沙化和毒草化，使西部地区的自然生态环境遭受严重破坏，制约了西部地区畜牧业生产的可持续发展。毒草的迅速蔓延是造成草地生态失衡的重要生态学问题之一，是草地退化的一个重要指标。笔者在对文献资料分析、归纳的基础上，就中国西部草地近几十年的毒草灾害状况，毒草种类与分布，毒草综合防治及合理利用做以综述。

万隆霉素抗菌活性成分的分离鉴定

中国农业科学. 2008, 41(10): 3104-3109 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.025

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【目的】分离、纯化和鉴定万隆霉素抗菌作用的主要活性成分。【方法】以体外抗枯草芽孢杆菌为活性跟踪指标，通过硅胶柱层析和高效液相色谱等方法，从万隆霉素产生菌GAAS 2507发酵物中分离得到抗菌主要活性成分，采用电喷雾质谱（ESI-MS）、核磁共振谱（1HNMR、13CNMR、DEPT、DQFCOSY、HSQC、HMBC、NOESY）波谱法对其进行结构解析。【结果】波谱结构解析表明抗菌活性成分为Quinomycin C，其对细菌性条斑病菌（MIC值为1.563μg•ml-１）、黄瓜疫病菌（EC50值为1.256μg•ml-1）和节瓜枯萎病菌（EC50值为20.570μg•ml-1）具有明显的抗菌活性。【结论】Quinomycin C是万隆霉素主要活性成分之一。

松油烯-4-醇及其酯类衍生物对家蝇Na+，K+-ATPase活性的抑制作用

中国农业科学. 2008, 41(10): 3110-3115 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.026

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【目的】探讨松油烯-4-醇的杀虫作用机理。【方法】采用点滴法测定了松油烯-4-醇及其6种酯类衍生物乙酸酯（Z1）、丙酸酯（Z2）、丙烯酸酯（Z3）、苯甲酸酯（Z4）、苯磺酸酯（Z5）、对甲苯磺酸酯（Z6）对家蝇成虫的触杀活性及对其体内Na+，K+-ATPase活性的影响。【结果】松油烯-4-醇及其酯类衍生物对家蝇均具有一定的触杀活性，除丙烯酸酯外，其它酯类衍生物的触杀毒力均高于或相当于松油烯-4-醇；活体条件下，7种化合物均对Na+，K+-ATPase具有较强的抑制作用，且随着中毒症状的加剧，对该酶的抑制作用增强；离体条件下，松油烯-4-醇及其乙酸酯、丙酸酯、苯甲酸酯、苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯衍生物对家蝇Na+，K+-ATPase的IC50分别为155.89、197.98、96.02、121.36、124.85、153.74μg•ml-1；分析发现松油烯-4-醇及其酯类衍生物对家蝇24 h的触杀LD50与对Na+，K+-ATPase的IC50之间具有显著相关性。【结论】Na+，K+-ATPase可能是松油烯-4-醇类化合物的主要作用靶标。

苦瓜叶提取物对小菜蛾的拒食活性及有效成分研究

中国农业科学. 2008, 41(10): 3116-3122 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.027

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【目的】从苦瓜叶乙醇提取物中分离鉴定活性成分苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ，测定其对小菜蛾幼虫的拒食和抑制生长发育活性。【方法】用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水依次对苦瓜叶片乙醇提取物进行萃取，结果发现乙酸乙酯萃取物的拒食活性最强。活性组分经柱层析和高效液相色谱等方法分离纯化，并通过核磁共振谱(NMR)和质谱（MS）鉴定出化合物的分子结构。【结果】苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ对小菜蛾2、3龄幼虫的取食有明显的抑制作用。其中，苦瓜素Ⅱ的活性最高，对小菜蛾2、3龄幼虫的拒食中浓度（AFC50）分别为76.69μg•ml-1和116.24μg•ml-1。苦瓜素Ⅰ的活性次之，对小菜蛾2、3龄幼虫的AFC50分别为144.08μg•ml-1和168.42μg•ml-1。同时，苦瓜素I和苦瓜素Ⅱ对小菜蛾幼虫体重增长和存活也有抑制作用。【结论】苦瓜素Ⅱ和苦瓜素Ⅰ对小菜蛾幼虫有很强的拒食作用和抑制生长发育的作用，这些化合物的阐明对理解植物与昆虫的相互关系及其对小菜蛾的控制潜力有重要意义。

土壤肥料·节水灌溉·农业生态环境

不同施肥水平下超级杂交稻对氮、磷、钾的吸收累积

中国农业科学. 2008, 41(10): 3123-3132 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.028

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【目的】探索超级杂交稻对氮、磷、钾养分的吸收利用规律。【方法】于2004年和2005年，选用超级杂交稻品种准两优527和两优293为供试材料，在湖南省5个不同水稻种植生态区进行田间小区试验，研究在农民实际平均施肥量及分别减少和增加25%施肥量条件下，超级杂交稻抽穗期和成熟期植株体内的氮、磷、钾养分含量和吸收积累规律。【结果】无论在抽穗期，还是成熟期，不同施肥水平条件下水稻植株体内氮、磷、钾养分的含量均无显著差异，其在不同地点间的变化幅度低于相应的水稻产量和养分吸收量；养分吸收量差异主要由单位面积干物质生产量不同所引起。在不同施肥水平下，随着产量升高，氮、磷、钾收获指数呈上升趋势，但生产单位稻谷所需养分量呈下降趋势。在产量最高的桂东点，其植株体内氮、磷、钾养分含量和积累量均处于中等水平。【结论】采用多次施肥，不同施肥水平（135～225 kg N•ha-1、29.7～49.5kg P•ha-1、112.1～186.8 kg K•ha-1）对超级杂交稻株体内的氮、磷、钾养分吸收积累影响不明显；随着产量的提高，超级杂交稻对氮、磷、钾养分的吸收利用率也可提高，从而实现高产与养分高效利用的协调统一。

化肥有机肥配施对水稻养分吸收和产量的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3133-3139 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.029

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【目的】综合评价中国南方双季稻地区化肥有机肥配合施用下水稻产量及土壤肥力效应。【方法】在湖南双季稻区第四纪红土发育的稻田上进行连续6年的田间定位试验，比较不施氮肥（PK）、施用等量氮磷钾养分的有机肥（猪粪，M）、化肥（NPK，氮肥为尿素）及化肥有机肥配合施用（NPKM，化肥有机肥氮各占一半）水稻地上部养分吸收量、水稻产量、氮肥利用率及土壤有机质含量变化。【结果】化肥有机肥配施有利于水稻稳产高产，产量（12.2 t•ha-1•a-1）最高，比不施氮肥对照的产量（7.3 t•ha-1•a-1）增加68%；有机无机肥配施有利于水稻中后期干物质累积和养分吸收，提高单位面积总穗数和穗粒数。化肥有机肥配施的氮肥利用率平均为36.3%，土壤有机质含量5年提高了18.5%，均显著高于化肥处理。【结论】化肥有机肥配合施用能提高水稻产量和肥料利用率、减少环境污染、培肥土壤，是南方水稻田简单易行的环境保护性施肥技术。

黄土高原石灰性土壤长期间隙淋洗淹水培养下的氮素矿化过程及其模拟

中国农业科学. 2008, 41(10): 3140-3148 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.030

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【目的】选择描述黄土高原石灰性土壤氮素矿化过程的合适模型，明确可溶性有机氮（soluble organic nitrogen，SON）对矿化模型拟合效果的影响。【方法】采用长期间隙淋洗淹水培养方法，研究了10种黄土高原主要农业土壤在包括和不包括浸提液中有机氮的情况下氮素矿化过程，在此基础上选择①有效积温式；②一级反应式（One-pool模型）；③两部分一级反应式（Two-pool模型）；④带常数项一级反应式（Special模型）对这两种情况下的氮素矿化曲线进行拟合。【结果】发现4种模型在拟合包括SON的氮素矿化曲线时效果更好。从模型均方根误差、估计标准误差、参数误差以及与作物吸氮量的相关分析等比较发现，One-pool模型拟合效果最差，Two-pool模型和Special模型优于有效积温模型，而Special模型参数精度及与作物吸氮量的相关性更高。【结论】综合比较认为Special模型能较好反映石灰性土壤在淹水条件下的氮素矿化过程。

河北果园主分布区土壤磷素投入特点及磷负荷风险分析

中国农业科学. 2008, 41(10): 3149-3157 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.031

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【目的】作为果树生长发育必需的大量营养元素，磷素对生态环境和可持续发展同样具有重要影响。研究果园磷素投入特点及分析磷素负荷特征对加强果园磷素管理具有重要意义。【方法】以河北省主要果园土壤磷素分析、农户投入调查等统计数据为基础，采用盈余法从区域角度分析果园生产体系中的磷素输入输出特点及磷素盈余状况，分析土壤磷负荷风险。【结果】果园磷肥投入量为230.6 kg P2O5•ha-1，主要来源于普钙、二铵和三元复合肥；通过有机肥投入的磷素水平为128.1 kg P2O5•ha-1，主要来源于畜禽粪便，其中畜粪占35.8%，禽粪占25.5%。果园施磷水平以冀东北区和冀中南平原区较高，分别为378.5、195.5 kg P2O5•ha-1。80%的果园磷素样本处于盈余，总体平均盈余量为269.5 kg P2O5•ha-1，最大盈余量超过1 900 kg P2O5•ha-1。施磷过量造成土壤有效磷积累，供磷丰富的果园土壤上磷肥过量的样本占88.5%。土壤磷环境负荷以冀东北区和冀中南平原区的果园较高，总体上果园土壤有效磷高于土壤磷环境风险阈值的样本占33.6%。【结论】河北果园磷素的高量投入给土壤环境带来较大的磷素负荷，这对土壤环境和周围水体造成很大威胁。

南疆主要地表类型土壤风蚀对形成沙尘暴天气的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3158-3167 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.032

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【目的】弄清南疆主要地表类型土壤风蚀对形成沙尘暴天气的影响，为明确该区域沙尘暴主要尘源和科学治理提供依据。【方法】采用美国BSNE集沙仪，在沙尘暴天气条件下对塔里木盆地主要地表类型土壤风蚀状况、输沙率随高度的变化进行观测与采样分析。【结果】不同地表类型的输沙量变化趋势为：裸露、弃耕农田最多，其次为活化灌丛沙堆、沙漠边缘的活动沙丘、乡村道路；而封育砂质农田、覆膜棉田、苜蓿地、冬小麦、棉秆与地膜相间覆盖棉田、林地、棉秆留茬地输沙量较少。种植行向与风向一致时棉田输沙量大，垂直时明显减少。输沙量在0～160 cm高度的分布特征明显与地表类型有关，其中裸露、弃耕农田、活化灌丛沙堆、活动沙丘等植被、残茬覆盖地表类型，输沙量（M，g•cm-2）随高度（Z，cm）变化遵循幂函数M=aZ b规律，在有植被及覆盖条件下的农田、林地等地表，输沙量用多项式M=a+bZ+cZ 2+dZ 3拟合效果最好。输沙量随植被覆盖度和土壤表层含水量的增加呈指数形式减少，当植被盖度达到20%以上或土壤表层含水量达到5%以上时可以明显降低输沙量。【结论】裸露农田、弃耕沙质农田、活化灌丛沙堆、活动沙丘以及乡村道路的风蚀程度严重，是南疆沙尘暴天气沙尘的主要来源。在农区，扩大冬小麦、多年生牧草等冬春绿色覆盖作物种植，实行保护性耕作制；在绿洲与沙漠过渡带，采取禁止放牧及合理开垦，实行天然封育和弃耕地改造；对乡村道路实现硬化，是南疆控制土壤风蚀、减少沙尘暴沙尘源的重要途径。

园艺

不同氮素形态对番茄幼苗碳、氮积累的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3168-3176 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.033

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【目的】探讨番茄幼苗生长及其根系、叶片碳氮积累动态对无机氮（NH4+-N、NO3--N），氨基态氮（Glycine）的不同响应。【方法】采用2个番茄品种（‘申粉918’、‘沪樱932’），水培条件下设置相同氮浓度（3.0 mmol•L-1 N）的NH4+-N、NO3--N、Glycine（甘氨酸）3个处理，测定番茄幼苗株高、干物质重、叶绿素含量、根系活力、根系叶片碳氮含量和植株总氮量。【结果】在无机氮（NH4+-N、NO3--N）和氨基态氮（Gly-N）存在的营养介质中，番茄幼苗在处理前期（如处理后8 d或16 d）的株高、生物量、植株总氮量等各处理间差异不显著，而其后则表现为NO3--N＞Gly-N > NH4+-N，处理间差异显著，且品种间差异显著（P＜0.05）。Gly-N处理显著提高了番茄幼苗叶片的叶绿素含量，NH4+-N培养导致番茄根系活力显著下降。不同氮素形态对番茄叶片的全碳含量影响不大，而NH4+-N、Gly-N处理则显著提高了番茄根系全碳、叶片及根系全氮含量，且NH+4-N处理的增加效应大于Gly-N处理。在处理前期（如处理后8 d或16 d），植株全碳积累量表现为NO3--N＞NH4+-N＞Gly-N，而其后则表现为NO3--N＞Gly-N＞NH4+-N；植株氮吸收量均表现为NO3--N＞Gly-N＞NH4+-N。【结论】氮素形态不同，对植物产生的生理效应不同。氨基态氮（Gly-N）也可以成为番茄生长的氮源。不同品种对氨基态氮的吸收利用能力不同。

类囊体膜脂不饱和度的增加对番茄耐盐性的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3177-3183 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.034

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【目的】探讨类囊体膜脂脂肪酸组成与耐盐性的关系。【方法】以野生型（WT），转反义番茄叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶（LeFAD7）基因株系T2-8（-）和转正义LeFAD7基因株系T2-7（+）为试材，测定了类囊体膜脂脂肪酸组成，盐胁迫后的光合参数，叶绿素荧光参数和叶绿体活性氧清除酶活性。【结果】转正义基因番茄植株类囊体膜脂中亚麻酸（18﹕3）含量升高，亚油酸（18﹕2）含量下降，导致膜脂脂肪酸不饱和程度升高，而转反义基因番茄植株类囊体膜脂不饱和脂肪酸含量下降。盐胁迫下亚麻酸含量高的转正义基因植株的PSII最大光化学效率（Fv/Fm）和光合速率（Pn）下降程度较小，而转反义基因植株的下降程度较大。与WT相比，盐胁迫下转正义基因植株维持较高的叶绿体超氧化物歧化酶（SOD）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性，和H2O2的含量较低。【结论】番茄类囊体膜脂不饱和脂肪酸含量的增加提高了番茄光合机构的耐盐性。

砂梨品种‘满天红’及其芽变品系‘奥冠’花青苷合成与相关酶活性研究

中国农业科学. 2008, 41(10): 3184-3190 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.035

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【目的】研究红色砂梨花青苷合成与苯丙氨酸解氨酶（PAL）和查尔酮异构酶（CHI）活性的关系。【方法】以红色砂梨‘奥冠’及其亲本‘满天红’为试材，研究果实着色过程中果皮中花青苷含量和PAL、CHI酶活性的变化，以及套袋对花青苷合成和相关酶活性的影响。【结果】在果实着色过程中，‘奥冠’花青苷含量高于‘满天红’，两个品种花青苷变化趋势基本一致，呈现先升高后下降的趋势；两品种PAL活性总体变化趋势基本一致，都呈下降趋势，且‘奥冠’PAL酶活性总体低于‘满天红’；并且，两品种CHI酶活性呈现相似的变化趋势，总体呈上升趋势；同时，‘奥冠’CHI酶活性高于‘满天红’；套袋抑制了‘奥冠’CHI酶的活性，也抑制了花青苷的合成，但对PAL酶活性的影响不明显；解袋后CHI酶活性和花青苷含量迅速上升，均超过了对照。但解袋对‘奥冠’果实PAL酶活性的影响不明显；并且，套袋‘奥冠’花青苷含量在果实成熟时下降。【结论】红色砂梨花青苷含量在果实着色早期上升，接近果实商品成熟期下降。PAL不是红色砂梨花青苷合成的关键酶，CHI与着色期砂梨花青苷含量关系密切。解袋后，‘奥冠’通过提高CHI酶的活性促进花青苷的合成。套袋试验表明：砂梨花青苷果实成熟时的降解不单是由光诱发的。光是花青苷合成的必需因素，同时又促进花青苷的降解。

桃PGIP蛋白基因片段的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

中国农业科学. 2008, 41(10): 3191-3199 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.036

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【目的】克隆桃（Prunus persica）多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白（polygalacturonase-inhibiting protein，PGIP）基因，并进行原核表达研究。【方法】根据李属植物pgip保守区域设计1对特异引物，以桃叶片总RNA为模板，通过RT-PCR获得了约1 kb的cDNA片段，T/A克隆后进行序列测定，并对该序列进行分析。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)中，构建融合表达质粒，转化到Escherichia coli Rosetta-gami（DE3）pLysS中进行表达。【结果】测序结果显示，桃多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白cDNA编码区长993 bp，编码330个氨基酸残基，命名为Pppgip。PpPGIP分子量为36.4 kD，等电点为7.42，信号肽为N端24个氨基酸残基，具有7个潜在的N-糖基化位点。Pppgip与李属其它pgip核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为93.2%～94.6%和89.7%～92.7%。同源树分析表明，该基因明显区别于其它pgip，与马哈利樱桃pgip的关系较近，与寿星桃、桃栽培品种‘久保’等pgip的关系都较远。该基因所编码的蛋白质的三维结构含11个α-螺旋和21个β-折叠，中心LRR结构域由10个串联的LRRs基序组成。原核表达产物经SDS-PAGE分析表明，重组蛋白主要以包涵体形式出现。【结论】克隆了桃PGIP基因，并可在大肠杆菌中表达。

‘红肉脐橙’八氢番茄红素合成酶基因的克隆与原核表达

中国农业科学. 2008, 41(10): 3200-3207 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.037

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【目的】克隆、分析‘红肉脐橙’（Citrus sinensis Osbeck cv. Cara Cara）八氢番茄红素合成酶（phytoene synthase，PSY）基因，并进行原核表达。【方法】以‘红肉脐橙’果实中分离的mRNA为模板，通过RT-PCR扩增到PSY cDNA片段，并分析其序列；利用PCR技术获得‘红肉脐橙’PSY cDNA的编码区全长，并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)，获得重组质粒pET-CitPSY转化大肠杆菌BL21（DE3）并诱导表达。【结果】‘红肉脐橙’PSY cDNA长1 520 bp，最大开放读码框为1 308 bp，可编码436个氨基酸，核酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其它植物PSY核酸、氨基酸序列之间的相似性分别在75%和70%以上，并且发现‘红肉脐橙’PSY的N末端存在转运肽信号序列，成熟的PSY包含1个跨膜结构域。原核表达获得了具有较高表达水平的融合蛋白6×His-PSY，Western-blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应，分子量约为52 kD。【结论】该研究为进一步开展柑橘果实色泽分子改良奠定了基础。

‘星都1号’和‘星都2号’草莓及其亲本果实挥发性物质的分析

中国农业科学. 2008, 41(10): 3208-3213 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.038

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【目的】研究草莓的特征香味成分的异同和遗传趋势，为草莓的香味育种提供依据。【方法】以草莓品种‘星都1号’和‘星都2号’及其母本‘全明星’和父本‘丰香’4个品种为试材，采用顶空固相微萃取和气相色谱——质谱联用技术，分析各自果实香气成分。【结果】‘星都1号’的挥发物质共50种，香味物质有己酸甲酯、己酸乙酯、丁酸甲酯、丁酸乙酯、辛酸甲酯、辛酸乙酯和己酸异戊酯等；‘星都2号’的挥发物质共71种, 主要香味物质与姊妹系‘星都1号’非常类似。‘全明星’的挥发物质共55种，主要有丙酮、乙酸-1-甲基-乙酯、1-辛醇、己酸乙酯和丁酸甲酯等；‘丰香’的挥发物质共43种，主要有己酸乙酯、橙花叔醇、1-辛醇、己酸甲酯、辛酸乙酯、乙酸辛酯和己酸异戊酯等。‘星都1号’和‘星都2号’中丁酸甲酯、丁酸乙酯、己酸甲酯、己酸乙酯和己酸异戊酯受到父母本的共同影响。香味醇类（橙花叔醇、沉香醇和1-辛醇）在‘丰香’中含量最高，‘星都1号’、‘星都2号’和‘全明星’含量均较低。母本挥发物中丙酮和乙酸-1-甲基-乙酯含量最高，两个后代居中，父本中没有检测到这两种物质。【结论】己酸甲酯、己酸乙酯、丁酸甲酯、丁酸乙酯和己酸异戊酯受到父母本的共同影响，丙酮和乙酸-1-甲基-乙酯主要来自母本遗传。香味醇在父本中含量高，母本和后代含量低。

贮藏·保鲜·加工

羊骨蛋白酶解物免疫活性及酶解条件的研究

中国农业科学. 2008, 41(10): 3214-3221 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.039

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【目的】利用羊骨中胶原蛋白以获得免疫调节活性肽。【方法】利用木瓜蛋白酶对羊骨蛋白进行酶解，采用四元二次通用旋转设计，考察酶用量（E/S）、水解温度（Temp）、水解时间（t）和底物浓度（S）对免疫活性的影响，并选出最佳的酶解条件。同时采用Folin-酚法测定了酶解产物中可溶性肽的含量，采用SAS软件分析可溶性肽含量与免疫活性之间的相关关系。经Design expert 7.1.2软件优选最佳酶解条件。【结果】得出木瓜蛋白酶的最佳水解条件为：酶用量（E/S）1 576 U•g-1，水解温度为（Temp）64.05℃，水解时间（t）7.22 h，底物浓度为（S）0.271 kg•L-1。可溶性肽含量与免疫活性之间的相关系数r=0.045

原子力显微镜技术在多糖研究中的应用

中国农业科学. 2008, 41(10): 3222-3228 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.040

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简单介绍了原子力显微镜（AFM）的原理和工作模式，详细叙述了利用AFM研究多糖时的样品制备方法及影响成像的因素，并综述了AFM在多糖分子的形态观察和定量研究方面的进展，介绍了AFM在研究多糖单分子力学谱方面的工作和AFM对糖基构象变化过程的测定和调控，还对AFM在多糖研究中的进一步应用提出了展望。

外源钙对唐菖蒲切花的保鲜效果和生理效应

中国农业科学. 2008, 41(10): 3229-3239 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.041

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【目的】探讨乙酸钙对唐菖蒲切花的保鲜效果和生理效应，为乙酸钙在唐菖蒲切花保鲜上的应用提供理论依据。【方法】以唐菖蒲红色品种‘马加烈’切花为材料，瓶插在含有乙酸钙或钙离子专一性螯合剂乙二醇二乙醚二胺四乙酸（EGTA）的溶液中，分析乙酸钙对切花观赏品质的影响以及第1和第3朵小花内钙调素（CaM）、脱落酸（ABA）、赤霉素（GA）、玉米素（ZRs）、Ca2+、丙二醛（MDA）和可溶性糖含量的变化。【结果】乙酸钙处理后唐菖蒲切花的小花开放率显著高于对照，2 mmol•L-1乙酸钙处理的切花日观赏值、瓶插寿命以及平均观赏值均高于其它钙浓度处理和对照，所以2 mmol•L-1的乙酸钙对唐菖蒲切花有较佳的保鲜效果。和对照相比，乙酸钙（2 mmol•L-1）使唐菖蒲花瓣和苞叶的CaM和内源激素GA含量以及GA/ABA、ZRs/ABA升高，使内源激素ABA含量降低，并且减弱EGTA（20 mmol•L-1）对这些指标的影响。乙酸钙（2 mmol•L-1）还提高唐菖蒲花瓣和苞叶的Ca2+含量，降低这两部位的MDA含量，使可溶性糖含量在花瓣中高于对照，在苞叶中低于对照。【结论】用乙酸钙溶液瓶插切花时，不仅可以降低切花的MDA含量，稳定膜结构，而且可能激活CaM，调节花瓣和苞叶中的内源激素水平，调运切花中苞叶等处的可溶性糖到花瓣中，促使小花开放，并延长切花寿命。

现代化工艺金华火腿肌肉水分活度变化规律研究

中国农业科学. 2008, 41(10): 3240-3248 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.042

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【目的】研究金华火腿肌肉水分活度变化与原料腿型、肌肉部位和腌制用盐量的关系，为确定不同规格原料腿的加工安全性和制订现代化工艺金华火腿原料标准提供依据。【方法】采用现代化工艺加工金华火腿，测定了不同原料腿型、肌肉部位和腌制用盐量的肌肉水分活度。【结果】金华火腿肌肉水分活度随加工进程呈现规律性降低，盐渍期间浅层肌肉水分活度下降迅速，加工后期变缓，而股二头肌的水分活度在整个加工期间相对匀速下降，最终内外层趋于均衡。加大腌制用盐量能够促进浅层肌肉水分活度快速下降，但不利于加工后期水分活度的均衡分布；皮下脂肪厚度增加会延缓内外层肌肉水分活度的下降速度和均衡速度，经过腌制过程后其影响变小。原料腿重量越大，肌肉水分活度越高，加工后期尤其明显。加工结束时所有火腿各部位肌肉水分活度都在0.88以下，表现出良好的贮藏安全性。【结论】火腿各加工阶段水分活度受原料腿重量、皮下脂肪厚度和腌制用盐量等因素影响。

畜牧·资源昆虫

TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及HSP70蛋白表达的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3249-3255 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.043

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【目的】探讨TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡和HSP70蛋白表达的影响。【方法】TGF-β1作用乳腺上皮细胞不同时间，收集细胞及培养液，应用MTT检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡率、比色法检测LDH活性、琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性、Western bolt 技术分析HSP70蛋白的表达量。【结果】1、5、10 ng•ml-1的TGF-β1均能抑制乳腺上皮细胞的增殖，且随浓度增加抑制作用加大，呈现剂量依赖性，其中10 ng•ml-1 TGF-β1组与对照组差异显著（P＜0.05）；10 ng•ml-1 TGF-β1作用于乳腺上皮细胞, 随着作用时间的延长，细胞凋亡率逐渐升高，其中6、12和24 h与对照组相比差异极显著（P＜0.01）；LDH活力随作用时间延长而升高，12、24 h与对照组差异极显著（P＜0.01）；DNA完整性随 TGF-β1作用时间的延长发生不同程度降解；TGF-β1作用2～6 h细胞大量表达HSP70，6 h达到高峰，而后下降，2～12 h的表达量均极显著高于对照组（P＜0.01）。【结论】TGF-β1可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖，具有浓度依赖性。10 ng•ml-1 TGF-β1可以显著增加细胞凋亡率，提高细胞培养液中LDH活力，使细胞DNA发生不同程度的降解，同时HSP70蛋白随TGF-β1作用时间发生显著的表达变化。本试验结果表明，TGF-β1可以以促进上皮细胞凋亡的方式，促进奶牛乳腺发生退化。

海带岩藻聚糖及其级分在氧化应激条件下对肉鸡巨噬细胞免疫功能的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3256-3263 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.044

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【目的】在氧化应激条件下，研究海带岩藻聚糖及其级分对肉鸡巨噬细胞免疫功能的影响，初步探讨海带岩藻聚糖及其级分的免疫调节功能与抗氧化作用的关系。【方法】以叔丁基过氧化氢（tBOOH）为活性氧诱导剂，加入肉鸡腹腔巨噬细胞培养液中，测定细胞培养液中抗氧化酶的变化，巨噬细胞分泌一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、以及细胞因子IL-1和TFN-α等免疫指标的变化。【结果】用tBOOH处理后的巨噬细胞，细胞存活率显著下降（P＜0.05），乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）显著升高（P＜0.05），SOD和GSH-Px酶活性显著降低（P＜0.05）。巨噬细胞的吞噬活性显著降低（P＜0.05），NO、iNOS和呼吸爆发显著降低（P＜0.05），细胞因子IL-1分泌量显著下降（P＜0.05），表明细胞出现明显的氧化损伤。在培养液中加入海带岩藻聚糖及其级分，能够缓解细胞的氧化应激，使得细胞存活率上升，LDH和MDA降低，SOD和GSH-Px升高，免疫指标均有不同程度的恢复。【结论】海带岩藻聚糖及其级分具有抗氧化活性，不同级分的抗氧化活性存在差异，其中级分Ⅲ、级分Ⅳ的作用较强。海带岩藻聚糖对巨噬细胞的免疫促进作用与其抗氧化活性有关。

高温及氧化应激对体外培养肉鸡骨骼肌线粒体功能的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3264-3269 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.045

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【目的】研究高温和氧化应激对体外培养肉鸡骨骼肌线粒体功能的影响，初步探讨高温影响肉鸡肌肉品质的机制。【方法】从16只2周龄AA肉鸡的左右小腿后侧分离腓骨长肌，使用不锈钢支架维持肌肉束的正常长度，在95%O2、5%CO2混合气体饱和条件下，体外孵育2 h。分别测定升高孵育温度或在培养介质中添加邻苯三酚后，肉鸡腓骨长肌线粒体活性氧（ROS）产量、钙泵（Ca2＋-ATPase）活性和乳酸含量的变化。【结果】升高培养温度显著提高肉鸡骨骼肌线粒体H2O2的产生量（P＜0.0001），导致肌肉脂质过氧化（P＝0.0368），抑制线粒体钙泵活性（P＝0.0001），增加乳酸积聚（P＜0.0001），并影响肌纤维膜的完整性，使肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）的流失量增加（P =0.0009，P =0.0114），而培养介质中添加邻苯三酚对肉鸡腓骨长肌产生相似的影响。【结论】高温影响线粒体功能，增加肌肉乳酸浓度，损伤肌纤维膜完整性，这些影响与高温诱导的氧化应激有关。

PPAR基因在鹅肥肝形成中的可调节性表达

中国农业科学. 2008, 41(10): 3270-3276 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.046

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【目的】为了探讨填饲前和填饲后鹅PPAR的表达规律，测定心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌胃、十二指肠、全脑、胸肌、腿肌和腹脂中RT-PCR产物量，分析该基因表达量对肥肝重和腹脂重的影响。【方法】通过测定填饲前和填饲后鹅的各组织中PPAR的RT-PCR产物量，以GAPDH为参考，用Quantity One软件分析吸光值。【结果】填饲前鹅组织中PPAR-α表达量普遍较高；填饲后PPAR-α表达量在肺脏中显著增加，在腹脂中也有表达，在其它组织中表达量均下降。填饲前鹅组织中PPAR-γ表达量在肝脏、脾脏、肺、十二指肠和腹脂中较高，在其它组织中较低，填饲后PPAR-γ表达量在心脏、脾脏、肺、肌胃、肾脏中升高，在腹脂中下降，在其它组织中基本持平。【结论】PPAR的表达具有组织特异性，而且PPAR-α和PPAR-γ变化不一致，这可能与不同组织中PPAR亚型的功能差异性相适应的。

家蚕溶茧酶基因的克隆、序列分析及原核表达

中国农业科学. 2008, 41(10): 3277-3285 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.047

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【目的】获得家蚕溶茧酶基因的全长序列，实现溶茧酶基因在大肠杆菌中的融合表达。【方法】利用cDNA末端扩增技术（RLM-RACE）克隆了家蚕溶茧酶基因cDNA序列（GenBank 登录号：EF428980）。【结果】家蚕溶茧酶基因cDNA序列全长1 047 bp，其中780 bp的蛋白质编码区可编码260个氨基酸，预测蛋白质分子量为27.6 kD，等电点（pI）为8.89。家蚕溶茧酶基因包含4个内含子。用Signal P 3.0 Server程序分析家蚕溶茧酶基因，预测其从第1～22位为信号肽序列。SMART分析结果预测其第34～254位氨基酸序列具有类胰蛋白的丝氨酸蛋白酶活性。重组质粒pET-32a-Cocoonase 转化E.coli BL21进行原核表达，SDS-PAGE分析结果表明,家蚕溶茧酶基因以融合蛋白形式表达，相对分子量为48 kD。【结论】本研究成功地克隆、表达了家蚕溶茧酶基因，分析和预测了它的结构和功能，为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。

家蚕核型多角体病毒orf90基因在Bac-to-Bac家蚕杆状病毒系统中快速表达

中国农业科学. 2008, 41(10): 3286-3291 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.048

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【目的】利用BmNPV的Bac-to-Bac系统快速表达目的基因orf90，为深入研究该基因打下基础。【方法】将目的基因BmNPV orf90 克隆到转移载体pFasBacHTb上，并将报告基因egfp插入到orf90的3'末端，形成重组转移载体pFasBacHTb-egfp-90。在将其转化到含穿梭载体bacmid的感受态细胞DH10Bac中，通过转座作用，经白斑筛选得到重组穿梭载体。纯化DNA，用脂质体介导转染家蚕BmN细胞，得到重组病毒bacmid-egfp-90。【结果】转染细胞72 h后在荧光显微镜下可以观察到强烈的绿色荧光。重组病毒穿刺接种家蚕蛹，5 d后观察到很强的荧光。结果表明构建的Bac-to-Bac系统能在家蚕细胞和蛹体中正确的快速表达外源基因。【结论】证明BmNPV的Bac-to-Bac是一个快速表达系统，适合在家蚕上广泛应用。

王浆高产蜜蜂(A.m.ligustica)与喀尼鄂拉蜂(A.m.carnica)幼虫期蛋白质组比较

中国农业科学. 2008, 41(10): 3292-3299 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.049

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【目的】对王浆高产蜜蜂(A. m. ligustica，浆蜂）与喀尼鄂拉蜂(A. m. carnica，喀蜂）工蜂幼虫期进行蛋白质组比较，以探明两蜂种幼虫期不同日龄蛋白质表达调控方面的异同。【方法】采用双向电泳对浆蜂与喀蜂工蜂幼虫期蛋白质组进行研究。【结果】在幼虫期2日龄，浆蜂的蛋白表达谱为283个蛋白，喀蜂为152个蛋白，两蜂种共有蛋白点为110个，其中24个点浆蜂表达量显著大于喀蜂，15个蛋白喀蜂表达量显著大于浆蜂，而浆蜂特异蛋白为173个，而喀蜂特异蛋白为42个；幼虫4日龄时，浆蜂总蛋白点数为290个，喀蜂总蛋白点数为240个蛋白，两蜂种共有蛋白点为163个，其中24个点浆蜂表达量显著大于喀蜂，15个蛋白喀蜂表达量显著大于浆蜂，而浆蜂特异蛋白为126个，喀蜂特异蛋白为77个；到达幼虫6日龄时，浆蜂蛋白组含236个蛋白，喀蜂蛋白质组含180个蛋白，两蜂种共有蛋白点为132个，其中22个点显示浆蜂表达量显著大于喀蜂，11个蛋白喀蜂表达量显著大于浆蜂，而浆蜂特异蛋白为104个，喀蜂特异蛋白为48个。【结论】在蜜蜂幼虫期浆蜂较喀蜂表达的蛋白总数和特有蛋白多，说明浆蜂较喀蜂幼虫的基因表达和代谢更加旺盛。在2蜂种幼虫期表达的共有蛋白中，其中一些蛋白的表达量存在差异，而2蜂种在3个日龄所表达的特有蛋白的数和量也存在一定差异，这些说明幼虫发育需要管家蛋白和不同发育阶段相应的特定蛋白来调控，但管家蛋白和特有蛋白在2蜂种的表达模式存在差异。

兽医

c-Fos参与羊驼小肠黏膜淋巴细胞生发中心的调控

中国农业科学. 2008, 41(10): 3300-3304 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.050

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【目的】研究转录因子c-Fos与凋亡相关蛋白Caspase3在羊驼小肠黏膜淋巴组织的表达，探索c-Fos与羊驼小肠黏膜淋巴细胞生发中心的关系。【方法】用免疫组织化学技术研究c-Fos蛋白与Caspase3蛋白在羊驼十二指肠和空肠淋巴组织的表达。【结果】免疫组织化学结果显示羊驼十二指肠黏膜淋巴细胞较少，c-Fos蛋白主要表达于空肠黏膜下淋巴组织生发中心，在黏膜下淋巴组织向固有层淋巴组织过渡区域有散在表达，在固有层弥散淋巴组织中c-Fos阳性表达细胞较少。Caspase3蛋白主要表达于空肠黏膜固有层淋巴组织，在黏膜下淋巴组织生发中心很少表达，在黏膜下淋巴组织向固有层弥散淋巴组织过渡区域Caspase3有散在表达。【结论】c-Fos参与羊驼空肠黏膜下淋巴组织生发中心增殖与分化的调控。

鸭瘟弱毒疫苗诱导IgA、IgM和IgG产生规律的研究

中国农业科学. 2008, 41(10): 3305-3310 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.051

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【目的】探讨鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中抗体发生的规律。【方法】将DPV弱毒苗Cha株经皮下、口服和滴鼻途径免疫20日龄樱桃谷鸭后60 d内定时随机剖杀5只鸭，采集血清、气管和消化道（食道、十二指肠、空肠和直肠）分泌液，应用间接ELISA检测抗DPV的IgA、IgM和IgG抗体滴度（以lg表示）。【结果】所有免疫鸭检测样品中均可检测到DPV特异性IgG、IgM和IgA抗体。血清中抗体滴度由高到低均为IgG、IgM和IgA，其中IgM检出时间最早，IgG存留时间最长。皮下免疫DPV弱毒苗可更早诱导鸭血清中生成特异性IgG，且抗体滴度最高；气管和消化道分泌液中抗体滴度由高到低均为IgA、IgM和IgG，其中IgA和IgM检出时间最早，IgA存留时间最长。口服和滴鼻途径免疫鸭消化道和气管分泌液中IgA滴度较皮下免疫鸭高。【结论】不同途径免疫鸭瘟弱毒疫苗均可迅速诱导免疫鸭体液免疫介导的黏膜免疫和系统免疫。以DPV特异性IgA为主要抗体的黏膜免疫在预防DPV强毒早期对鸭消化道和呼吸道等局部黏膜的感染中具有十分重要的作用，使DPV弱毒疫苗快速产生免疫保护的机制从黏膜免疫的角度得到一定程度解释。

喹诺酮类药物抗体制备研究进展及策略分析

中国农业科学. 2008, 41(10): 3311-3317 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.052

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氟喹诺酮类（Fluoroquinolones，FQs）各单体药物之间的化学结构极其类似，通常针对某一个药物制备的抗体对多种氟喹诺酮具有广谱识别性，是易于建立多残留免疫分析的代表性药物。本文综述了氟喹诺酮抗体制备和食品中的免疫分析研究进展，分析了已发表文章中以不同氟喹诺酮为半抗原所获得抗体对其它氟喹诺酮的交叉反应，并应用SYBYL.7.0程序包以MMFF94力场优化了8种批准用于动物的氟喹诺酮最低能量构象，从二维和三维构象角度对制备广谱氟喹诺酮抗体的策略进行了探讨，理论上提出了制备广谱氟喹诺酮抗体的途径。

高效液相色谱法检测猪组织中硝基咪唑类药物残留

中国农业科学. 2008, 41(10): 3318-3325 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.053

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【目的】建立猪肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中羟基地美硝唑、洛硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑和奥硝唑残留的高效液相色谱（HPLC）测定法。【方法】样品中硝基咪唑类药物用二氯甲烷萃取，盐酸反萃取。盐酸溶液用K2HPO4碱化，再用二氯甲烷反萃取，萃取液于40℃水浴中旋转真空蒸干。残余物用流动相0.5 ml溶解，进样分析。色谱柱为Hypersil ODS2，紫外检测器，检测波长320 nm。以甲醇﹕水（14﹕86，V﹕V）为流动相，进样量20μl。【结果】6种药物标准液浓度在0.005～2.0μg•ml-1时，与响应值呈良好线性关系，相关系数均＞0.999。羟基地美硝唑、洛硝唑和甲硝唑在肌肉和脂肪组织中检测限为0.5μg•kg-1，在肝脏和肾脏中为1.0μg•kg-1；替硝唑、地美硝唑和奥硝唑在肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中均为1.0μg•kg-1。空白样品添加药物浓度为0.5～4.0μg•kg-1时，6种药物的回收率为60％～83％，日间变异系数均＜15％。【结论】该方法能灵敏、准确的检测猪组织中硝基咪唑类药物。

研究简报

玉米温热杂交种光周期敏感相关性状的遗传模型研究

中国农业科学. 2008, 41(10): 3326-3335 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.054

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【目的】分析玉米温热杂交种的光周期敏感特性及相关性状的遗传模型。【方法】以9份北方温带选系和8份含热带、亚热带种质的南方选系，按NCⅡ设计组配72个温热杂交种，分别在北京和雅安进行田间试验。【结果】供试温热杂交种总体均表现出较强的光周期敏感性，ASI等10个性状为温热杂交种光周期敏感性相关性状。其遗传模型大多数符合加性-显性遗传模型，少数属于加性-显性-上位性遗传模型；多数性状以加性效应为主，非加性效应为辅，随着日照变长，加性效应的主导地位更加突出。【结论】将热带、亚热带玉米种质利用于温带玉米遗传改良及育种时，应注重相关性状的加性基因效应。

SSR标记开发软件SSR MINING 1.0的编制

中国农业科学. 2008, 41(10): 3336-3342 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.055

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【目的】研制利用生物信息学方法通过分析数量迅速增加的EST序列开发SSR标记的有力工具。【方法】通过对SSR标记本身的特点以及排列组合原理的分析，提出快速有效的SSR标记开发算法，并应用Visual Basic6.0程序设计语言进行相关软件的开发。对2004年8月2日至2005年6月12日之间公布在NCBI上的22 161条大豆EST序列，进行了SSR标记的检索。【结果】通过对现存SSR标记开发软件中所存在的问题的总结与分析，编制完成SSR标记开发软件SSR MINING 1.0。经过检索共发现2 068个SSR标记，应用DNAMAN对其中30个标记进行了引物设计，并合成进行试验验证，最终获得了14个具有多态性的SSR标记。【结论】SSR MINING 1.0是一个高效、灵活、界面友好、使用简便的SSR标记开发软件。

甘蓝型油菜芥酸含量的基因分析

中国农业科学. 2008, 41(10): 3343-3349 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.056

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【目的】芥酸含量是油菜非常重要的品质性状，研究芥酸含量的遗传模式为低芥酸和高芥酸育种提供指导。【方法】应用多世代联合分析数量性状主基因和多基因混合遗传的统计方法,分析了甘蓝型油菜组合1141B×垦C1的5个世代——亲本P1,P2,F1,F2和F2﹕3家系材料芥酸含量的遗传效应。【结果】分离世代F2及F2﹕3家系芥酸含量次数分布均呈混合的正态分布，符合主基因＋多基因的遗传特征；E-1模型为芥酸含量的最适合性模型，即芥酸含量遗传是由2对加-显-上位性主基因+加-显多基因控制的。2对主基因加性效应值da、db分别为-16.26和-2.83，表明亲本1141B中主基因位点上的等位基因降低芥酸含量，而亲本垦C1中的等位基因增加芥酸含量。显性效应值ha、hb分别为10.93和-4.71，第一对主基因加性效应值和显性效应绝对值均高于第二对主基因显性效应值。因此，2对主基因控制芥酸含量，第一对主基因控制的芥酸含量高于第二对主基因。该组合2对主基因间互作效应明显，加性与加性效应互作值（i）为-1.21，显性与显性互作值（l）为-3.27。第一对主基因的加性效应与第二对主基因的显性效应互作值（jab）为5.70，第二对主基因的加性效应与第一对主基因的显性效应互作值（jba）为-7.25。其芥酸含量还受多基因控制，多基因加性效应（[a]）值为-0.08，多基因显性效应（[d]）值为2.32；F2的主基因遗传力和多基因遗传力分别为50.00%和16.62%；F2﹕3的主基因遗传力和多基因遗传力分别为89.70%和6.01%。【结论】芥酸含量是由2对加-显-上位性主基因+加-显多基因控制的，第一对主基因控制的芥酸含量高于第二对主基因。低芥酸和高芥酸育种中在F2﹕3家系进行选择效率较高。

估算水稻叶面积指数的调节型归一化植被指数

中国农业科学. 2008, 41(10): 3350-3356 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.057

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【目的】叶面积指数（LAI）是描述植物冠层结构、群落生长分析和陆地生态系统研究的重要参数，提高叶面积指数的估算精度是遥感工作者的重要研究方向之一。【方法】通过不同氮素营养水平的水稻小区实验，利用2004年中稻高光谱反射率数据，模拟中等分辨率成像光谱仪（MODIS）前四个通道，提出包含蓝、绿、红和近红外四个谱段的调节型归一化植被指数ANDVI（adjusted-normalized difference vegetation index）。对ANDVI和归一化植被指数NDVI（normalized difference vegetation index）、增强型植被指数EVI（enhanced vegetation index）、绿波比值指数GRI（green ratio index）、红边比值指数RRI（red-edge ratio index）等5个光谱植被指数与水稻LAI的相关关系进行了分析。利用2004年晚稻试验数据，对与LAI相关关系较好的ANDVI进行验证。【结果】ANDVI指数模型预测效果最好，均方根误差为1.771，估算精度达到63.1%。【结论】说明ANDVI具有进行在大面积范围内监测水稻LAI的能力。

ABA诱导的玉米保卫细胞胞质钙离子浓度的变化

中国农业科学. 2008, 41(10): 3357-3362 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.058

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【目的】以玉米第二真叶下表皮为材料，研究ABA诱导的保卫细胞胞质Ca2+浓度的变化，并探讨Ca2+来源。【方法】通过数字激光共聚焦显微镜测定ABA诱导的胞质钙离子浓度变化，并通过异搏啶、EGTA[乙二醇双（2--氨基）乙基醚-N,N,N’,N’四乙酸]药理实验探讨钙离子的来源。【结果】ABA不能诱导所有的保卫细胞胞质钙离子浓度的增加，而可被ABA诱导的保卫细胞中又表现了不同的钙离子浓度变化形式。异搏啶预处理后，不能改变保卫细胞对ABA的反应，但EGTA预处理，则抑制了ABA诱导的胞质钙离子浓度升高。此外，气孔运动观察结果显示：ABA可以明显的诱导气孔关闭，但EGTA、异搏啶的预处理延缓了ABA诱导的气孔关闭速度。【结论】ABA作用下，保卫细胞胞质Ca2+浓度或不发生变化，或持续高浓度，或发生逐渐升高，形成不同的钙信号，最终造成气孔不同步关闭；ABA诱导的胞质钙离子升高主要源自胞外钙离子内流。

叶面喷施甜菜碱在烟草叶片保水和耐脱水中的作用

中国农业科学. 2008, 41(10): 3363-3370 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.059

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【目的】从保水和耐脱水这一新的角度，研究叶面喷施甜菜碱在烟草抗旱中的作用。【方法】烟草叶面喷施甜菜碱两周后，进行脱水和复苏处理。【结果】叶面喷施5～15 mmol•L-1甜菜碱对水分适宜条件下的烟草株高和光合速率并未显著影响，但叶片叶绿素含量呈现增加的趋势；喷施20 mmol•L-1甜菜碱的烟草株高却显著低于对照，叶片发黄，光合速率下降。喷施5～15 mmol•L-1甜菜碱的烟草叶片在脱水过程中不仅能够保持较高的肉质化程度，而且其质膜及PSⅡ能保持更好的稳定性，其中喷施10～15 mmol•L-1甜菜碱的效果最好；但喷施20 mmol•L-1甜菜碱的叶片PSII活性小于对照。而喷施甜菜碱的叶片脱水24 h后的复苏能力都显著好于对照。【结论】叶面喷施甜菜碱的叶片保水和耐脱水能力显著提高，喷施甜菜碱的最适浓度为10～15 mmol•L-1。

基于遥感和WebGIS的冬小麦估产支持系统

中国农业科学. 2008, 41(10): 3371-3375 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.060

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【目的】建立Web环境下冬小麦估产的业务化运行体系，解决冬小麦遥感估产业务化运行不足，运行效率低等问题。【方法】基于面向对象的编程技术，采用Java语言，结合ESRI的开发包MapObject for Java以及管理工具ArcSDE、ArcCatalog和ArcIMS，通过在Web上集成遥感估产和GIS，构建了Web环境下的冬小麦估产支持系统。【结果】客户端通过浏览器访问远程服务器，可以实时地获取远程服务器发布的冬小麦生长信息，并进行产量预测，从而解决了遥感估产网络环境下的运行问题。【结论】本文提出了Web环境下的冬小麦估产研究方法和框架体系，实现了冬小麦估产业务化运行系统，系统运行结果良好，是对Web环境下遥感估产的探索性研究。

小麦与条锈菌非亲和互作的cDNA文库构建及表达序列标签分析

中国农业科学. 2008, 41(10): 3376-3381 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.061

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【目的】了解小麦受条锈菌诱导后的基因表达情况，从分子水平揭示寄主与病原菌非亲和互作机理。【方法】以小麦品种水源11和条锈菌CY23号小种组成的非亲和组合为材料，利用SMART技术构建条锈菌诱导的小麦叶片cDNA文库。随机挑取克隆测序，对其中获得的507条高质量表达序列标签（EST）进行生物信息学分析。【结果】得到原始文库的滴度为1.2×106 pfu•ml-1，扩增文库滴度2×109 pfu•ml-1，重组率97%，插入片段大小为0.4～3 kb。对获得的237个非重复序列进行BLAST分析，已知功能基因大部分与能量代谢、蛋白质合成修饰及加工、转运、信号转导、防卫反应等相关。【结论】该cDNA文库质量较高，信息丰富，获得的已知功能基因中能量和代谢相关约占40%，抗病与防御相关约占17.1%，这些信息有利于在分子水平上研究小麦与条锈菌互作机制，为进一步克隆小麦与条锈菌互作中的相关重要基因及功能分析奠定基础。

黄瓜品系WIS2757对黄瓜枯萎病生理小种4和黑星病的抗性遗传与连锁分析

中国农业科学. 2008, 41(10): 3382-3388 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.062

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【目的】黄瓜枯萎病和黑星病是危害中国黄瓜生产的两种主要病害，明确黄瓜品系WIS2757对黄瓜枯萎病生理小种4和黑星病的抗性基因遗传与连锁关系，为黄瓜抗病育种提供重要依据。【方法】以抗枯萎病生理小种4和黑星病的黄瓜材料WIS2757和感病材料津研2号为亲本，获得98个F3代株系，分别对双亲、F1和F3代株系进行苗期抗枯萎病和黑星病接种鉴定，并根据鉴定结果对枯萎病与黑星病的抗性遗传及两个抗病基因的连锁关系进行分析。【结果】亲本WIS2757抗枯萎病生理小种4和黑星病，津研2号高感两种病害。F1群体抗两种病害。根据F3株系对两种病害的抗病表现推断F2对应株的抗病基因型并进行卡方测验，结果表明，F2群体对枯萎病和黑星病的抗性分离均符合1﹕2﹕1的理论比例，而两对等位抗病基因的遗传不符合9﹕3﹕3﹕1的理论分离比例。连锁分析表明，黄瓜抗枯萎病生理小种4和黑星病的两对等位基因位于同一连锁群，两者的遗传距离为17.5 cM。【结论】WIS2757对枯萎病和黑星病的抗性均由单显性基因控制，将抗枯萎病生理小种4的基因暂定名为Foc-4。Foc-4和抗黑星病基因Ccu间存在遗传连锁关系。

培养基对解淀粉芽孢杆菌ES-2菌株产抗菌脂肽的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3389-3398 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.063

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【目的】研究培养基对解淀粉芽孢杆菌ES-2菌株产生抗菌脂肽的影响，为选择合适的产抗菌脂肽的培养基提供指导。【方法】通过HPLC技术对培养基中的碳、氮源对ES-2菌株抗菌脂肽组分的影响进行试验。【结果】改进的Landy培养基抗菌脂肽产量较高；葡萄糖是ES-2菌株产生脂肽的良好碳源，特别是对surfactin的产生有明显的促进作用；蔗糖和乳糖也是产生fengycin的良好碳源；L-谷氨酸和L-天门冬酰胺是抗菌脂肽产生的良好氮源；而不同的氨基酸组合并不有利于抗菌脂肽的产生；实验结果还显示，6种脂肪酸对抗菌脂肽的产生起到抑制作用。【结论】改进的Landy合成培养基是ES-2菌株产生脂肽适宜的培养基，在抗菌脂肽生产中向培养基中加入合适种类的糖和氨基酸十分重要。

露地和大棚条件下阿维菌素在蔬菜作物上的残留消解动态比较

中国农业科学. 2008, 41(10): 3399-3404 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.064

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【目的】比较研究露地条件与设施条件下阿维菌素在蔬菜作物上消解动态差异。【方法】采用柱前衍生高效液相色谱法分别测定露地条件和大棚条件下1.8%阿维菌素乳油制剂在西兰花和甘蓝上的残留降解动态和最终残留量。【结果】按推荐使用剂量（4 000×）、2倍推荐使用剂量（2 000×）、4倍推荐使用剂量（1 000×）使用后，露地条件下阿维菌素在西兰花上的起始浓度分别为113.89、256.74、785.73 μg•kg-1，降解半衰期分别为1.63、1.46和2.16 d；在甘蓝上的起始浓度分别为53.04、138.42、353.18 μg•kg-1，降解半衰期分别为1.67、1.42和1.77 d。大棚条件下阿维菌素在西兰花上的起始浓度分别为133.00、372.27、1 060.74 μg•kg-1，降解半衰期分别为5.49、5.23和5.33 d；在甘蓝上的起始浓度分别为73.70、201.04、502.76 μg•kg-1，降解半衰期分别为4.59、4.53和4.43 d。【结论】阿维菌素在大棚条件下使用时在蔬菜作物上的起始浓度（C0）均明显大于露地条件的相应值，它们比在露天条件下更难降解，降解半衰期更长。

利用稻米垩白度分析软件测量叶片相对病斑面积

中国农业科学. 2008, 41(10): 3405-3409 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.065

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【目的】提出一种利用稻米垩白度分析软件Chalkiness 1.0测量衡量植物叶片病害综合指标之一叶片相对病斑面积（RLA）的方法。【方法】通过扫描或拍照获得病害叶片的数字图像；然后利用图像处理软件（如Photoshop）对图像进行处理，最重要的是用肉眼识别病斑并用“画笔工具”涂黑，使叶片中的病斑明晰化；最后利用Chalkiness 1.0计算出图像中的RLA。【结果】用本方法对稻瘟病叶上病斑的相对面积进行测量。比较5次重复测量的结果，发现该方法重复性好，误差小。【结论】该方法简单、快速、准确，具有广阔的应用前景。

储存玉米膜脂过氧化与生理指标的研究

中国农业科学. 2008, 41(10): 3410-3414 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.066

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【目的】研究储存玉米品质变化的生理生化机制，寻找评判玉米储存品质的指标。【方法】对同一区域不同储存年限玉米样品的过氧化氢酶（CAT）活性、过氧化物酶（POD）活性、电导率、丙二醛（MDA）等4个细胞膜脂过氧化指标和生活力、发芽率、呼吸强度第3个生理指标进行研究。【结果】随储存时间的延长，MDA含量增加，细胞质膜透性增大，保护酶类活性均逐渐降低；生活力、发芽率、呼吸强度呈极显著相关性（P＜0.01），4个膜质损伤指标与3个生理指标呈显著和极显著的相关性。【结论】自由基损伤导致的玉米籽粒内部抗氧化酶活性的降低、细胞膜质过氧化程度的加深及细胞膜透性的增加是储存玉米品质变化的重要因素。

不同苦瓜品种的皂苷含量及对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的比较

中国农业科学. 2008, 41(10): 3415-3421 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.067

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【目的】比较35个苦瓜品种的果肉和籽粒中皂苷含量及其对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的差异。【方法】选用华南地区的35个主要苦瓜品种为材料，分别测定其果肉和籽粒中皂苷含量及对α-葡萄糖苷酶的抑制率，其中皂苷含量测定采用高氯酸-香草醛-冰醋酸法，而对α-葡萄糖苷酶的抑制率测定采用比色法, 品种之间的差异采用新复极差法，果肉和籽粒两个组织部位之间差异采用t检验，品种聚类分析采用系统聚类法。【结果】不同品种果肉和籽粒中皂苷含量及其对α-葡萄糖苷酶的抑制率之间表现出显著的基因型差异，其中果肉和籽粒中皂苷含量变幅分别为1.17%～4.07 %和0.16%～1.54%，变异系数分别为32%和38%，平均值分别为1.96%和0.74%；对α-葡萄糖苷酶的抑制率变幅分别为2.40%～34.53%和7.77%～30.07%，变异系数分别为46%和36%，平均值分别为17.96%和14.96%；果肉中的皂苷含量及对α-葡萄糖苷酶的抑制率显著高于籽粒；通过系统聚类法可将35个苦瓜品种聚为4类，分别包含16、6、12和1个品种。【结论】不同苦瓜品种的皂苷含量及对α-葡萄糖苷酶的抑制率存在显著差异，且同一苦瓜品种果肉中的皂苷含量及对α-葡萄糖苷酶的抑制率高于籽粒。

苦马豆素对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

中国农业科学. 2008, 41(10): 3422-3428 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.068

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【目的】探索苦马豆素（SW）与小鼠腹腔巨噬细胞功能之间的关系，为SW免疫研究提供新的试验依据。【方法】将70只小鼠随机分为7组，其中5组分别按0.05、0.2、0.8、3.2和6.4 mg•kg-1每天灌服SW生理盐水，连续21 d，另2组为生理盐水和空白对照组。收集小鼠腹腔巨噬细胞，经脂多糖（LPS）诱导活化，用ELISA法检测TNF-α生成，酶法检测一氧化氮合酶（NOS）活性，化学法检测H2O2浓度，MTT比色法检测杀伤肿瘤细胞活性及吞噬中性红能力。【结果】SW剂量在0.2～3.2 mg•kg-1之间，能够提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬和杀伤活性﹑NOS活性，促进TNF-α和H2O2生成，且均呈剂量效应关系；6.4 mg•kg-1 SW对小鼠巨噬细胞的活性具有抑制作用。【结论】低剂量SW可以通过提高NOS活性介导巨噬细胞信号传递通路，促进TNF-α和H2O2生成，发挥其吞噬和杀伤功能；高剂量SW对小鼠巨噬细胞免疫功能起抑制作用。提示，SW对小鼠腹腔巨噬细胞具有双向调节作用。