摘要： 【目的】利用Cre/lox系统具有的特异重组特性，以绿色荧光蛋白GFP为目的基因，获得无选择标记的GFP转基因烟草。【方法】将Bar基因表达盒置于两个同向lox位点之间并与GFP基因表达盒融合后获得相应植物表达载体，转化烟草后获得抗除草剂Basta的GFP转基因植株。GFP转基因植株叶盘二次转化导入重组酶Cre基因后，实现与GFP基因连锁的Bar基因表达盒剔除，剔除Bar基因的植株开花后自交使重组酶Cre基因分离，获得无选择标记的GFP转基因烟草。【结果】将含Bar基因表达盒以及GFP基因表达盒的植物表达载体转化烟草Wisconsin 38后获得了抗除草剂Basta以及GFP荧光表达的转基因植株。随机抽取5株转基因植株二次转化导入Cre基因，所获得的再生植株叶盘进行Basta的抗性检测，绝大多数单株对应叶盘在含8 mg•L-1 PPT（phosphinothricin）的筛选培养基上无法再生死亡，删除效率在76%～100%。对Bar基因删除后区域片段进行克隆测序分析显示，Bar基因表达盒已经被精确删除。Bar基因删除植株开花后自交，获得的自交后代进行NPTⅡ抗性检测，NPTⅡ敏感植株分子检测显示均只含有GFP基因。【结论】利用Cre/lox系统获得烟草无选择标记的转基因植物是稳定可行的,可广泛应用于其它无选择标记转基因植物的培育。

关键词: Cre/lox定位重组系统, 无选择标记转基因烟草, 绿色荧光蛋白, 转基因