中国农业科学 ›› 2008, Vol. 41 ›› Issue (10): 3286-3291 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.048

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家蚕核型多角体病毒orf90基因在Bac-to-Bac家蚕杆状病毒系统中快速表达

  

  1. 江苏大学生命科学研究院

  • 收稿日期:2007-01-29 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-10-10 发布日期:2008-10-10
  • 通讯作者: 陈克平

  

  1. 江苏大学生命科学研究院

  • Received:2007-01-29 Revised:1900-01-01 Online:2008-10-10 Published:2008-10-10

摘要:

【目的】利用BmNPV的Bac-to-Bac系统快速表达目的基因orf90,为深入研究该基因打下基础。【方法】将目的基因BmNPV orf90 克隆到转移载体pFasBacHTb上,并将报告基因egfp插入到orf90的3'末端,形成重组转移载体pFasBacHTb-egfp-90。在将其转化到含穿梭载体bacmid的感受态细胞DH10Bac中,通过转座作用,经白斑筛选得到重组穿梭载体。纯化DNA,用脂质体介导转染家蚕BmN细胞,得到重组病毒bacmid-egfp-90。【结果】转染细胞72 h后在荧光显微镜下可以观察到强烈的绿色荧光。重组病毒穿刺接种家蚕蛹,5 d后观察到很强的荧光。结果表明构建的Bac-to-Bac系统能在家蚕细胞和蛹体中正确的快速表达外源基因。【结论】证明BmNPV的Bac-to-Bac是一个快速表达系统,适合在家蚕上广泛应用。

关键词: BmNPV Bac-to-Bac表达系统, orf90, egfp基因