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【背景】脂肪沉积对猪肉的风味、嫩度和色泽有着重要影响，硬脂酰辅酶A去饱和酶（stearoyl-CoA desaturase, SCD）在调控脂质代谢过程中发挥关键作用，其中家族成员硬脂酰辅酶A去饱和酶-5（stearoyl-CoA desaturase 5, SCD5）作为单不饱和脂肪酸（monounsaturated fatty acid, MUFA）限速酶，调控单不饱和脂肪酸组成与三酰基甘油（TAG）含量。然而SCD5在脂滴（Lipid droplet, LD）生物发生过程中具体影响尚不明确。三元基序蛋白家族成员15（Tripartite Motif Containing 15, TRIM15）通过调节TAG代谢影响脂滴生物发生，并且在SCD5缺失后其表达量显著下降，两者之间的调控关系及其在脂滴形成过程中的作用机制仍有待深入探讨。【目的】探究SCD5对脂滴生物发生的调控作用以及SCD5是否通过TRIM15介导脂滴的形成与积累，进一步揭示SCD5在脂质代谢中的作用机制，为猪肉品质性状的遗传改良提供理论支持。【方法】本研究通过猪肾细胞（porcine kidney-15, PK-15）系利用CRISPR/Cas9 技术构建PK-15 SCD5敲除细胞系，通过转染SCD5过表达载体构建PK-15 SCD5过表达细胞系，以及在小鼠成肌细胞（C2C12）中过表达SCD5。利用Bodipy染色流式细胞术分析脂滴含量；利用Bodipy染色、共聚焦成像和油红O染色观察脂滴数量，探究SCD5对脂滴生物发生过程的作用。随后对PK-15 SCD5缺失细胞进行RNA-seq测序发现TRIM15显著下调，通过RT-qPCR和Western blot验证TRIM15的表达量，并构建TRIM15过表达载体在PK-15 SCD5缺失细胞中过表达TRIM15，探讨SCD5和TRIM15在LD生物发生过程中的作用。【结果】Bodipy染色流式细胞术结果表明在PK-15 SCD5缺失细胞中脂滴含量显著降低，过表达SCD5显著增加脂滴含量；在C2C12中过表达SCD5结果相同。Bodipy染色共聚焦成像和油红O染色结果显示，SCD5缺失显著降低了PK-15细胞LD的数量而过表达SCD5后LD的数量显著增加；在C2C12细胞中异位表达SCD5则结果与之相同；对PK-15 SCD5缺失细胞进行RNA-seq测序后分析，GO和KEGG富集分析揭示SCD5与多细胞生物发育和脂质代谢途径相关，表明SCD5调控脂质代谢。通过对调控脂质代谢的基因进行分析发现TRIM15下调最为显著，这表明SCD5可能通过TRIM15调控脂质代谢。在PK-15 SCD5缺失细胞中过表达TRIM15，Bodipy染色流式细胞术以及Bodipy染色和油红O染色结果表明TRIM15增加了PK-15 SCD5缺失细胞的脂滴含量同时PK-15 SCD5缺失细胞中的LD数量显著增加。【结论】SCD5通过调控TRIM15的表达来介导LD生物发生进而调控LD的数量，调控脂肪沉积，这为猪肉品质改良提供了理论支持。
规律间隔成簇短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR）相关蛋白（CRISPR-associated protein, Cas）基因编辑技术不仅引发了生命科学领域的革命性发展，还在农业领域带来了翻天覆地的变革。作为CRISPR基因编辑系统的重要分支，CRISPR-Cas12a系统凭借其独特的分子特征，在生物育种和疾病诊断领域展现出区别于经典CRISPR-Cas9系统的应用潜力。相较于II型Cas9系统，V型的Cas12a蛋白只有一个RuvC-Nuc核酸酶结构域，与Cas9蛋白的HNH-RuvC双核酸酶结构域形成鲜明对比。Cas12a切割靶DNA产生交错型双链断裂（double-stranded DNA break，DSB），并保留了CRISPR RNA（crRNA）和Cas12a的“R环（R-loop）”。R环的保留是CRISPR-Cas12a基因编辑系统拥有“附带切割”特性和开发核酸和小分子检测技术的结构基础。Cas12a识别富含胸腺嘧啶的原间隔区相邻基序（protospacer adjacent motif，PAM），是CRISPR-Cas基因编辑系统的有效补充，其依赖crRNA的自主加工能力显著区别于Cas9的反式激活CRISPR RNA（tracrRNA）依赖系统，在多基因同步编辑方面展现出更大的优势。Cas12a的以上特性使其在农作物遗传改良中取得突破性进展——已成功培育出抗病、高产的商业化农作物品种。在基础研究方向，失活的Cas12a（dCas12a）与转录调控或表观修饰元件融合表达，可实现不产生DSB的精准基因表达调控；其与等温扩增技术联用可实现疾病的可视化检测。本文从V型Cas蛋白的分类、Cas12a在细菌内的作用原理和Cas12a与crRNA复合体的功能结构域等方面系统地介绍了CRISPR-Cas12a基因编辑系统；从靶向RNA的加工原理、Cas效应蛋白的功能结构、基因编辑的效果和应用4个方面对比了CRISPR-Cas12a和CRISPR-Cas9两套基因编辑系统；从基因调控、表观修饰和碱基编辑3个方面阐述了CRISPR-dCas12a和CRISPR-dCas9激活和抑制系统；从核酸、蛋白质和小分子3个方面阐述了CRISPR-Cas12a系统在分子检测领域的作用原理；从基因调控、碱基编辑、物质检测、疾病诊断和生物育种几个方面系统阐述了CRISPR-Cas12a在农业生产中的应用。随着引物编辑等更加安全的非DSB依赖技术的发展，CRISPR-Cas12a系统将在作物精准育种、畜禽遗传改良和临床快速检测等领域发挥更重要的作用，为应对全球粮食安全挑战和传染病防控提供创新性解决方案。
【目的】明确谷氨酰胺是否可以通过PI3K途径减弱胎衣不下奶牛母体胎盘因氧化应激而引发的内质网应激作用，探讨谷氨酰胺的保护机制。【方法】依据产后12 h内胎衣能否正常排出作为胎衣不下组（retained fetal membranes， RFM）奶牛和健康组（NRFM）奶牛的判定标准，选择胎衣不下组奶牛与健康组奶牛各3头。在明确胎衣不下组与健康组奶牛血清中谷氨酰胺（glutamine，Gln）的含量的基础上，采用qRT-PCR和 Western blot方法检测两组奶牛母体胎盘组织中内质网应激（GRP78、p-PERK、PERK、p-IRE1α、IRE1α、ATF6）和细胞凋亡关键因子（Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、P53、Bcl-2、Bax）的表达变化情况。在体外试验中，使用400 μmol·L-1的H2O2对奶牛子宫内膜上皮细胞（uterine caruncleepithelial cells，UCE）进行刺激，构建了体外奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激细胞模型。在该氧化应激细胞模型的基础上分别进行Gln预处理、PI3K抑制剂（LY294002）与谷氨酰胺共同预处理，采用免疫荧光技术检测细胞质中Ca2+的浓度变化，采用 qRT-PCR和 Western blot方法检测奶牛子宫内膜上皮细胞中内质网应激与凋亡相关指标的表达变化。【结果】当奶牛发生胎衣不下时，其血清Gln含量显著降低（P<0.01），其胎盘组织中内质网应激相关蛋白和基因GRP78（P<0.01）、p-PERK/PERK、p-IRE1α/IRE1α、ATF6（P<0.05）表达显著升高，凋亡相关蛋白与基因P53（P<0.01）、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax/Bcl-2（P<0.05）表达显著降低。在体外氧化应激模型中，H2O2 刺激后UCEs中内质网应激相关蛋白和基因GRP78、p-PERK/PERK、p-IRE1α/IRE1α、ATF6（P<0.01）表达显著升高，与凋亡相关蛋白与基因P53、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax/Bcl-2（P<0.01）表达显著升高，细胞质中Ca2+浓度显著升高（P<0.01）。而与内质网应激组相比，Gln预处理后降低了细胞内质网应激与凋亡水平（P<0.01），细胞质中Ca2+ 浓度显著降低（P<0.01）。但当PI3K被抑制时，与仅使用谷氨酰胺预处理的Gln保护组相比，Gln无法降低奶牛子宫内膜上皮细胞中内质网应激与细胞凋亡相关蛋白与基因的表达，细胞质中Ca2+浓度显著升高（P<0.01）。【结论】当奶牛发生胎衣不下时，母体胎盘组织发生较强的内质网应激与细胞的异常凋亡，细胞的正常功能受损，是引发胎衣外排障碍的重要诱因。高水平的Gln可以通过PI3K/AKT途径调控内质网应激关键蛋白的表达，缓解因内质网应激造成的细胞功能障碍，从而减轻因氧化应激引发的内质网应激造成的胎衣外排障碍。
【目的】 饲料转化效率（feed conversion rate，FCR）是畜禽生产中一个重要的经济性状指标，通过对肠道菌群与小分子代谢物的分析，探讨调控肉鸡FCR的影响因素。【方法】 选择健康状况良好、同批次0日龄麻黄鸡雏鸡，自由采食和饮水，在57日龄时选择500只发育正常体重相近（（2 374.96±214.39）g）的公鸡转入测定舍，适应期3 d，60日龄正式测定，试验期18 d，根据自动喂料系统测定结果在上市日龄（78日龄）分别选取高饲料转化率（HF）和低饲料转化率（LF）各20只屠宰，分离肠道，测定肠道长度、形态，收取盲肠食糜，利用16S rRNA测序和全局精准非靶向代谢组学分析了肉鸡HF和LF盲肠微生物和小分子代谢物差异并进行关联分析。【结果】 （1）与LF组相比，HF组的日增重显著降低（P<0.05），FCR显著升高（P<0.05），空肠长度显著降低（P<0.05），直肠长度显著升高（P<0.05），空肠绒毛高度/隐窝深度比显著降低（P<0.05）。（2）与LF组相比，HF组的Chao1、Shannon、Observed_species、Faith_pd指数显著降低（P<0.05），HF与LF组β多样性差异显著（P<0.05）。LF组LDA值大于3的差异属有：布劳特氏菌属_A、巴恩斯氏菌、马西利亚斯特科尔氏菌属、乳头杆属、光冈菌属、副鼠杆菌、UBA738。HF组LDA值大于3的差异属有：脱硫弧菌属、拟普雷沃氏菌属、肠单胞菌属。（3）筛选到32个差异代谢物，其中去氨酪氨酸、β-胡萝卜素、6-磷酸甘露糖等差异倍数较大。在这些差异代谢物中脂肪酰基、苯及取代衍生物比较多。（4）与FCR值显著相关的微生物（P<0.05）有：乳杆菌属、布劳特氏菌属_A、副鼠杆菌。与FCR值显著相关的代谢物（P<0.05）有：苯乙胺、β-胡萝卜素、抗生素 JI-20A、反式-肉桂酸甲酯、黄嘌呤核苷、3-甲氧基邻氨基苯甲酸酯、邻苯二甲酸、烟酰胺、γ-L-谷氨酰-D-丙氨酸、5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸、对羟基苯丙酸、1-棕榈酰甘油磷脂酰胆碱、磷酸胆碱。代谢物γ-L-谷氨酰-D-丙氨酸与微生物布劳特氏菌属_A呈显著正相关，代谢物磷酸胆碱与微生物肠单胞菌属呈显著正相关。【结论】 肉鸡FCR与肠道微生物及其代谢物相关，乳杆菌属、布劳特氏菌属A、巴恩斯氏菌、光冈菌属可能是影响饲料转化效率的重要微生物。去氨酪氨酸、β-胡萝卜素、黄嘌呤核苷、γ-L-谷氨酰-D-丙氨酸、磷酸胆碱是影响饲料转化效率的重要代谢物。肠道微生物可直接影响FCR，也可通过微生物代谢产物影响FCR，微生物-代谢物关联表明了影响FCR特定的作用途径。
【目的】 肌内脂质的组成与含量是影响风味和嫩度的重要因素，与牛肉品质紧密相关。通过比较南阳牛背最长肌与里脊组织脂质特征和基因表达模式，鉴定调控南阳牛不同肌肉组织脂质特征的潜在候选基因，为优质牛肉分子育种提供理论依据。【方法】 选用生长环境和遗传背景相同的成年南阳牛背最长肌和里脊组织为试验材料，采用气相色谱质谱联用（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）、液相色谱质谱联用（liquid chromatography mass spectrometry，LC-MS）与转录组测序技术（RNA sequencing，RNA-seq），构建肌肉组织的脂质图谱与基因表达谱，鉴定差异脂质分子（differential lipid molecules, DLMs）和差异表达基因（differentially expressed genes, DEGs），进行功能富集分析及蛋白质互作网络分析（protein-protein interaction network, PPI）筛选潜在候选基因，并采用实时荧光定量PCR技术（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）进行表达水平验证。【结果】 在肌肉组织间共检测到19种脂肪酸，其中C18:0、C14:1n5和C16:1n7的含量在组织间存在显著差异。共检测到2 106种脂质分子，其中磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine，PC）、甘油三酯（triacylglycerols，TG）和磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine，PE）为主要成分。通过差异分析在肌肉组织间共筛选到39种DLMs和3 424个DEGs，经受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC）分析鉴定到13种DLMs（如：DG（16:0_18:1）、DG（18:0_18:1）、DG（18:0_18:2））可作为组织间的潜在脂质生物标志物。PPI和MCODE分析获得3个与脂质代谢密切相关的核心基因模块，通路富集分析显示，DEGs与DLMs共同参与肌醇磷酸代谢、甘油酯代谢和甘油磷脂代谢通路。整合分析鉴定到19个调控脂质特征差异的潜在候选基因，其中7个基因（PLCG2、SYNJ1、LPIN1、DGKZ、DGAT1、LPL和SELENOI）居于通路中的关键位置，对DLMs具有直接调控作用。RT-qPCR结果显示6个脂质候选基因的表达趋势与RNA-seq结果一致。【结论】 在南阳牛背最长肌与里脊组织间鉴定到13种潜在脂质生物标志物，筛选到19个潜在候选基因参与脂质特征调控的关键代谢通路，为今后进一步探究南阳牛脂质差异形成的调控机制及优质牛肉分子育种提供理论基础。
杂种优势是遗传结构不同群体的杂交后代在生活力、繁殖力以及适应力等方面优于亲本群体的平均值或者超过亲本群体的现象，是一种重要的遗传资源。杂种优势在现代农业中发挥着重要作用，有助于提高畜禽和农作物的产量和品质、快速改良性状、加速培育新品种和增加遗传多样性等，进而高效提升畜牧业和种植业的生产效率，降低成本。虽然杂种优势的发现已逾百年，但其遗传基础的解析远远落后于其在农业生产中的应用。杂种优势复杂形成机制的研究是遗传育种领域的一个经典话题和活跃前沿，但得到明确的结论却十分有限。针对杂种优势的表现特点，科学家先后提出显性学说、超显性学说和上位学说等多种杂种优势形成的假说，揭示杂种优势的遗传基础是非加性遗传效应，但是这些假说均是基于单基因效应而言，过于理想化和简单化；DNA、RNA和蛋白质等不同水平上的探索陆续发现多效应并存的现象。尤其在水稻和玉米等杂交育种作物上陆续开展的相关研究挖掘了杂种优势效应位点，丰富了对作物杂种优势形成机制的认知，推动了精准分子设计育种等作物育种技术的变革。杂种优势在猪、鸡等畜禽的育种中也广泛应用，畜牧业发达国家80%以上的商品猪肉、鸡肉和鸡蛋均通过杂交品种获得。高效应用杂种优势服务于生产，提前评估杂种优势是必要的。群间和群内表型方差比预测法、杂种遗传力预测法、分子标记预测法，这些新方法有助于解决通过传统的杂交试验的方法来预测杂种优势的周期长、易受环境影响和人力财力消耗大等问题，但是预测的准确性具有局限性。杂种优势涉及多个层面的相互作用，而且畜禽遗传背景复杂，育种周期长，使得畜禽杂种优势形成的机制研究和准确的预测方法依然面临挑战。近年来，测序技术的逐步应用，为理解畜禽杂种优势的分子调控网络提供了新的视角。QTL定位和全基因组关联分析从基因组水平上揭示杂种优势的分子机制，筛选相关的分子标记应用于畜禽品种的选择和选配。结合多组学研究，如转录组和代谢组，影响杂种优势的关键功能基因、变异及其代谢物能被更精确地定位，有助于杂交改良。本综述系统阐述了畜禽领域杂种优势形成机制和预测方法方面的研究进展，展望未来的研究会将通过结合多组学测序数据和生信分析来逐步阐明杂种优势的复杂机理，鉴定与杂种优势相关的基因、分子标记，并创新杂种优势的预测方法，为杂种优势利用提供更准确的方向。
【目的】通过建立检测胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis, LI)的夹心ELISA方法，进行猪增生性肠炎（porcine proliferative enteropathy, PPE）灭活疫苗研制中抗原含量的测定。【方法】以LI为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗LI多克隆抗体；同时免疫6周龄BALB/c小鼠，通过杂交瘤细胞技术制备抗LI单克隆抗体。用Western Blot、间接免疫荧光试验（IFA）和免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）对制备的抗体进行鉴定。将单克隆抗体作为捕获抗体，多克隆抗体作为检测抗体，建立检测LI的夹心ELISA方法，优化反应条件，并对该方法进行特异性、敏感性和重复性评价。用优化后的检测方法对灭活后的LI进行定量检测。【结果】制备的多克隆抗体效价达1﹕409 600。经三轮亚克隆后共筛选出3株阳性杂交瘤细胞，分别命名为1B7、3C7、4F10，腹水效价均为1﹕204 800。3株单克隆抗体均与LI发生特异性反应，与肠致病性大肠杆菌(E. coli O157:H7)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerasuis, S. Choleraesuis)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S. typhimurium)均无交叉反应。夹心ELISA方法经优化后条件为 : 捕获抗体为4F10；捕获抗体与检测抗体的工作浓度分别为1.25和0.625 μg·mL-1；包被液为磷酸盐缓冲液，包被条件为4 ℃ 14 h；封闭液为1%明胶，封闭条件为37 ℃ 1.5 h；抗原孵育条件为37 ℃ 1 h；检测抗体孵育条件为37 ℃ 0.5 h；酶标抗体稀释度为1﹕16 000，孵育条件为37 ℃ 1.5 h；显色条件为室温孵育10 min。该方法对其他常见的肠道病原菌检测均为阴性，对LI的最低检测限为1×105个/mL，且批内、批间变异系数均小于10%。LI浓度在1×105—1×108个/mL范围内与P/N值呈线性关系，标准方程 : y=2.7349x-11.643（R 2=0.9966）。使用该方法对该实验室制备的PPE灭活疫苗进行抗原定量，结果显示灭活前后抗原含量基本不变，且两组疫苗样品定量结果批内重复性良好。120份猪临床粪便样品检测结果显示，用夹心ELISA方法共检出62份阳性样品，58份阴性样品；用巢式PCR方法共检出67份阳性样品，53份阴性样品。二者的阳性符合率为86.6%，阴性符合率为92.5%，总符合率为89.2%，kappa值为0.78。【结论】成功制备针对LI的多克隆抗体与单克隆抗体，建立并优化了检测LI抗原的夹心ELISA检测方法。该方法特异性与重复性良好，对LI的检测限为1×105个/mL。可用于PPE灭活疫苗制备过程中抗原的定量检测及PPE临床样品的检测。
猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）是一种具有囊膜的单股正链RNA动脉炎病毒。PRRSV感染猪后引起猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS），导致妊娠母猪流产、死胎、弱胎和木乃伊胎以及各年龄段猪呼吸系统疾病，对全球养猪业造成巨大的经济损失。全面解析PRRSV感染机制有助于防控PRRS，助力生猪产业高质量发展。自噬是一种依赖于溶酶体对异常蛋白质、受损细胞器、入侵病原微生物等进行降解回收的过程，包括巨自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬（chaperone-mediated autophagy，CMA）3种类型。其中，巨自噬是目前研究最多的自噬类型，可进一步分为非选择性自噬和选择性自噬。自噬在维持细胞稳态、控制细胞器质量、运输胞内物质等生理过程中发挥着重要作用，还影响神经退行性疾病、自身免疫病、癌症等多种疾病的发生和发展。此外，自噬作为一种防御机制，能够清除入侵宿主细胞的病毒；然而，病毒进化出一系列策略拮抗自噬降解甚至利用自噬为自身感染服务。文章通过笔者自身的研究经历和近年来自噬在PRRSV感染过程中的研究报道，系统梳理介绍了自噬在PRRSV感染中发挥的双重作用：一方面，PRRSV非结构蛋白和结构蛋白通过多种途径诱导包括内质网自噬、线粒体自噬、聚集体自噬、脂噬等选择性自噬在内的巨自噬和CMA，随后这些诱导的巨自噬和CMA参与PRRSV复制、拮抗细胞凋亡、抑制宿主免疫反应等过程促进病毒感染；另一方面，宿主细胞通过内质网自噬等选择性巨自噬和CMA降解PRRSV非结构蛋白、激活抗病毒免疫应答等抑制病毒感染，以期从自噬角度深入揭示PRRSV感染机制。另外，文章还通过总结自噬在PRRSV感染中的作用机制，提出该研究领域仍然存在争议或尚未解答的科学问题，为今后研究提供线索；同时通过列举靶向自噬的抗病毒研究，提出自噬可作为抗PRRSV策略研发的潜在靶点，为防控PRRS提供新的思路。
【目的】利用网络药理学和分子对接方法，预测绿原酸缓解鸡肠道炎症的作用机制，为绿原酸的应用提供参考。【方法】使用中药系统药理学数据库、DisGeNET数据库以及Gene Cards数据库，检索“Caffeoylquinic acid”“Intestinal inflammation”，获得绿原酸、肠道炎症相关靶点，并获取交集靶点集。使用 Cytoscape 3.10 中 CytoNCA 程序计算网络节点中心性，筛选关键绿原酸单体。利用 STRING 数据库构建针对鸡肠道炎症的靶点蛋白互作网络，利用 David 数据库对交集靶点进行基因本体（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。此外，对以上靶点进行分子复合物检测分析（MCODE）得到核心基因簇，构建绿原酸-靶点-信号通路网络。使用 Autodock vina将筛选的关键绿原酸单体与核心靶点进行分子对接，并将结果可视化。【结果】TCMSP 数据库检索得到绿原酸靶点222个，DisGeNET和Gene Cards数据库质控后获得肠道炎症靶点1 453个，获得二者的交集靶点78个。鸡肠道炎症靶点 PPI 网络的节点数为 53，边数为162。核心靶点分别为非受体酪氨酸激酶（non-receptor tyrosine kinase，SRC）、胱天蛋白酶3 （caspase-3，CASP3）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloprotein-9，MMP9）、表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor，EGFR）、雌激素受体1 （estrogen receptor 1，ESR1）、基质金属蛋白酶2（matrix metalloprotein-2，MMP2）、丝氨酸/苏氨酸激酶（serine/threonine kinases，BRAF）、激酶插入域蛋白受体（kinase insert domain receptor，KDR）、丝裂原活化蛋白激酶3（mitogen-activated protein kinase 3，MAPK3），分子对接结果显示关键绿原酸单体与上述核心靶点均可稳定结合。GO 功能富集分析（P<0.05）共获得87 种生物学过程（biological processes，BP）、20种细胞组分（cellular components，CC）和35 种分子功能（molecular functions，MF），KEGG 共富集到 26 条信号通路， MCODE 分析得到两个主要基因簇。【结论】通过交叉验证和文献支持预测绿原酸可能通过MAPK、C-型凝集素和Focal adhesion等途径调节炎症反应，缓解鸡肠道炎症；此外，新绿原酸和异绿原酸A两种单体，可能在缓解鸡肠道炎症中发挥关键作用。研究利用网络药理学和分子对接方法挖掘了绿原酸缓解鸡肠道炎症的潜力，为富含绿原酸的植物以及绿原酸单体在鸡生产上的应用提供了理论参考。
【背景】荣昌猪是我国优良地方猪种之一，但随着外种猪的引入以及市场需求的转变，纯种荣昌猪的数量正不断下降，这一趋势严重威胁到了我国生猪遗传资源的多样性和养猪业的可持续发展。在地方猪冷冻精液制作过程中，不同公猪精子冻后质量的差异都与其耐冻性有关，而精子脂质组成是影响其耐冻性的关键因素之一。【目的】通过深入分析不同耐冻性荣昌猪精子的质量特征及其脂质组成，筛选出精子耐冻性的候选标志物。为猪精液冷冻保存研究提供依据。【方法】采集14头荣昌猪精液进行冷冻保存后检测其冻后活力，以相对活力（冻后活力/冻前活力）为耐冻性标准，对荣昌猪精子进行高、低耐冻性筛选并分组。检测冻后不同耐冻组精子的质膜完整性、线粒体膜电位、活性氧水平、凋亡水平和体外卵母细胞穿透能力，并通过扫描电镜和透射电镜观察精子表面和内部微观结构的冷冻损伤程度。通过靶向脂质组学技术检测不同耐冻组新鲜精子的中长链脂肪酸组成，筛选出差异脂肪酸。【结果】通过相对活力筛选出具有高耐冻性精子荣昌猪5头，具有低耐冻性精子荣昌猪5头；冷冻后高耐冻组精子的质膜完整性、线粒体活性和体外穿卵率显著高于低耐冻组精子（P<0.05）；冷冻后高耐冻组精子凋亡率显著低于低耐冻组精子（P<0.05）。冷冻后高耐冻组精子表面和内部结构完整性均高于低耐组精子。靶向脂质组学显示，荣昌猪精子中含有36种脂肪酸。高、低耐冻组精子间棕榈酸、十五烷酸等11种脂肪酸含量存在显著差异（P<0.05），且均在高耐冻组中更丰富。【结论】荣昌猪高耐冻性精子在生理状态、形态结构以及体外卵母细胞穿透功能方面都显著优于低耐冻性精子，且脂肪酸组成存在显著差异。本研究筛选出的差异脂肪酸如棕榈酸、十五烷酸、花生四烯酸等可作为荣昌猪精子耐冻性的候选标志物。这些发现不仅为深入理解精子冷冻损伤的生物学机制提供了新视角，也为开发高效、安全的冷冻保护剂奠定了理论基础。
【背景】H5、H7、H9亚型禽流感病毒（avian influenza virus, AIV）和新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）是严重危害禽业的重要病原，接种油乳剂型灭活疫苗是预防禽流感和新城疫的主要手段。当前养殖场预防这些传染病至少需要2种以上疫苗，导致家禽接种疫苗次数多，免疫负担重；另外，制备油乳剂型灭活疫苗的白油主要依赖进口，存在“卡脖子”风险。【目的】为了减少疫苗接种次数，降低免疫负担，对比国产和进口白油佐剂效果，本研究制备并评估了同时预防禽流感（H5+H7+H9）、新城疫的不同白油佐剂二联五价灭活疫苗，以期达到“一针防多病”的免疫效果，并为实现动物疫苗进口白油佐剂国产化替代提供数据支撑。【方法】将已构建的禽流感H5-Re13、H5-Re14、H7-Re4、H9-GX11583株和新城疫ND rLa-VII株共5株疫苗株分别接种鸡胚，收获尿囊液，经浓缩灭活后，按照1份抗原3份佐剂的比例加入不同的矿物油佐剂（Total、Marcol 52和HTM70），混合乳化，制成二联五价灭活疫苗，并分别以2 mL/只和0.5 mL/只的剂量通过肌肉注射接种3周龄SPF鸡，评价疫苗的安全性和有效性。【结果】免疫效力试验结果显示，3种白油佐剂制备的二联五价灭活疫苗对鸡均具有良好的安全性；3种白油佐剂疫苗接种鸡或免疫后均可产生针对H5-Re13株、H5-Re14株、H7-Re4株、H9-GX11583株和ND rLa-VII株有效的HI抗体，均可获得对效力检验毒株攻击的完全免疫保护。HI抗体持续期结果显示，3种白油佐剂灭活疫苗均可持续诱导高水平抗体半年以上，与进口白油（Total、Marcol 52）相比，国产白油HTM70诱导的HI抗体水平与进口白油Total差异不显著，高于进口白油Marcol 52，且国产白油佐剂HTM70批次间无明显差异。【结论】制备的禽流感（H5+H7+H9）、新城疫二联五价灭活疫苗对SPF鸡具有良好的免疫效果，且有望实现进口白油佐剂国产化替代。
【背景】沙门菌是重要的人畜共患病原菌和食源性病原菌，目前已发现2 600多种血清型，不同血清型的沙门菌对动物和人的致病性不同。肉鸡是沙门菌流行传播的重要宿主之一，其污染状况直接关系着肉鸡的健康养殖和公共卫生安全，肉鸡生产链是肉鸡感染沙门菌的主要来源，主要涵盖了种鸡养殖、肉鸡孵化和肉鸡养殖等环节，研究沙门菌在肉鸡不同生产环节中的流行和传播情况对肉鸡沙门菌的防控和公共卫生安全具有重要意义。【目的】以京津冀地区肉种鸡养殖场、肉鸡孵化场和商品化肉鸡养殖场为切入点，系统研究肉鸡不同生产环节沙门菌的流行性、血清型分布和分子分型情况，为肉鸡生产中沙门菌流行和传播情况的研究提供参考。【方法】从北京、天津和河北地区肉鸡不同生产环节（包括同一养殖集团内部）的28个养殖场共采集样品2 572份，其中肉种鸡养殖场、肉鸡孵化场和商品化肉鸡养殖场分别采集324份、747份和1 501份样品。首先对采集样品进行沙门菌的增菌培养，然后用显色培养基和聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）进行沙门菌的分离与鉴定；其次应用丹麦血清对已鉴定的沙门菌进行血清分型，并用脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis，PFGE）方法对沙门菌进行分子分型；最后对不同生产环节养殖场肉鸡的带菌状况、血清型分布和分子分型结果进行分析比较。【结果】从肉鸡不同生产环节共分离沙门菌335株，总体分离率为13.0%，其中肉种鸡养殖场、肉鸡孵化场和商品化肉鸡养殖场沙门菌的分离率分别为3.4%、30.3%和6.5%。同一养殖集团内部不同生产环节共分离沙门菌32株，分离率为8.6%，其中肉种鸡养殖场、肉鸡孵化场和商品化肉鸡养殖场的沙门菌分离率分别为2.0%、14.0%和9.2%。沙门菌分离株共有11种血清型分布，优势血清型为肠炎，其次为田纳西、鸡白痢和爪哇纳。肉鸡不同生产环节沙门菌的优势血清存在差异，其中肉种鸡养殖场为肠炎和尼特拉；肉鸡孵化场为肠炎、田纳西和鸡白痢；商品化肉鸡养殖场为肠炎、爪哇纳和鸡白痢。除从饲料中分离出5株埃施魏勒沙门菌外，同一养殖集团内部不同生产环节分离的沙门菌血清型均为肠炎。肉鸡不同生产环节沙门菌分离株的PFGE分型结果显示，不同血清型沙门菌的PFGE同源性较低，而同一血清型的同源性相对较高；多数肠炎沙门菌的PFGE条带谱型属于聚类I群，相似度93.1%；同一养殖集团内部不同生产环节分离的肠炎沙门菌存在完全相同的PFGE谱型。【结论】京津冀地区肉鸡各生产环节沙门菌的分离率差异较大，主要以肠炎沙门菌流行传播为主，肉鸡不同生产环节之间存在肠炎沙门菌的垂直克隆传播，种鸡是肉鸡沙门菌的重要感染来源，养殖场环境和饲料也是肉鸡沙门菌感染的来源之一，因此，必须加强种鸡沙门菌的净化，同时做好其他生产环节沙门菌的防控，以保障肉鸡的健康养殖和公共卫生安全。
【目的】通过对天津地区某疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）发病断奶仔猪肺脏组织进行病毒分离鉴定以及全基因组分子特征分析，为猪场疫病防控提供基础数据。【方法】采集发病猪肺组织检测并将PRRSV核酸阳性样品接种于猪肺泡巨噬细胞（porcine alveolar macrophages, PAMs），采用有限稀释法纯化分离病毒，对已纯化的病毒进行间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescence assay, IFA）鉴定，利用重叠引物RT-PCR分段扩增并克隆测序获得全基因组序列，并通过生物学分析软件分别对分离毒株的核苷酸与氨基酸序列进行同源性、遗传演化与重组事件分析。【结果】成功分离1株PRRSV毒株，将其命名为N1；该毒株全基因组全长大小为15 016 bp（不含polyA尾），核苷酸同源性比对分析显示与谱系8.3代表毒株JXA1全基因组同源性最高，为90.0%，与其他谱系各代表毒株的全基因组同源性为85.0%—90.0%，其中ORF2a、ORF2b、3′UTR区域同源性与谱系3（QYYZ-like）毒株最高达93.7%，与谱系1.8（NADC30-like）毒株在ORF5-ORF7区域同源性最高达96.2%，其余区域均与谱系8.3（JXA1-like）毒株有高度同源性，同时N1毒株的Nsp2区域具有与谱系1.8（NADC30-like）毒株特征一致的131（111+1+19aa）个不连续氨基酸缺失特征；GP5蛋白的预测毒力位点及主要中和抗原表位与谱系1（NADC34-like、NADC30-like）PRRSV毒株相同，但位于N33、N44和N51的3个N-糖基化位点存在一定程度突变，这些潜在的糖基化位点突变很可能造成病毒致病力差异，并导致病毒免疫逃逸发生；根据ORF5及全基因组序列构建的遗传进化树基因分型显示，基于N1毒株ORF5基因遗传进化树与谱系1.8（NADC30-like）毒株亲缘较近，处于同一分支，但基于N1毒株全基因组遗传进化树与谱系8.3（JXA1-like）毒株处于同一分支，提示该毒株存在重组可能性；通过Simplot和RDP4.0等多种生物信息学软件的重组分析显示，该毒株是1株以谱系8.3（JXA1-like）为亲本毒株，谱系1.8（NADC30-like）和谱系3（QYYZ-like）为次本毒株的多谱系重组毒株，共存在13个重组事件，其中主要亲本毒株JXA1-like与NADC30-like毒株和QYYZ-like毒株可能分别在A（1—421 nt）、B（422—1 735 nt）、C（1 736—3 598 nt）、D（3 599—4 439 nt）、E（4 440—5 762 nt）、F（5 763—6 451 nt）、G（6 502—7 226 nt）、H（7 227—8 295 nt）、I（8 296—9 312 nt）、J（9 313—11 536 nt）、K（11 537—12 854 nt）、L（12 855—13 859 nt）、M（13 860—15 016 nt）处发生了重组，重组断点位于基因组的 Nsp1、Nsp2、Nsp3、Nsp4、Nsp7、Nsp9、Nsp12、ORF3和ORF5中。【结论】试验分离鉴定的PRRSV N1毒株是一株以谱系8.3（JXA1-like）毒株为主要亲本的PRRSV三谱系重组毒株，且存在广泛的、复杂的重组现象，即谱系1.8、谱系3、谱系8.3三个谱系重组，可为天津地区的猪繁殖与呼吸综合征综合防控提供参考。
【背景】非洲猪瘟（African swine fever，ASF）作为世界动物卫生组织（world organization for animal health，WOAH）规定必须通报的疫病之一，同时也是我国一类动物疫病，因缺乏有效疫苗和治疗方法，早期、有效、快速和敏感的检测对防控ASF至关重要。目前，非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）常用临床检测方法主要包括荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）、酶联免疫吸附测定试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）等，但这些技术均需要复杂的操作、昂贵的仪器以及较长的检测时间，不适用于现场快速检测。此外，ASFV感染后宿主体内的抗体和核酸含量在不同时间段有明显的差异，因此单独检测ASFV核酸或抗体可能会导致假阴性的存在。【目的】通过研发一种基于量子点微球和重组酶聚合酶扩增技术（recombinase polymerase amplification，RPA）的ASFV抗体-核酸联检试纸条，实现ASFV抗体和核酸的现场同时检测，以提高检测的灵敏度、特异性，降低检测成本，节约检测时间。【方法】通过结合量子点荧光免疫层析技术及RPA技术建立了同时检测ASFV抗体及核酸的侧向流层析试纸条，配套便携式荧光分析仪可实现ASFV抗体-核酸的快速现场联检。本研究优化了量子点偶联蛋白量及检测线包被浓度等条件。在此基础上，确定了该检测方法的cutoff值、敏感性、特异性及重复性，并将所建立的ASFV联检试纸条与市售ELISA试剂盒、qPCR检测试剂盒对临床样品进行检测，比较检测结果，验证该方法的符合率，评价该试纸条的实用性。【结果】联检试纸条使用方便、快速，整个检测过程可在30 min内完成。且与其他6种常见猪传染性病毒之间不存在交叉反应，特异性良好。核酸检测灵敏度可达10 copies/µL，抗体检测灵敏度可达1﹕3 200。抗体和核酸检测批内变异系数均小于10%，批间变异系数均小于15%，重复性良好。经市售ELISA试剂盒、qPCR试剂盒分别验证，符合率均为100%。除此之外，在临床样品检测中发现，有2份抗体检测阳性的样品其对应的猪只核酸检测为阴性，且这2头猪无明显临床症状，该结果进一步证明了通过抗体和核酸联检能够提高检测的准确性，减少假阴性的存在。【结论】核酸-抗体联检单次试验成本与病原核酸抗体分别检测总成本相比有所降低，节约了检测成本和时间，对于ASF急性发作、慢性感染检测均敏感，避免了仅检测单个核酸或单个抗体的局限性。此方法对操作环境要求低，使用的荧光分析仪便于携带，易于操作，整个操作过程无需过多昂贵的实验仪器和专业技术人员，降低了对检测设备的精密要求，适用在偏远地区以及基层中开展ASFV检测工作。因此，该方法有望成为未来猪场ASFV即时检测的可靠方法。
【背景】 脂肪肝综合征（fatty liver syndrome，FLS）是蛋鸡产蛋期常见的营养代谢性疾病，包括“简单脂肪变性-脂肪性肝炎-肝纤维化-肝硬化”等多阶段发病过程，给我国家禽产业带来一定经济损失。脂肪肝模型构建是探究FLS发病机理，筛选营养调控措施及后续疾病预防评价的关键。然而，关于家禽肝细胞脂肪变性模型的研究较少。【目的】 以鸡胚原代肝细胞（chicken embryo liver，CEL）为研究对象，通过油酸诱导建立原代肝细胞脂沉积模型，并探究FLS不同阶段所需的诱导时间，为家禽FLS的研究提供理论依据。【方法】 选用18胚龄的CEL，待细胞生长至铺满皿底80%左右，更换含400 μmol·L-1油酸的培养基进行处理，培养24、48和72 h后，对细胞进行油红O染色，并测定脂质含量，同时分析与脂代谢、炎症及纤维化相关基因的mRNA和蛋白水平。【结果】 与对照组相比，油酸处理24 h后细胞开始出现大量红色脂滴，且随诱导时间的增加红色逐渐加深（P<0.05），表明细胞内脂滴增多，同时TC、TG水平显著升高（P<0.05）。RT-PCR结果显示，油酸诱导24 h后，ACC、FAS、ELOVL6、SREBP等脂合成相关基因表达量显著升高（P<0.05），表明油酸处理24 h后细胞发生脂沉积。ELISA结果显示，IL-6、IL-1β和TNF-α含量在油酸诱导24 h时无显著变化（P>0.05），随诱导时间增加，IL-6水平在48 h时有升高趋势（P=0.052），而在油酸处理72 h后，IL-6和IL-1β水平都显著高于对照组（P<0.05），表明油酸处理48 h后细胞开始发生炎症反应并随诱导时间延长而增加。此外，Western blot结果显示，与对照组相比，48 h油酸处理组IL-6蛋白表达水平显著升高（P<0.05），与ELISA结果一致。同时促纤维化标志物COL1A1和FIBRONECTIN蛋白表达水平升高（P<0.05）；而72 h油酸处理组的IL-6、COL1A1和FIBRONECTIN蛋白表达水平均显著高于对照组（P<0.05）。【结论】 在鸡胚原代肝细胞培养基中添加400 μmol·L-1油酸诱导24 h可建立肝细胞早期脂沉积模型，且48 h时炎症发生，72 h 发生纤维化。
【背景】 我国地方鸡资源丰富，J亚型禽白血病（J subtype avian leukemia，AL-J）在地方鸡种中的传播制约着地方鸡的保种、开发利用等工作的进行。【目的】 通过分析J亚型禽白血病病毒（J subtype avian leukemia virus, ALV-J）阳性琅琊鸡公鸡排毒动态、ALV-J阳性琅琊鸡母鸡在开产前至自繁时的排毒动态及ALV-J对繁殖性能（受精率、孵化率、产蛋数及高峰产蛋后产蛋下降速率）的影响，为我国地方鸡品种的AL-J净化提供参考依据，助力我国地方鸡品种的保护、开发利用。【方法】 对ALV-J阴、阳性琅琊鸡母鸡群体自145日龄开始，每30 d进行血液病毒分离、泄殖腔拭子P27抗原检测；ALV-J阳性公鸡群体自330日龄开始，每隔4 d进行精液病毒分离、泄殖腔拭子P27抗原检测；进行ALV-J阴、阳性公鸡精液品质、DNA损伤程度和ALV-J阴、阳性母鸡蛋品质测定，并进行ALV-J阴、阳性公母鸡配种输精试验（G1组：阳性公鸡×阳性母鸡；G2组：阳性公鸡×阴性母鸡；G3组：阴性公鸡×阳性母鸡；G4组：阴性公鸡×阴性母鸡），统计各组种蛋的受精率和孵化率。对ALV-J阴、阳母鸡群体从开产至43周龄的周均产蛋数及高峰产蛋后产蛋下降速率进行分析。【结果】 ALV-J阳性公鸡排毒动态研究表明，精液和泄殖腔拭子每次检测结果并不完全一致，部分阳性鸡仅精液或泄殖腔拭子检测为阳性，在20只阳性公鸡中有5只公鸡的精液在连续检测中呈现阴性。ALV-J阳性母鸡排毒动态结果显示，血液病毒分离检出率，205日龄最低（78.16%），325日龄最高（90.79%），265、295和325日龄呈逐步增高趋势，且295和325日龄相近。ALV-J阴、阳性鸡群血液病毒分离和泄殖腔拭子的检测结果比较说明，泄殖腔拭子检测存在较高的假阳性和漏检率。ALV-J阴、阳性公鸡常规精液品质和DNA损伤程度检测（DFI）无显著差异(P>0.05)。ALV-J阴、阳性母鸡的蛋品质测定结果显示，蛋重、哈氏单位、蛋黄重、蛋白高度等指标差异极显著（P<0.01）。蛋壳强度、蛋形指数、蛋黄颜色、蛋壳厚度指标差异不显著（P>0.05）；配种输精试验结果显示，ALV-J阳性公鸡种蛋受精率和孵化率与阴性鸡群无明显差异，ALV-J阳性母鸡种蛋的受精率和孵化率明显低于阴性鸡群，与ALV-J阳性公、母鸡种蛋受精率、孵化率无显著差异。ALV-J阴、阳性群体产蛋性能分析表明，ALV-J阳性群体开产至43周龄的周均产蛋数显著低于ALV-J阴性群体（P<0.01），ALV-J阴性群体的产蛋高峰后产蛋下降速率（0.016）低于ALV-J阳性群体（0.033）。【结论】 ALV-J阳性公鸡中鸡精液多次检测为阴性个体，在ALV-J阳性率较高的地方鸡种中可作为种公鸡使用。通过ALV-J琅琊鸡排毒动态研究结果结合自繁时间，300日龄前后为进行ALV-J血液病毒分离检测的最佳时间段。泄殖腔拭子ALV检测存在极高的假阳性和漏检率，不建议采用。ALV-J感染母鸡产蛋数显著降低，产蛋高峰后产蛋下降速率加快，并显著降低鸡蛋的蛋重、蛋黄重、蛋白高度等指标，导致受精率、孵化率降低。研究结果为琅琊种鸡的ALV-J净化方案的制定提供了数据支撑。
【目的】以GWAS方法分析剩余采食量（residual feed intake, RFI）随机回归模型多项式系数，解析产蛋期RFI遗传结构，为选育蛋鸡RFI研究奠定基础。【方法】数据采集自东乡绿壳蛋鸡-白来航鸡F2分离群体。收集体重、蛋重、产蛋数和采食量数据，依据Koch方法分别计算40周龄、60周龄剩余采食量。采集1 534只F2代产蛋鸡血液样本，酚仿法提取基因组DNA，以600 K基因芯片进行基因分型。SNPs数据经质量控制后，进行基因型数据填充，并确定分离群体主成分。以随机回归模型分析分离群体方差组分及遗传参数。利用Gemma软件以混合线性模型分析随机回归模型多项式系数，从而获得RFI关联的SNP位点。对显著性位点进行基因注释。针对RFI多项式系数伪表型数据，计算染色体遗传力和单倍型片段长度。【结果】随机模型固定效应、加性遗传效应以及永久环境效应宜嵌入二阶勒让德多项式，残差做同质化处理。鸡产蛋期剩余采食量属于中等遗传力性状，遗传力范围为0.23—0.32，随周龄增加而增加；重复力为0.63—0.68，表明通过3—4次重复测量可准确估计RFI表型值；随着周龄间隔增加，RFI遗传相关系数、表型相关系数呈现逐渐递减；加性遗传矩阵多项式系数第一主成分占96.12%。产蛋期剩余采食量GWAS分析的膨胀系数为1.026，表明线性混合模型中的主成分已经消除潜在的层化结构。鸡5号染色体NAV2基因附近检测到与产蛋期RFI显著关联的QTL遗传座位，在显著性SNP之下有11个支持位点超过基因组潜在水平线。显著性SNP可解释1.73%的表型方差，单倍型片段长度达到286 kb。此外，鸡12号、27号染色体也检测到基因组潜在水平SNP，其中27号染色体上的潜在水平位点位于NGFR上游。染色体遗传力与染色体长度呈正比关系，表明RFI受微效多基因控制。【结论】应用随机回归模型解析了产蛋期RFI遗传参数；以多项式系数为GWAS表型数据，筛选得到NAV2基因多态性与产蛋期RFI显著关联。
【背景】旋毛虫（Trichinella spiralis）是一种食源性人兽共患寄生线虫，被列为世界七大食源性寄生虫，在家畜中，旋毛虫主要感染猪，并且能够通过猪肉及副产品传播给人类，不仅给我国生猪养殖产业带来了巨大的经济损失，而且严重危害人类健康和公共卫生安全。【目的】建立一种灵敏度高，特异性强，快速自动化的猪旋毛虫血清学检测方法, 为阻止人兽共患寄生虫病的传播提供帮助。【方法】利用基因克隆和原核表达技术构建原核表达载体，通过诱导表达获得旋毛虫14-3-3重组蛋白，并验证其反应原性。用制备的重组蛋白包被磁性微粒，以此为检测抗原建立化学发光免疫分析方法，并对建立的方法进行条件优化。最后对优化后的方法进行临界值的界定及特异性、敏感性和重复性的确定；通过对来自广东省和贵州省不同养猪场的1 000份猪临床血清样本进行检测，评估该检测方法的实用性及符合率。【结果】成功表达并纯化出Ts14-3-3重组蛋白，该蛋白能特异性识别猪旋毛虫阳性血清中的抗体。建立的检测方法经过优化，结合缓冲液最佳pH为5，Ts14-3-3重组蛋白最佳包被量为5 μg·mg-1-beads，活化剂最佳使用量为50 μg·mg-1-beads，1%BSA封闭效果最好，酶标二抗最佳稀释度为1﹕40 000，最佳反应时间为10 min，待检样本最佳孵育时间为5 min，最佳酶促反应时间为2 min。最后经过评估，该检测方法的临界化学发光值为374 185 RLU，与猪弓形虫、猪球虫、猪结肠小袋纤毛虫、猪繁殖与呼吸综合征、经典猪瘟、猪伪狂犬和猪口蹄疫抗体均无交叉反应，该检测方法与现有ELISA检测方法相比敏感性更高，批内和批间重复性均小于10%，检测的1 000份临床猪血清样本中旋毛虫抗体阳性率为0.6%，与市售ELISA试剂盒检出总符合率为98.18%。【结论】成功建立了猪旋毛虫抗体管式化学发光免疫分析检测方法，该检测方法特异性强，稳定性好，与ELISA方法相比更灵敏，快速，临床检测符合率高。
【目的】当前,养殖业的臭气污染已成为行业的痛点和难点，氨气（NH3）作为臭气污染贡献率高的重要有害气体，其减排已成为亟待解决的首要问题。通过筛选高效除氨菌株并对其进行条件优化，为除臭菌剂的研发提供优良菌种。【方法】选择养殖场排污口沉积的粪污作为菌株分离来源，采用NH3富集培养基进行富集、分离和纯化，并采用NH3降解培养基对已纯化菌株进行降解能力测定，筛出高效降解菌株，再通过形态学（菌落形态和革兰氏染色）和16S rRNA测序对高效菌株进行鉴定，然后进一步研究不同pH（5.0、6.0、7.0、8.0和9.0）、碳源（葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖和木糖）、盐度（0%、0.5%、1.0%、1.5%和2.0%）和接种量（1.0%、5.0%、10%、15%和20%）对高效除氨菌株生物量的影响，确定其最优生长条件。【结果】（1）通过富集培养共分离出12株疑似NH3降解菌株（命名C1-C12），其中菌株C5具有较高的NH3降解能力，该菌株的对数生长期为2—20 h，降解率随菌体生长而增加，培养24 h时降解率达60.70%，48 h高达75.49%，显著高于同时期的其他11株菌（P<0.05）。通过形态学和16S rRNA鉴定，菌株C5呈粗短杆状，两端钝圆，无夹膜，革兰氏染色阴性，结合基因测序结果和系统发育树，确定该菌株为肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）。（2）不同pH、碳源、盐度和接种量对菌株C5培养48 h的菌液浓度产生不同的影响。初始pH为7.0时，菌液浓度高于pH5.0、pH6.0和pH9.0，差异达显著水平（P<0.05）；相比其他碳源，葡萄糖作为碳源的条件下，培养8—48 h的菌液浓度最高；不同盐度和接种量条件下，菌液浓度组间均表现出显著性差异（P<0.01），1.5%盐度的菌液浓度最高，培养40 h时，菌液浓度达峰值，另外，该菌接种量为1.0%时，菌株生长最快，菌液浓度最高。可见，菌株C5生长的适宜条件：pH 7.0、碳源葡萄糖、盐度1.5%和接种量1.0%，此条件下菌株生长最快，生物量最大。【结论】粪污中分离的肺炎克雷伯氏菌（菌株C5）具有高效除NH3能力，在粪污处理领域具有潜在的利用价值。
【目的】利用全基因组关联分析（genome-wide association study, GWAS）解析60周龄蛋鸡蛋黄比率遗传结构，旨在挖掘地方鸡种优异基因资源，进而为培育适应市场需求的特色蛋鸡品种奠定基础。【方法】数据采集自江苏省家禽科学研究所蛋鸡资源群体。依据F2设计构建试验群体，分别以东乡绿壳蛋鸡、白来航鸡为亲本，经正反交获得F1、F2代。表型数据组包括开产日龄、胫长、体重、蛋重、哈氏单位以及蛋黄比率。收集F2代产蛋鸡血液样本，以600K基因芯片对1 534只试验鸡进行基因型分型。对SNPs数据进行质量控制、基因型数据填充。表型数据经去除离群值等清洗步骤后，以单因素方差分析检验影响性状表型值的因素，确定列入固定效应的因子。以系谱数据构建遗传关系矩阵，以多性状动物模型分析资源群体方差组分及遗传参数；作为对比，以系谱数据加基因型分型数据构建杂交遗传关系矩阵，用单性状动物模型计算遗传力，用双性状动物模型计算遗传相关系数。利用BLUPF90软件获得SNP效应值，以postGSf90获得SNP对应的P值以及权重，从而获得蛋黄比率关联的基因组显著水平SNP。针对蛋黄比率性状，计算染色体遗传力和单倍型片段长度。【结果】东乡绿壳蛋鸡蛋黄比率高于白来航鸡蛋黄比率，品种-批次效应对表型值影响显著，将其列入统计模型固定效应。应用杂交遗传关系矩阵分析，蛋黄比率、蛋重遗传力分别为0.348±0.041、0.500±0.038，蛋黄比率与蛋重、哈氏单位遗传相关系数分别为-0.463±0.075、-0.165±0.111；应用系谱遗传关系矩阵分析，蛋黄比率、蛋重遗传力分别为0.387±0.052、0.465±0.052，蛋黄比率与蛋重、哈氏单位遗传相关系数分别为-0.405±0.091、-0.166±0.121。蛋黄比率关联分析的膨胀系数为1.007，表明蛋鸡资源群体未检测到层化结构。鸡22号染色体存在与蛋黄比率显著关联的遗传座位，在显著性SNP之下有8个支持位点超过基因组潜在水平线。显著性以及潜在水平SNP可解释2.18%的表型方差，单倍型片段长度达到71 kb。此外，鸡2号染色体也检测到基因组潜在水平SNP。染色体遗传力分析表明，蛋黄比率受微效多基因控制，染色体遗传力与该染色体容纳的基因数呈正比例。【结论】应用加权一步法GWAS解析了蛋黄比率遗传结构，筛选得到ADAM9基因与60周龄蛋黄比率密切相关；相比于系谱遗传关系矩阵，杂交遗传关系矩阵减少孟德尔抽样误差，获得的遗传参数更准确。
【背景】睾丸是雄性动物重要生殖器官，具有产生精子和分泌雄激素的功能，睾丸质量与繁殖性能有直接联系。睾丸性状受下丘脑-垂体-性腺轴多基因共同调控，其分子机理尚不清楚。宁都黄鸡睾丸性状变异系数大，繁殖性能一致性差。【目的】通过对不同睾丸性状个体垂体组织进行全长转录组测序，挖掘候选基因以及关键信号通路，探究影响睾丸性状的遗传基础，以期为发展地方鸡种睾丸性状的选种选育提供依据。【方法】以70只22周龄宁都黄公鸡为研究对象，分为大睾丸组和小睾丸组，从两组中分别选取3个个体，构建垂体组织的全长转录本表达谱，筛选高表达量及两组个体差异表达基因或转录本，对差异基因或转录本进行功能富集分析。随机选取6个基因，进行基因表达水平验证。参考已知垂体细胞的标记基因，筛选与8种细胞标记基因对应的差异表达基因或转录本，并分析这些差异基因或转录本以及高表达量基因或转录本与睾丸性状相关性。【结果】在6个宁都黄鸡垂体组织中，检测到21 834个基因，29 355个全长转录本。其中，332个基因及229个转录本在两组个体中差异表达。KEGG通路分析结果显示，这些差异基因或转录本主要富集于Apelin信号、甘油磷脂代谢等通路。一共发现5个促性腺细胞标记基因或其对应转录本与部分睾丸性状显著相关，包括NFASC（neurofascin）及其对应转录本 XM_015298904.2、TESC（tescalcin）及其对应转录本XM_025155510.1、FSHB（follicle stimulating hormone beta）转录本 ONT.20974.4、RLN3（relaxin 3）、NDUFB2（NADH: ubiquinone oxidoreductase subunit B2）转录本ONT.1176.4。1个催乳素细胞标记基因EGR1（early growth response 1），2个滤泡星状细胞标记基因TMSB4X（thymosin beta 4, X-linked ）、C1H12ORF57（chromosome 1 open reading frame），1个促甲状腺细胞标记基因CHGB（chromogranin B）均与部分睾丸性状显著相关。2个高表达量基因TMSB4X、HSP90AA1（heat shock protein 90 alpha family class A member 1）与部分睾丸性状显著相关。FSHB、EGR1均为基因互作网络中节点基因。【结论】经初步功能分析，EGR1、TMSB4X、FSHB、RLN3为睾丸性状调控的关键基因。MAPK信号通路、神经活性配体-受体相互作用、GnRH信号通路为睾丸性状调控的关键基因通路。
【背景】黄曲霉毒素B1（AFB1）是由寄生曲霉菌产生的次级代谢产物，广泛存在于世界各地受污染的食品和饲料中，被认为是影响人类和动物健康的主要风险因素之一。猪流感病毒（SIV）是目前世界上传播最为广泛的病毒之一，其复制易受环境和营养等多种因素影响。然而，饲料中AFB1污染与SIV感染的关系尚不明确。【目的】探究AFB1暴露对SIV感染的仔猪体内SIV复制、器官损伤和肠道菌群的影响，为研究霉菌毒素中毒机制奠定基础，也为探讨其他感染性疾病易感性增加原因提供参考。【方法】选取保育期雄性仔猪32头，随机分为4组（每组8头），在试验开始第1和第4天分别滴鼻接种低致病性SIV病毒稀释液，建立SIV感染仔猪（本体动物）模型。每天新鲜稀释AFB1，按照0、10、20和40 μg·kg-1（饲料）浓度灌服给仔猪，持续21 d。分别在第7、14和21天饲喂前对仔猪进行称重，然后应用多种技术手段检测各组仔猪器官脏器指数、剖检变化和病理特征，并在此基础上，进一步使用免疫印迹分析肺部SIV的核衣壳蛋白（NP）的表达情况以及16S rRNA检测肠道菌群变化，阐明AFB1暴露对SIV感染、脏器损伤和肠道菌群的影响。【结果】暴露于40 μg·kg-1 AFB1的仔猪较对照组仔猪（无AFB1）体增重显著降低（P<0.01），NP蛋白表达以及肺脏指数显著升高（P<0.01），而脾脏指数显著降低（P<0.01）。剖检结果显示，暴露于40 μg·kg-1 AFB1仔猪的脾脏、肝脏和肺脏损伤严重。H.E染色也表现出相似的结果，与SIV对照组相比，40 μg·kg-1 AFB1处理组仔猪脾脏出现淤血，红白髓界限不清；肝组织出血、炎症细胞浸润；肺脏小肺泡融合成形态不规则的大肺泡，肺泡间质增厚，炎性细胞浸润增多；此外，肠绒毛形状不规则，结缔组织松散，有淋巴细胞浸润。16S rRNA测序结果显示，暴露于40 μg·kg-1 AFB1显著提高了仔猪肠道放线菌门和梭状芽孢杆菌的相对丰度，降低了乳酸菌属和拟杆菌属的丰度。【结论】AFB1暴露降低了SIV感染仔猪的体增重，促进SIV复制，加剧了肺组织等器官损伤，并引起肠道菌群紊乱，该发现为研究AFB1的毒性作用机制提供理论参考依据。
【背景】羊毛由毛囊（hair follicle，HF）产生并控制，HF结构功能和形态发生是一个复杂的生物过程。细毛羊胚胎期HF发育过程决定了羊毛的产量和品质。苏博美利奴羊是我国自主培育的羊毛细度达17—19 μm的精纺用超细毛羊新品种。超细毛羊HF形态发生过程中miRNA及其调控机制有待更为深入的研究。【目的】解析超细毛羊早期HF发育中miRNA的分子调控机制对于更好地理解HF形态发生过程以及对细毛羊的育种工作具有重要的指导意义，为解析超细毛羊HF发育分子调控机制和选育优质超细毛羊提供可参考的分子标记。【方法】对相同饲养条件下的苏博美利奴羊进行同期发情和人工授精，授精日被指定为胚胎第0天（E0）。在胚胎期第65天（E65）、85天（E85）、105天（E105）和135天（E135）将妊娠母羊安乐死后进行剖宫产收集胚胎的皮肤组织；在羔羊出生后第7天（D7）和30天（D30）采集左侧肩胛部皮肤组织，每个时期采3个样本。运用miRNA-Seq鉴定毛囊发育不同时期的保守miRNA和Novel miRNA，并构建苏博美利奴羊HF发育不同时期的皮肤组织miRNA文库。对差异表达miRNA（DE-miRNA）进行靶基因预测及生物信息学分析，筛选参与超细毛羊HF发育的关键miRNA和候选基因，并构建miRNA-靶基因调控网络。运用RT-qPCR和双荧光素酶报告基因检测方法验证miR-433-3p与NOTCH1的靶向关系。【结果】构建了苏博美利奴羊HF发育不同时期18个皮肤组织miRNA文库，并筛选出87个DE-miRNA和446个Novel DE-miRNA。对DE-miRNA聚类分析可知毛囊诱导分化阶段（E65、E85、E105）有21个DE-miRNA，其中有5个（oar-miR-23b、oar-miR-133等）是关键候选miRNA；毛囊成熟阶段（E135、D7、D30）有28个DE-miRNA。SOM分析结果表明DE-miRNA可聚为10个Cluster，每个Cluster中miRNA有相似功能。对DE-miRNA和Novel DE-miRNA进行混合预测靶基因并进行功能富集发现靶基因主要富集通路有AMPK、Notch、hedgehog。将DE-mRNA与靶基因结合生物信息学分析构建了与HF发育相关的miRNA-靶基因调控网络。在293T细胞中将NOTCH1野生型和突变型载体与miR-433-3p mimics和mimics-NC共转染，结果表明NOTCH1为miR-433-3p的靶基因。【结论】构建了苏博美利奴羊毛囊发育不同时期miRNA表达谱，分析了miRNA及其靶基因的表达调控关系，并构建了miRNA-靶基因调控网络，进一步了解了miRNA在毛囊发育不同时期的作用及分子机制；为解析超细毛羊毛囊发育分子调控机制和选育优质超细毛羊提供可参考的分子标记。
【目的】获得可溶性非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）p54蛋白和抗p54蛋白的单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAb），并分析其识别的线性抗原表位，为p54蛋白结构和功能的研究及血清学诊断试剂的研发奠定基础。【方法】构建了重组原核表达质粒pET-21a-E183L，将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，表达并利用Ni2+柱和分子筛纯化得到p54重组蛋白。以该蛋白为抗原免疫5周龄SPF级BALB/c小鼠，每两周免疫一次，共免疫3次，首免时将p54蛋白与弗氏完全佐剂混匀乳化（150 μg/只），二免、三免使用弗氏不完全佐剂。三免7 d后对小鼠进行尾部采血，使用ELISA方法测定小鼠血清抗体效价，选取效价高的小鼠进行加强免疫。3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合，利用重组p54蛋白作为包被抗原,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆纯化,直至筛出能够稳定分泌抗体的mAb细胞株，并制备腹水。以pCAGGS-Flag-E183L质粒转染的HEK293T细胞和ASFV Pig/HLJ/18株感染的猪肺泡巨噬细胞（PAMs）为抗原，以筛选得到的mAb为一抗，进行Western blot鉴定和间接免疫荧光试验（IFA）。使用单抗亚类鉴定试剂盒检测该mAb重链和轻链类型。随后，将p54蛋白逐步截短并与GST标签融合表达后进行Western blot检测，鉴定该mAb识别的抗原表位。【结果】将构建的原核表达质粒pET-21a-E183L（54-183aa）转化至BL21（DE3）感受态细胞中，使用IPTG进行诱导后，p54重组蛋白大部分以可溶的形式在上清中表达，分子量约为17 kDa。以纯化得到p54重组蛋白免疫小鼠，三免后7 d的血清效价为1﹕409 600，可进行细胞融合，经四次筛选和亚克隆后，获得能够稳定分泌p54蛋白mAb的细胞株，命名为5B11，成功制备腹水并纯化。Western blot和IFA试验结果显示，制备的mAb能够特异性识别HEK293T细胞中表达及ASFV感染PAMs中的p54蛋白。mAb亚类鉴定结果显示重链类型为IgG1型，轻链类型为κ链。该mAb识别的抗原表位序列为80VTPQPGTSKPA90。【结论】利用原核表达体系可溶性表达了ASFV p54蛋白的第54-183位氨基酸,并以纯化的蛋白为抗原制备了抗p54蛋白的mAb，并对其识别的抗原表位进行鉴定，丰富了p54蛋白的抗原表位信息，为ASFV血清学检测提供了基本材料。
【目的】探讨豆粕替代比例对其代谢能评价及肉鸡氮代谢的影响，进一步分析尿酸及可消化氮与豆粕代谢能（AME）的关系，为精确测定饲料原料代谢能提供科学依据。【方法】采用单因素完全随机设计，试验饲粮中豆粕的添加水平作为单一变量。选取216只22日龄体重相近的AA肉公鸡，随机分为6个处理组，其中待测豆粕替代比例分别设置为10%（SM10）、20%（SM20）、30%（SM30）和40%（SM40），同时设置基础饲粮组1和基础饲粮组2。每个处理设6个重复，每个重复6只鸡。在肉鸡22—28日龄开展代谢试验，以重复为单位收集全部排泄物，分别测定饲料和排泄物中的总能、粗蛋白质以及排泄物中的尿酸含量，分析尿酸与豆粕表观代谢能（AME）和氮校正表观代谢能（AMEn）的关系。【结果】（1）豆粕替代比例对肉鸡总能摄入量无显著性影响（P>0.05），但显著影响肉鸡的排泄物总能（P<0.05）。随着豆粕替代比例的增加，试验饲粮AME、AMEn、代谢能利用率显著降低（P<0.05）。（2）随着豆粕替代比例的增加，肉鸡粗蛋白质摄入量、粗蛋白质排泄量、尿酸排泄量以及沉积氮和可消化氮均显著升高（P<0.05）。（3）随着豆粕替代比例的增加，以单位蛋白摄入量为基础的尿酸排泄量（UAO/PI，g·g-1，%）和以单位可消化氮为基础的尿酸氮排泄量（UAN/DN，g·g-1，%）均显著升高（P<0.05）。随着豆粕替代比例的增加，豆粕表观代谢能（AME）和氮校正表观代谢能（AMEn）呈线性显著降低（P<0.05）。（4）单位蛋白摄入量的尿酸排泄量（UAO/PI）和单位可消化氮的尿酸氮排泄量（UAN/DN）与豆粕AME（AMEn）均呈显著的负相关关系（R 2>0.90, P<0.05）。【结论】待测豆粕替代比例显著影响肉鸡氮代谢及其代谢能测定，尿酸排泄量与代谢能存在显著的负相关关系，尿酸氮可以作为优化家禽代谢能体系的指标。
【目的】大理石纹是衡量肉品质的重要指标之一，由牛骨骼肌细胞与牛脂肪细胞共同发育形成。通过最大程度模拟体内肉质形成过程中牛骨骼肌细胞和脂肪细胞互作效应，建立体外两种细胞共培养体系，探究共培养体系下牛骨骼肌细胞分泌和代谢因子对脂肪细胞的调控作用。【方法】采用组织块法和酶消化法分别分离牛脂肪细胞和骨骼肌细胞。利用表型鉴定法和标志基因表达谱鉴定法共同鉴定所分离细胞的纯度和分化潜能，进一步构建牛骨骼肌细胞和牛脂肪细胞条件培养基交换共培养体系以及Transwell共培养体系，通过实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）、EdU染色和油红O染色等方法检测共培养条件下牛骨骼肌细胞分泌和代谢产物对脂肪细胞增殖和分化的影响。【结果】成功构建了两种牛骨骼肌细胞与脂肪细胞的共培养体系。条件培养基交换共培养下，牛脂肪细胞增殖标志基因PCNA、CDK2、CCNE2和CCND1的表达极显著下调（P<0.01）；此外，成脂标志基因FABP4和PPARγ的表达显著下调 （P<0.05）；LPL的表达极显著下调（P<0.01）。另一方面，在Transwell共培养条件下，牛脂肪细胞增殖标志基因CCND1的表达显著下调（P<0.05）；PCNA、CDK1和CCNE2的表达极显著下调（P<0.01），且成脂标志基因FABP4的表达显著下调（P<0.05），PPARγ、C/EBPβ和LPL的表达极显著下调 （P<0.01）。【结论】牛骨骼肌细胞分泌和代谢产物可通过抑制脂肪细胞增殖标志基因PCNA、CDK1、CDK2、CCNE2和CCND1以及成脂标志基因PPARγ、FABP4、C/EBPβ和LPL的表达抑制牛脂肪细胞的增殖与分化。以上研究结果可为进一步探究肉牛肌内脂肪沉积的分子机制提供技术支撑。
【目的】探究亚硒酸钠（sodium selenite，SS）对猪卵母细胞体外成熟及其胚胎发育潜能的影响并对其机制进行初步分析，为猪卵母细胞体外成熟体系的完善提供理论参考。【方法】将猪卵丘卵母细胞复合物（cumulus oocyte complexes，COCs）随机放在不同浓度亚硒酸钠（0、20、40、60、80 nmol·L-1）的成熟培养液中成熟培养44 h后，分别观察卵丘细胞扩展及卵母细胞第一极体（first polar body, PB1）排出情况，收集卵丘细胞并提取其RNA，同时对卵母细胞进行孤雌激活（parthenogenetic activation，PA）处理并进一步对孤雌胚胎进行体外培养，分别于48、168 h统计卵裂率及囊胚率。利用实时荧光定量PCR及观察法对卵丘细胞扩展指数（CEI）、卵丘扩展相关基因（Has2、Ptgs2）表达、卵母细胞第一极体（PB1）排出率和孤雌胚胎的卵裂率及囊胚率进行检测，以探究不同浓度亚硒酸钠对卵母细胞成熟、早期胚胎发育及卵丘细胞扩展的影响，并据此确定亚硒酸钠的最适添加浓度；通过光吸收法及RT-qPCR检测COCs的总抗氧化能力、卵母细胞中谷胱甘肽（GSH）含量和丙二醛（MDA）水平及抗氧化基因（CAT、PRDX2）表达，探讨体外成熟液中添加亚硒酸钠对卵母细胞抗氧化能力的影响；结合免疫荧光技术对囊胚内细胞总数和囊胚多能性基因（Nanog，Sox2）表达进行检测，探究亚硒酸钠对孤雌胚胎发育潜能的影响。【结果】QRT-PCR结果显示不同浓度亚硒酸钠添加均可显著促进PTGS2基因的表达（P<0.05），且40 nmol·L-1浓度下HAS2基因的表达、CEI、卵母细胞PB1、早期胚胎的囊胚率都得到显著促进（P<0.05）；40、60、80、nmol·L-1浓度下亚硒酸钠添加都可促进卵母细胞的卵裂，但40 nmol·L-1 浓度下卵裂促进效果显著（P<0.05），据此确定猪卵母细胞体外成熟液中亚硒酸钠添加浓度为40 nmol·L-1；由抗氧化能力检测结果显示亚硒酸钠可显著提高COCs的总抗氧化能力、卵母细胞的GSH水平、抗氧化基因CAT、PRDX2的表达、显著降低MDA含量（P<0.05）；免疫荧光及PCR结果显示，亚硒酸钠组中囊胚的内细胞团数量升高、Nanog表达升高（P<0.05）。【结论】猪卵母细胞体外成熟液中添加适宜浓度的亚硒酸钠可促进卵丘细胞扩展，提高卵母细胞的成熟率，改善卵母细胞成熟后的发育潜能。亚硒酸钠对卵母细胞体外成熟的这一有利影响可能与其抗氧化作用有关。
【背景】轮状病毒（Rotavirus，RV）是全球范围内幼儿和各种幼畜急性病毒性胃肠炎的主要原因之一，在公共卫生中具有重要意义。猪轮状病毒病是一种由猪轮状病毒（Porcine Rotavirus，PoRV）引起的一种急性肠道传染病，常造成仔猪消化道功能紊乱，引发严重的呕吐、腹泻和脱水症状，一旦爆发将对养猪业造成重大经济损失。目前，针对PoRV感染尚无特效药物治疗，疫苗接种是控制感染的最经济的途径。然而，PoRV基因型多且易变异，不同基因型之间的交叉保护很不理想。因此，亟需加强对PoRV的流行病学监测和致病机制研究，探索新型防控策略。【目的】利用大肠杆菌原核系统表达PoRV NSP2、NSP4和NSP5非结构蛋白并免疫家兔获得相应多克隆抗体，为PoRV的防控和致病机制研究提供技术手段。【方法】将PoRV的NSP2、NSP4和NSP5基因进行密码子优化后，克隆到pCold-sumo载体中。将测序正确的阳性重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导获得重组蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达情况。对重组蛋白进行亲和层析柱纯化和定量后，采用皮下多点注射方法接种新西兰大白兔，每隔14 d加强免疫一次，经过3次免疫后制备多克隆抗体。采用间接ELISA方法测定多克隆抗体的效价、间接免疫荧光（IFA）和Western blot验证多克隆抗体与PoRV的反应性。再通过Western blot进一步检测PoRV感染过程中3个非结构蛋白的动态表达，以及鉴定3个重组真核质粒转染的效果。【结果】NSP2、NSP4和NSP5重组菌能够有效表达目的蛋白，SDS-PAGE分析可在目标位置清晰观察到明显条带，并且目的蛋白以可溶性形式存在。3个重组蛋白制备的多克隆抗体，ELISA效价均超过1﹕81 000，表明重组蛋白免疫原性良好。IFA结果表明3个多克隆抗体均能够与优势流行基因型轮状病毒发生特异性反应，与其他常见腹泻病原无反应。Western blot结果也展示了研究制备的NSP4、NSP5多克隆抗体可用于病毒感染过程中非结构蛋白的动态表达以及真核质粒转染的鉴定。而NSP2多克隆抗体未能特异性识别到PoRV感染后的NSP2蛋白的表达，但特异性检测到NSP2重组质粒转染后的NSP2蛋白表达，这一结果可能与NSP2的表达特性有关，有待进一步研究确认。随后进行的真核质粒转染验证以及PoRV感染过程中非结构蛋白的动态表达检测结果也验证了本实验制备多克隆抗体的实用性。【结论】成功利用大肠杆菌表达了PoRV的NSP2、NSP4和NSP5非结构蛋白，并获得效价高、特异性良好的多克隆抗体，为PoRV致病机制研究和防控技术研发奠定基础。
【目的】研制一种检测胞内劳森菌（Lawsonia intracellularis，LI）抗体的间接ELISA试剂盒，为LI的监测和疫苗评价提供工具。【方法】表达并纯化LI的外膜蛋白Omp2，以其为包被抗原建立检测LI抗体的间接ELISA方法，优化ELISA反应条件；用建立的ELISA方法检测稀释的LI阳性血清来评价试剂盒的敏感性，检测其他病原的阳性血清来评价试剂盒的特异性；试制3批试剂盒，制定试剂盒的敏感性和特异性检验标准，测定试剂盒在4 ℃的保存期；用试制的试剂盒检测LI阴性和阳性质控血清，研究试剂盒的成立条件；通过对不同时间和猪场采集的1 000份临床猪血清样本的检测来评价该试剂盒的实用性；用本试剂盒与进口商品化试剂盒平行检测LI阳性和阴性血清各50份以评价试剂盒的符合率。【结果】成功表达并纯化了Omp2蛋白，蛋白纯度为90.31%，在Western blot试验中可以与LI阳性血清发生反应。ELISA最佳反应条件为：Omp2以200 ng/孔4 ℃包被12-16 h；血清1﹕50稀释，37 ℃孵育30 min；羊抗猪IgG-HRP 1﹕20 000稀释，37 ℃孵育30 min；TMB底物37 ℃显色15 min，用0.5 mol·L-1的硫酸终止反应。该试剂盒检测LI阳性血清的最高检出倍数为8，敏感性较好；试剂盒检测E. coli、App、Mhp、SS2、PRRSV、PRV的结果均为阴性，特异性较好。制定了试剂盒的敏感性和特异性检验标准。试剂盒在4 ℃可保存15个月。试剂盒的成立条件为：阳性标准血清OD450nm≥1.25，阴性标准血清OD450nm<0.3。试制的试剂盒批内、批间重复性试验变异系数均小于10%。与国外商品化ELISA检测试剂盒对比的符合率达86 %。用试制的ELISA试剂盒检测1 000份华东部分地区临床猪血清样品，其中LI阳性检出率为59.90%，表明LI在华东地区猪群中普遍存在。【结论】本研究开发的LI间接ELISA抗体检测试剂盒特异性高，灵敏度高，与商品试剂盒符合率高，可用于临床LI抗体的检测。
【目的】通过揭示c-di-GMP通路基因STM2503调控鼠伤寒沙门菌生物被膜形成，进而影响其环境应激能力的机制，以期挖掘调控鼠伤寒沙门菌压力适应性的关键因子，为防控策略的制定提供理论依据。【方法】以λ-Red同源重组方法构建STM2503缺失株，并利用质粒PBAD表达STM2503来构建相应的基因回补株。然后通过检测不同STM2503表达水平菌株中信号分子c-di-GMP的含量揭示STM2503对菌株胞内c-di-GMP水平的影响。接下来，利用细菌运动性检测、结晶紫染色等试验检测了STM2503对菌株运动性和生物被膜形成能力的影响，并利用实时荧光定量PCR从基因层面揭示其对菌株运动性和生物被膜形成的调控机制。最后，通过抗生素处理、氧化应激、消毒剂应激等试验探究了STM2503对鼠伤寒沙门菌压力适应性的影响。【结果】与野生株（WT269）相比，STM2503的缺失使菌株胞内c-di-GMP含量升高了37.51%（P<0.001），且不影响菌株的正常生长。另外，STM2503的缺失提高了菌株各胞外基质合成基因的表达水平，使缺失株胞外多糖、胞外DNA和胞外蛋白质含量分别增加了10.30%（P<0.01）、33.59%（P<0.001）和27.60%（P<0.01），最终使菌株的生物被膜形成能力显著增强了1.63倍（P<0.01）。并且，269ΔSTM2503通过降低鞭毛合成相关基因fliA与flhC的表达使其在6 h的运动直径较野生株相比下降了17.22%（P<0.01）。这些变化最终导致269ΔSTM2503菌株对头孢噻肟、头孢吡肟、阿莫西林等β-内酰胺类抗生素的敏感性降低1—3倍，且在氧胁迫和SDS消毒剂胁迫下表现出了更强的适应能力。【结论】STM2503参与信号分子c-di-GMP的降解，并通过抑制胞外基质的合成降低鼠伤寒沙门菌的生物被膜形成能力，通过上调鞭毛合成基因的表达增强菌株的运动性，进而降低菌株的耐药性和环境压力适应能力，本研究为鼠伤寒沙门菌关键防控靶点的挖掘提供了理论基础。
【目的】通过探究miRNA-424-5p对奶牛母体胎盘组织胶原蛋白降解的影响，进而明确miRNA-424-5p对奶牛胎衣不下（retained fetal membranes，RFM）发生的调控作用及机制。【方法】检测胎衣正常排出与胎衣不下奶牛母体胎盘组织miRNA-424-5p表达水平，采用qRT-PCR和Western blot方法进行胎衣正常排出与胎衣不下奶牛的母体胎盘组织VEGFA、MMP-2、MMP-9、COL-IV的表达水平检测。应用生物信息学分析对miRNA-424-5p进行靶基因预测，并通过双荧光素酶试验验证miRNA-424-5p与VEGFA的靶向关系。在奶牛子宫内膜上皮细胞中转染miRNA-424-5p mimics和miRNA-424-5p inhibitor进行过表达和沉默miRNA-424-5p。采用免疫荧光技术观察VEGFA在奶牛子宫内膜上皮细胞的表达变化，qRT-PCR和Western blot检测VEGFA、MMP-2、MMP-9、COL-IV的mRNA与蛋白表达水平的变化。【结果】与健康组相比，RFM组母体胎盘组织中的miRNA-424-5p mRNA表达水平显著升高（P<0.01)，VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达水平极显著降低（P<0.01)，COL-IV mRNA与蛋白表达水平极显著升高（P<0.01)。miRNA-424-5p的潜在靶基因共有152个，并经双荧光素酶试验结果证实VEGFA是miRNA-424-5p的靶基因。过表达和沉默miRNA-424-5p后，免疫荧光结果显示，与对照组相比miRNA-424-5p mimics组VEGFA的表达较低，而miRNA-424-5p inhibitor组VEGFA表达较高；qRT-PCR和Western blot结果显示，过表达miRNA-424-5p，靶基因VEGFA mRNA与蛋白表达水平极显著降低，基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达水平极显著降低（P<0.01)，胶原蛋白COL-IV mRNA与蛋白表达水平极显著升高（P<0.01)，而沉默miRNA-424-5p时VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA与蛋白表达显著升高（P<0.01)，COL-IV mRNA与蛋白表达水平极显著降低。【结论】miRNA-424-5p可靶向VEGFA调控MMPs表达、胶原蛋白的分解从而引起细胞外胶原降解障碍，是引起胎衣不下发生的重要因素。
【目的】O型口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）不断变异，易导致现用疫苗与流行毒株的抗原匹配性下降引起免疫效果不佳，疫情零星散发。近年来，O型FMDV中SEA（东南亚）拓扑型流行活跃且不断变异，持续对口蹄疫防疫产生压力。系统解析O型FMDV毒株特异性抗原位点以及不同拓扑型毒株的序列差异，明确抗原变异的关键氨基酸，可为FMD抗原分子设计提供依据，为FMD防控提供指导。【方法】利用10株（SEA拓扑型）毒株特异性牛源单克隆中和抗体，对毒株O/GSLX/2010（O/Mya/98谱系）进行抗体压力筛选逃逸突变株，鉴定这10株抗体所识别表位的关键氨基酸。利用牛源多抗血清样本（32份）与逃逸突变毒株进行病毒交叉中和试验，分析SEA拓扑型毒株的免疫优势表位；通过序列比对分析不同拓扑型毒株在该抗原表位上的差异。利用反向遗传技术将差异性抗原表位引入O型FMDV经典疫苗株O/HN/CHA/93（Cathay拓扑型），对拯救的点突变毒株测序分析后进行间接免疫荧光试验鉴定，并通过病毒蚀斑测定与一步生长曲线检测病毒的复制动力学。利用SEA拓扑型毒株特异性单克隆中和抗体，通过中和试验分析拯救突变株的抗原性，确定影响病毒抗原性的关键氨基酸，评估毒株特异性位点氨基酸的改变对抗原谱的影响。【结果】SEA拓扑型特异性抗原表位主要集中于结构蛋白VP1的B-C/C-D环，属于抗原位点3。10株抗体中多数抗体（8/10）识别的抗原表位在VP1上，其中有6株单抗（A19、B55、B74、C5、F53和F166）识别的关键氨基酸位于VP1 B-C环（T43、K45）及C-D环（P58），另外2株单抗（B66和F41）识别的关键氨基酸位于VP1 C末端。病毒交叉中和试验结果表明，VP1上43位和VP3上131位氨基酸的改变显著降低了牛源多抗血清的抗体效价。对O型FMDV不同谱系毒株（26株）序列进行分析，发现三种拓扑型毒株VP1 B-C/C-D环的28、47、56和58位氨基酸不同。利用反向遗传技术成功将毒株特异性抗原表位引入Cathay拓扑型毒株（O/HN/CHA/93），拯救出6 株FMDV的点突变株：POZ-GSLX-M58、POZ-GSLX-M56/58、POZ-GSLX-M28/58、POZ-GSLX-M47/58、POZ-GSLX-M28/58/47和POZ-GSLX-M47/56/58。微量中和试验结果表明，VP1上56/58位对毒株抗原性起到关键作用；然而，进一步增加28位和47位突变会降低抗体B83的中和作用，影响毒株自身的抗原性。因此，VP1上56和58位氨基酸的改变可以扩展SEA拓扑型特异性中和mAbs对O/HN/CHA/93毒株的中和效力与广度。【结论】O型FMDV结构蛋白VP1上56和58位氨基酸是引起SEA拓扑型毒株抗原变异的关键位点，引入这些抗原决定簇可以拓展FMDV O/HN/CHA/93的抗原谱。研究为FMD防控及疫苗设计提供参考。
【背景】 奶牛乳腺炎是奶牛中危害最严重的疾病之一，严重影响乳品质，不仅造成经济损失，甚至危及人类健康。已有研究表明，lncRNAs广泛参与人和动物的炎症和免疫调节。lncRNA RRAS2-AS1是我们在前期研究中新发现的差异表达lncRNA，其表达模式和功能尚不清楚。【目的】 通过探究lncRNA RRAS2-AS1在奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells, bMECs）炎症反应中的作用机制，为奶牛乳腺炎的分子调控机制解析和抗乳腺炎分子选育提供理论依据。【方法】 利用RT-PCR和RACE等技术进行了lncRNA RRAS2-AS1的克隆，并通过生物信息学方法进行lncRNA RRAS2-AS1的靶基因预测及功能富集分析；利用细胞免疫荧光技术鉴定bMECs，利用细胞核质分离及半定量PCR技术检测了lncRNA RRAS2-AS1的亚细胞定位情况；采用qRT-PCR检测了lncRNA RRAS2-AS1在脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导bMECs炎症反应和乳腺炎奶牛乳腺组织中的表达模式；利用LPS诱导bMECs构建了炎症细胞模型，在此基础上，通过lncRNA超表达、qRT-PCR和ELISA等技术研究了lncRNA RRAS2-AS1对炎性bMECs内的促炎细胞因子基因、增殖相关基因和凋亡相关基因在mRNA和（或）蛋白质水平表达的影响，同时采用EdU、CCK-8和流式细胞术进一步验证了lncRNA RRAS2-AS1对bMECs增殖、活力和凋亡的影响。【结果】 lncRNA RRAS2-AS1基因的长度为363 bp，主要定位于细胞质中。表达量检测结果表明，与对照组相比，lncRNA RRAS2-AS1在LPS诱导炎症的bMECs和乳腺炎组织中的表达量显著下调（P<0.05）；lncRNA RRAS2-AS1超表达试验结果表明，与对照组相比，lncRNA RRAS2-AS1超表达组的炎症信号通路关键基因（TLR4和NF-κB1）、促炎细胞因子基因（IL-1β、IL-6和IL-8）、促凋亡基因（BAD、CASP3和BAX等）的表达量显著下调（P<0.01），而增殖标志基因（CDK2、CDK4和PCNA）的表达量显著上调（P<0.05）。此外，lncRNA RRAS2-AS1超表达组的细胞活力显著增加（P<0.05），而bMECs的凋亡率极显著降低（P<0.01）。【结论】bbbblncRNA RRAS2-AS1在LPS诱导bMECs的炎症反应和乳腺炎奶牛的乳腺组织中均显著下调；超表达lncRNA RRAS2-AS1可下调促炎细胞因子IL-6、IL-8和IL-1β在mRNA和蛋白质水平的表达，并促进细胞活力和增殖、抑制细胞凋亡，从而减轻LPS诱导的bMECs炎症反应，该结果可为解析奶牛乳腺炎的分子调控网络奠定了基础。
【背景】 许多研究报道拷贝数变异（copy number variation, CNV）是一种长度在50 bp至5 Mb之间的缺失或插入，可以影响基因的表达，从而影响动物的生长发育特征，与畜禽重要经济性状有紧密的关联，是一种重要分子遗传标记之一。狮头鹅是世界体型最大鹅种之一，原产地为广东饶平，为广东卤鹅的原材料。但是，至今还没有关于狮头鹅CNV与体重体尺的全基因组关联研究报道。【目的】 通过二代基因组测序数据鉴别狮头鹅的CNV和拷贝数变异区域（copy number variation region, CNVR）在基因组上分布情况，通过CNV与体重体尺性状的关联分析，挖掘显著影响体重体尺的CNV及候选基因，为狮头鹅后续的分子育种研究提供参考。【方法】 试验共收集了来自汕头市白沙禽畜原种研究所的111只狮头鹅，其中公鹅20只，母鹅91只。所有鹅均采用统一标准饲养管理。对111只鹅进行体重体尺测定，体尺性状包括体斜长、胸深、胸宽等9个指标。本试验对111只鹅进行体重体尺测定和二代基因组测序（5×）。测序数据利用SOAPnuke进行质控，软件Speedseq中的 BWA模块进行序列比对，采用Speedseq中的LUMPY和CNVnator模块检测结构变异（structure variation，SV），从SV中筛选CNV。本试验用软件SVtools对CNV进行基因分型，然后采用单标记混合模型开展分型CNV与体重体尺的关联分析。采用染色体显著性水平（即0.05/染色体CNV数目）作为定义与性状显著关联CNV的阈值，对显著CNV位点及上下游50 kb进行基因注释，找到影响狮头鹅体重体尺关联的候选基因。用R包CNVrd2对物理距离小于1 Mb的染色体水平显著CNV和染色体水平显著SNP做连锁不平衡（linkage disequilibrium，LD）分析。【结果】 对于111只狮头鹅，共检测出 99 158个CNV，其中缺失型94 560个，重复型4 598个，CNV平均长度11 858 bp, 大部分（74.06%）CNV长度位于50—1 000 bp区间。CNVR共5 225个，包括缺失型5 029个，重复型110个和混合型86个，CNVR平均长度为7 136 bp, 大部分（81.03%）CNVR长度位于50—1 000 bp区间。功能注释发现46.92% CNVR位于基因间区域，10.30%位于基因上游，9.35%位于基因下游。准确进行基因分型的CNV有6 217个，通过10个体重体尺性状与这些CNV关联分析，共检测55个染色体显著性水平的CNV位点，注释到45个候选基因。在45个候选基因中，发现SETD2、UBR7、G2E3等10个基因同时影响两个及两个以上性状。染色体水平显著CNV独立于染色体水平显著SNP影响体重体尺性状（r2<0.02）。【结论】 通过二代基因组测序首次报道狮头鹅基因组CNV和CNVR分布及CNV和体重体尺关联的情况。本试验共发现影响体重体尺的45个候选基因，其中11个已被报道与畜禽生长信号通路有关，分别是SETD2、UBR7、ASB1和HDAC4参与肌肉的增殖、分化和代谢；G2E3、P3C2B、NOVA1和PDE1B参与脂肪生成和肥胖；ILKAP与调节生长因子有关；KIF1B参与骨代谢；ZFP37参与糖原代谢。这些为后续狮头鹅生长性能的分子遗传机制解析和分子标记挖掘奠定基础。
【目的】 肉牛肌内脂肪沉积与牛肉的风味、多汁性和嫩度密切相关。脂肪沉积过程表现为脂肪细胞的增殖（数量增多）和分化（脂质生成），受到了多基因协同调控。前人研究发现，小鼠中Snail1可以参与肌肉发育和脂质稳态调控，但其在牛脂肪生成过程中的作用仍未知，有待进一步研究。【方法】 以秦川牛为研究对象，克隆得到Snail1 CDS区序列，构建Snail1时空表达谱，运用生物信息学软件对其功能结构及靶基因进行预测。进一步，通过RNAi干扰结合CCK8、EdU、细胞流式及实时荧光定量PCR等方法探究Snail1对牛脂肪细胞增殖的影响。【结果】 秦川牛Snail1与NCBI公布序列相比存在2处碱基同义突变，其在秦川牛新生牛肺、肾周脂肪、小肠呈现较高丰度表达；而在成年牛中，Snail1在肾周脂肪组织中的表达量最高，背最长肌中的表达量次之，肺脏组织中的表达量最低。生物信息学分析发现，Snail1 启动子区存在1个651 bp CpG岛及C/EBP、PPARα 等与脂肪生成相关的转录因子结合位点。CKⅠ(Ser92/96)、CKⅡ（Ser25/119，Thr89）、CDK1（Ser13/104/112/119/143/183/214/221）、CDK5(Ser105/107）等多个细胞周期相关激酶可能参与了Snail1蛋白的磷酸化修饰。通过对牛已注释基因启动子区提取、靶基因预测及 KEGG 动态网络构建发现，成脂相关的 MAPK、PI3K-Akt、mTOR 等信号通路为Snail1参与脂肪生成相关的潜在节点信号通路。进一步，通过RNAi干扰试验对其功能研究表明，Snail1下调促进了牛前体脂肪细胞的增殖，增加了复制期阳性细胞的比例（P<0.01）且促进了G1/S细胞周期转换。RT-qPCR和Western-blot检测表明，干扰Snail1显著上调了促增殖调控基因CCNB1、CCND2、CDK2、CDK4（P<0.05）和蛋白的表达。【结论】 Snail1在新生牛肾周脂肪及成年牛肾周脂肪和背最长肌中表达量相对较高。干扰Snail1促进了牛前体脂肪细胞的增殖、G1/S细胞周期转变和CCNB1、CCND2、CDK2、CDK4 等增殖相关基因表达；CKⅠ、CKⅡ、CDK1/5等多个细胞周期相关激酶可能通过磷酸化修饰Snail1蛋白进而参与细胞增殖调控，而MAPK、PI3K-Akt、mTOR 等为Snail1影响牛脂肪细胞增殖潜在的关键节点通路。研究结果为进一步探究Snail1参与牛脂肪生成作用机制奠定了基础。
弓形虫病是世界范围内危害最为严重的人兽共患寄生虫病之一。WHO数据显示，全球人群弓形虫抗体阳性率在25%—50%。孕妇感染弓形虫引起的垂直传播严重危害胎儿及婴幼儿健康，弓形虫感染也是引起免疫缺陷病人死亡的主要因素。在畜牧生产中，弓形虫病引起孕畜流产、死胎，危害严重。弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种专性细胞内原生动物寄生虫，属于顶复门原虫，生活史复杂，包括在中间宿主（人类和其他温血动物）的无性增殖和在终末宿主（猫科动物）的有性繁殖。为完成弓形虫在中间、终末宿主复杂的生命周期，其在不同发育阶段的转化及生长需要严格而精准的基因调控，因此揭示弓形虫生长发育的调控机制对治疗性药物和疫苗的研发具有重要意义。ApiAP2转录因子是一类具有AP2结构域和强大调节功能的蛋白家族，在疟原虫、弓形虫等寄生虫的生长发育中发挥核心调控作用，是阐明弓形虫不同生活史阶段发育与转化调控机制的突破口。弓形虫作为顶复门原虫研究的模式生物，有67个含AP2结构域的转录因子被注释，部分转录因子在弓形虫生命周期生长发育和转化过程中发挥核心调控功能，但尚有大部分AP2转录因子的生物学功能未知，尤其是针对有性繁殖阶段发育调控的研究较为匮乏。本文对已报道的弓形虫AP2转录因子的研究手段、生物学功能、调控的互作基因及网络进行系统梳理，旨在挖掘对弓形虫生长发育的重要节点起核心调控作用的基因或分子，在微观分子层面初步勾勒出弓形虫复杂生活史不同生长发育时期的调控机制，并对其在新型药物和疫苗研发中的作用及潜能进行展望。以期为动物弓形虫病的防控提供新的思路和切入点，阻断人弓形虫病的感染源，践行“人病兽防、关口前移”，实现“同一世界、同一健康”。
【背景】 山羊繁殖力对肉羊产业有直接影响，而围产期是山羊繁殖过程中特殊的生理时期，此时母畜采食量减少，能量摄入降低，同时子代的营养需求急剧增加，母羊在此阶段容易进入能量负平衡状态，诱发一系列不良反应，如代谢疾病，炎症反应，造成免疫抑制甚至流产等问题。【目的】 通过对围产期日粮添加姜黄素缓解母羊能量负平衡状态，从山羊生产性能、血液指标和炎症因子基因表达等方面入手，为改善围产期山羊健康提出可行路径。【方法】 选择18只妊娠122 d（即产前28 d）的经产苏白母山羊，分为对照组（无添加，Con）和姜黄素组（Curcumin, 下文缩写Cur补充Cur 800 mg·kg-1 DMI）。采集母羊产前21 d（d-21）、产后0（d0）和21 d（d21）的血液，测定生产性能、血液指标及炎症因子基因表达。【结果】 Cur处理不影响母羊采食量、羔羊出生体重体尺和日增重；两组母羊分娩前后采食量均表现为先下降后升高的趋势，在分娩当日采食量最低（P=0.097）。Cur处理有提高血清葡萄糖含量的趋势（P=0.075）。Cur处理显著降低d0和d21的血清游离脂肪酸（NEFA）含量（P<0.05），但不影响低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、总胆固醇（TC）及甘油三酯（TG）含量（P>0.05）。Cur处理有提高d21总抗氧化能力（T-AOC）水平的趋势（P=0.073），显著降低了d0丙二醛（MDA）含量，但不影响超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平（P>0.05）。Cur处理不影响免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）含量（P>0.05）。Cur处理显著升高d21核转录因子红系2（Nrf2）表达量（P<0.05），降低d0肿瘤坏死因子（TNFα）表达量（P<0.05），但不影响白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）及干扰素γ（IFNγ）基因表达量（P>0.05）。【结论】 围产期日粮添加姜黄素能在一定程度上降低围产期母羊的血清游离脂肪酸水平，增强抗氧化性能，降低炎症反应。
【目的】 探讨日粮中添加蛹虫草对断奶仔猪生长和免疫性能的影响及调节断奶仔猪免疫应激的机制，为新型饲料添加剂筛选提供依据。【方法】 选取相同日龄、初始体重相似的杜×长×大早期断奶仔猪144头并随机分为4组：NC组（基础日粮）、LPS组（LPS+基础日粮）、LPS+500CM组（LPS+基础日粮+500 mg·kg-1 CM）、LPS+1 000 CM（LPS+基础日粮+1 000 mg·kg-1 CM）。NC组和LPS组饲喂基础日粮，LPS+500CM组和LPS+1000CM组分别按照比例将蛹虫草粉与基础日粮充分混匀后饲喂。饲养结束后，每组随机挑选6头（公母各半）屠宰，屠宰前4h对LPS组、LPS+500CM组和LPS+1000CM组腹腔注射LPS，NC组注射等量生理盐水。屠宰后采集背最长肌、心脏、肝脏、脾脏、胰脏和肾脏进行检测。【结果】 对体重及采食量统计分析，结果显示，日粮添加蛹虫草饲喂仔猪对仔猪平均日采食量无显著影响，而添加500 mg·kg-1CM和1 000 mg·kg-1CM的仔猪分别比对照组仔猪体重提高了8.58%（P<0.05）和9.08%（P<0.05）。相比于NC组，LPS组仔猪脾脏指数显著降低（P<0.05），而LPS+500CM组和LPS+1000CM组仔猪脾脏指数均显著高于LPS组（P<0.05）。肝功能生物标志物和总胆汁酸检测表明，LPS组仔猪肝脏ALT水平比NC组显著升高（P <0.05），AST、LDH、总胆汁酸水平有上升趋势。而饲料中添加有蛹虫草的LPS+500CM组和LPS+1000CM组的ALT、AST、LDH和总胆汁酸水平均比LPS组的指标显著降低。肝脏抗氧化指标和炎症因子表达检测显示，LPS组仔猪肝脏的MDA、LPO、T-AOC水平及炎症因子表达显著升高（P<0.05），而CAT、GSH-Px、T-SOD水平显著降低（P<0.01），而用蛹虫草饲喂仔猪可以显著缓解这些指标的升高或降低。LPS组骨骼肌粗蛋白和氨基酸含量显著减低（P<0.01），而日粮添加蛹虫草饲喂可以显著缓解LPS导致的蛋白和氨基酸含量减少（P<0.01）。与NC相比，LPS组炎症因子表达显著升高（P<0.05），而日粮添加蛹虫草饲喂后炎症因子表达比LPS组显著降低（P<0.05）。LPS组仔猪背最长肌中的MDA和LPO和水平显著高于NC组（P<0.01），而T-AOC、CAT、GSH-Px和T-SOD水平则显著降低（P<0.01），日粮添加蛹虫草可缓解这种异常的升高或降低。对Akt、t-mTOR、4EBP1、FOXO1磷酸化水平进行检测，发现LPS组相比于NC组具有降低的趋势，而MAFbx、MuRF1的蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。日粮中添加蛹虫草饲喂后，仔猪背最长肌Akt、FOXO1磷酸化水平显著提高（P<0.05），而MAFbx、MuRF1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。【结论】 日粮中添加蛹虫草可以提高断奶仔猪生长性能和免疫性能；蛹虫草可以抑制LPS导致的背最长肌粗蛋白和总氨基酸含量降低；蛹虫草可以抑制肝脏炎症和肝细胞过度增殖和凋亡，并提高了肝脏抗氧化能力；蛹虫草可以抑制断奶仔猪背最长肌炎症、氧化应激和蛋白质分解。总之，日粮中添加蛹虫草可以提高断奶仔猪生长和免疫性能，缓解LPS导致的肝损伤及蛋白质的降解，为筛选新型饲料添加剂及预防断奶仔猪免疫应激提供理论依据。
【目的】探索靶向捕获测序技术的猪单倍型基因组选择研究效果，为我国猪分子育种提供借鉴。【方法】收集了1 267头大白猪的生长性能测定记录和800头大白猪的繁殖记录，利用基于靶向捕获测序技术（genotyping by target sequencing，GBTS）开发的猪50K液相芯片（液相50K）以及靶向捕获重测序数据进行基因型分型，对靶向捕获重测序数据进行单倍型分析，比较固定SNP数目、固定物理间距和靶向block三种单倍型区块划分方法以及单个SNP数据的基因组选择准确性。其中靶向block方法是基于靶向捕获测序技术设计的一种单倍型区块划分方法，通过将靶位点与其上下游400 bp 内SNP（mSNP）组合为一个block的方式构建单倍型。本研究对每个单倍型区块采用Beagle5.1进行单倍型推断后，将不同单倍型重新编码为单倍型等位基因，然后利用单倍型剂量模型构建单倍型基因型矩阵，采用一步法模型（ssGBLUP），估计达百公斤体重日龄(AGE)、百公斤活体背膘厚(BF)和总产仔数(TNB)三个性状的基因组育种值。对两个生长性状（AGE和BF）使用双性状动物模型进行估计，对总产仔数性状使用单性状重复力模型。使用年轻群体验证和5倍交叉验证两种验证方法，计算基因组估计育种值与育种值之间的相关系数和基因组估计育种值对估计育种值的回归系数，分别评价单倍型基因组预测准确性和无偏性。【结果】年轻群体作为验证群体的基因组预测结果表明，相较于液相50K SNP，基因型质量控制后，靶向捕获重测序标记数由液相50K 的42 302增加到了88 105，但其对三个性状的基因组选择准确性反而有所下降。通过靶向block方法划分的单倍型区块平均包含SNP 2.08个、单倍型等位基因5.67个。基于三种单倍型区块划分方法进行的单倍型基因组选择准确性都得到了提高，其中靶向block提升幅度最大，AGE、BF和TNB三个性状准确性比液相50K分别提高了4.80%，1.98%和6.04%，靶向block多数情况下基因组预测无偏性最优。交叉验证结果与年轻群体验证相似，靶向block方法相较于单标记SNP和其他单倍型区块划分方法均有一定优势，固定间距400 bp划分单倍型的基因组选择效果与靶向block单倍型接近但计算时间增加；固定2个和5个SNP单倍型区块划分方法单倍型基因组预测准确性较单个SNP均有一定提升，但低于靶向block单倍型。【结论】由于液相芯片标记的特点，靶向重测序数据mSNP与液相50K SNP芯片标记多数处于高度连锁不平衡状态，利用靶向block划分的单倍型基因组选择准确性优于50K SNP以及其他两种单倍型区块划分方法，进一步利用了液相芯片的技术优势，拓宽了基于GBTS技术的液相芯片在基因组分析方面的应用。
【目的】从我国中东部主要养猪地区因呼吸道疾病死亡的育肥猪病料中分离主要病原菌，并进行鉴定和分型，为近年流行的猪呼吸道病原菌的防控治疗提供流行病学依据。此外，对分离的猪多杀性巴氏杆菌（Pm）特性进行鉴定，为Pm疫苗研制提供参考。【方法】收集2021-2023年我国中东部主要养猪地区规模化猪场因呼吸道疾病死亡的育肥猪的病猪肺脏；用血琼脂和TSA培养基分离病原菌，通过微生物学和分子生物学方法鉴定分离菌株；合成adk、est、gdh、mdh、pgi、pmi和zwf基因引物，以分离的Pm为模板进行PCR，通过测序7对管家基因对Pm进行MLST分型；通过PCR对Pm进行荚膜分型和脂多糖分型；通过PCR对Pm的毒力因子进行检测；在ICR小鼠对单一分离的A型和部分D、F型Pm进行毒力鉴定；检测JS-65、JS-51和JS-34在ICR小鼠的LD50。【结果】共分离Pm 73株，分离率为15.53%；分离猪链球菌（SS）71株、猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）29株和副猪格拉菌（GPS）10株，分离率分别为15.11%、6.17%和2.13%。分型结果表明，Pm主要为A：L3型，占55%；SS主要为9型，占38.03%；APP主要为15型，占51.72%；GPS主要为5/12型，占60%。混合感染包括Pm+SS，Pm+APP，SS+APP和Pm+APP+GPS，混合感染占总猪群的16.67%。共分离到3种Pm荚膜型：A（67%）、D（30%）和F（3%）型；2种脂多糖型：L3型（56%）和L6型（44%）；9种ST分型：ST79、ST50、ST7、ST74、ST13、ST27、ST9、ST287和ST370，所占比例分别为33%、26%、16%、10%、4%、4%、3%、3%和1%。毒力基因检测结果表明：ptfA、fimA、hsf-2、exbB、exbD、tonB、fur、nanH、sodA和sodC的阳性率大于95%；hsf-1、pfhA、tadD、hgbA、hgbB、pmHAS、ompA、ompH、oma87和plpB阳性率在40%-90%之间；tbpA和nanB阳性率在10%-30%；未检出toxA。毒力鉴定结果表明A型菌株在剂量小于102 CFU时导致小鼠全部死亡，D型菌株在103 CFU剂量时小鼠死亡率为60%-100%，F型菌株在5×103 CFU剂量时小鼠死亡率为60%。在ICR小鼠检测JS-65、JS-51和JS-34的LD50，结果表明JS-65 LD50<10 CFU，JS-51 LD50=6.3×102 CFU，JS-34 LD50=3.98×103 CFU。【结论】2021-2023年我国中东部主要养猪地区病原菌分离结果表明，Pm、SS、APP和GPS是死亡育肥猪的主要呼吸道病原菌，Pm在肺脏中的分离率最高。采用RIRDC分型鉴定到一株ST370 Pm，拓展了猪Pm的MLST分型数据。Pm优势基因型为A：L3：ST79，其在ICR小鼠中毒力最强，最小致死量小于10 CFU，为后续Pm灭活疫苗研制奠定基础。
