中国农业科学 ›› 2023, Vol. 56 ›› Issue (22): 4386-4402.doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2023.22.003
杨莎(), 刘珂珂, 刘颖, 郭峰, 王建国, 高华鑫, 孟静静, 张佳蕾(
), 万书波(
)
收稿日期:
2023-04-30
接受日期:
2023-06-25
出版日期:
2023-11-16
发布日期:
2023-11-17
通信作者:
张佳蕾,E-mail:zhangjialei19@163.com。联系方式:
杨莎,E-mail:yangsha0904@126.com。
基金资助:
YANG Sha(), LIU KeKe, LIU Ying, GUO Feng, WANG JianGuo, GAO HuaXin, MENG JingJing, ZHANG JiaLei(
), WAN ShuBo(
)
Received:
2023-04-30
Accepted:
2023-06-25
Published:
2023-11-16
Online:
2023-11-17
摘要:
【目的】 在中国,为保证出苗率及播种质量,田间常采用多粒播种。然而,多粒穴播植株间的竞争往往限制了植株的生长和最终产量。为了解决这一矛盾,团队前期研究建立了单粒精准播种的高产栽培技术。单粒精播技术的节种作用和增产效果结合起来能够带来更大的效益,实现节本增效。挖掘不同种植方式花生叶片、根系及荚果中的差异表达基因,探讨单粒精播栽培技术提高花生荚果产量的分子机制,为进一步推动花生高产高效提供理论依据和技术支撑。【方法】以花生品种花育25号为试材,测定单粒精播和多粒穴播种植产量相关指标,分别取花生开花后30 d倒三叶和主根及侧根、鸡头幼果期花生荚果进行转录组测序,从分子水平阐述不同播种方式花生产量的差异。【结果】与多粒穴播相比较,单粒精播种植方式下花生单株荚果数、单株饱果数、单株果重、经济系数均显著提高。转录组数据组装后,平均每库包含4 430万个读数。通过不同比较组合中差异表达基因、GO和KEGG通路分析,与多粒穴播相比较,单粒精播种植植物叶片中参与赤霉素信号传导、光信号传导等过程的转录因子及光系统Ⅱ放氧复合体、叶绿体膜、氧化还原反应等光合作用相关基因表达量升高;根系中生物胁迫和非生物胁迫诱导的苯丙素代谢途径相关基因包括细胞色素P450基因、氧化还原基因、胁迫反应转录因子和信号调节蛋白显著富集。荚果发育初期淀粉和蔗糖代谢基因显著富集,更加有利于花生荚果发育过程中籽仁充实。【结论】花生叶片中光合相关基因表达上调能够促进光合效率提升,与产量的增加密切相关;单粒精播提高了根系抗生物和非生物胁迫的能力,结合荚果发育初期能量物质相关基因表达上调均有利于地下部花生荚果的发育,提高花生产量。
杨莎, 刘珂珂, 刘颖, 郭峰, 王建国, 高华鑫, 孟静静, 张佳蕾, 万书波. 基于转录组分析花生单粒精播与多粒穴播植株荚果产量差异的分子机制[J]. 中国农业科学, 2023, 56(22): 4386-4402.
YANG Sha, LIU KeKe, LIU Ying, GUO Feng, WANG JianGuo, GAO HuaXin, MENG JingJing, ZHANG JiaLei, WAN ShuBo. The Molecular Mechanism of Pod Yield Difference Between Single- Seeding Precision Sowing and Multi-Seeds Sowing of Peanut Based on Transcriptome Analysis[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2023, 56(22): 4386-4402.
表1
不同种植方式下花生成熟期单株荚果的变化"
处理 Treatment | 单株荚果数 Pods number per plant | 单株饱果数 Full pods number per plant | 单株果重 Pod weight per plant (g) | 经济系数 Economic coefficient |
---|---|---|---|---|
单粒精播Single-seeding sowing | 36.65a | 24.53a | 49.76a | 0.50a |
三粒穴播Three-seeds sowing | 25.36b | 15.28b | 30.08b | 0.47b |
五粒穴播Five-seeds sowing | 18.32c | 11.57c | 21.61c | 0.44c |
表2
转录组测序基础数据统计分析"
样品名称 Sample | 总Reads数 Total Reads | 比对Reads数(比例,%) Mapped Reads (rate, %) | 唯一比对Reads数(比例,%) Unique mapped Reads (rate, %) | GC (%) | Q30 (%) |
---|---|---|---|---|---|
SL1 | 44772228 | 38582620(86.18) | 33161778(74.07) | 44.66 | 92.74 |
SL2 | 46785506 | 32233417(68.90) | 27751126(59.32) | 43.93 | 93.31 |
SL3 | 44432256 | 32447247(73.03) | 28195266(63.46) | 43.72 | 92.98 |
TL1 | 45116924 | 34153847(75.70) | 29418012(65.20) | 43.99 | 92.73 |
TL2 | 43591552 | 31397226(72.03) | 27154180(62.29) | 43.86 | 92.28 |
TL3 | 42632812 | 26466552(62.08) | 22807469(53.50) | 43.4 | 92.07 |
FL1 | 44072996 | 35858508(81.36) | 31020506(70.38) | 44.3 | 92.71 |
FL2 | 45559666 | 43974477(96.52) | 38094612(83.61) | 44.79 | 92.81 |
FL3 | 46187310 | 31797098(68.84) | 27572825(59.70) | 43.88 | 93.07 |
SR1 | 47377928 | 43355223(91.51) | 37493509(79.14) | 44.5 | 92.19 |
SR2 | 45195968 | 41281627(91.34) | 36025392(79.71) | 43.88 | 92.36 |
SR3 | 45334094 | 41321686(91.15) | 35598328(78.52) | 44.39 | 95.29 |
TR1 | 41574892 | 37787724(90.89) | 32604339(78.42) | 44.05 | 92.44 |
TR2 | 41568054 | 38387877(92.35) | 33053700(79.52) | 44.18 | 92.58 |
TR3 | 42011010 | 37666147(89.66) | 32554905(77.49) | 44.1 | 92.28 |
FR1 | 44329820 | 40528849(91.43) | 35108182(79.20) | 44.04 | 92.27 |
FR2 | 45598270 | 40336991(88.46) | 34921268(76.58) | 43.95 | 92.45 |
FR3 | 43519726 | 39373659(90.47) | 34031257(78.20) | 44.14 | 92.91 |
SP1 | 49413724 | 47483883(96.09) | 41146339(83.27) | 43.03 | 93 |
SP2 | 45104370 | 42742170(94.76) | 36636507(81.23) | 44.65 | 92.98 |
SP3 | 43696522 | 41148585(94.17) | 35223387(80.61) | 44.6 | 93.11 |
TP1 | 44665792 | 43185909(96.69) | 37602935(84.19) | 44.34 | 92.98 |
TP2 | 42940308 | 40711465(94.81) | 34920983(81.32) | 44.29 | 93.2 |
TP3 | 40846304 | 38967000(95.40) | 33445775(81.88) | 43.97 | 93.65 |
FP1 | 41393174 | 38868585(93.90) | 33223381(80.26) | 44.02 | 93.27 |
FP2 | 44726794 | 42588347(95.22) | 36499220(81.60) | 43.88 | 93.13 |
FP3 | 43701578 | 41660050(95.33) | 35997345(82.37) | 43.46 | 93.61 |
表3
不同播种方式下花生叶片、根及荚果中差异表达基因GO和KEGG富集分析"
说明 Description | 上调 Up | 下调 Down | ||||
---|---|---|---|---|---|---|
GO | ||||||
SL vs FL | 序列特异性DNA结合Sequence-specific DNA binding | 核小体组装、染色质组装、核小体组织、DNA包装 Nucleosome assembly, chromatin assembly, nucleosome organization, DNA packaging | ||||
SL vs TL | 光系统Ⅱ放氧复合体、膜外成分、类囊体膜、氧化还原复合体、光系统Ⅱ Photosystem Ⅱoxygen evolving complex, extrinsic component of membrane, thylakoid membrane, oxidoreductase complex, photosystem Ⅱ | 核小体组装、染色质组装、核小体组织、DNA包装、染色质组装或卸载 Nucleosome assembly, chromatin assembly, nucleosome organization, DNA packaging, chromatin assembly or disassembly | ||||
KEGG | ||||||
SL vs FL | 植物-病原体互作、甘油脂代谢类胡萝卜素、生物合成、甘油磷脂代谢 Plant-pathogen interaction, glycerolipid metabolism, carotenoid biosynthesis, glycerophospholipid metabolism | 硫胺素代谢、2-氧代羧酸代谢 Thiamine metabolism, 2-Oxocarboxylic acid metabolism | ||||
SL vs TL | 甘油脂代谢、卟啉和叶绿素代谢 Glycerolipid metabolism, porphyrin and chlorophyll metabolism | 柠檬酸循环、氨基酸生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢 Citrate cycle, biosynthesis of amino acids, arginine and proline metabolism, cysteine and methionine metabolism | ||||
GO | ||||||
SR vs FR | 对生物刺激的响应、对氧化胁迫的响应、过氧化物酶活性、氧化还原酶活性、抗氧化剂活性 Response to biotic stimulus, response to oxidative stress, peroxidase activity, oxidoreductase activity, antioxidant activity | 二糖代谢过程、低聚糖生物合成过程、丝氨酸水解酶活性 Disaccharide metabolic process, oligosaccharide biosynthetic process, serine hydrolase activity | ||||
SR vs TR | 过氧化物酶活性、氧化还原酶活性、细胞壁、对氧化胁迫响应、多种有机体过程 Peroxidase activity, oxidoreductase activity, cell wall, response to oxidative stress, multi-organism process | 生长素响应、糖脂运输、糖脂转运蛋白活性、磺基转移酶活性 Response to auxin, glycolipid transport, glycolipid transporter activity, sulfotransferase activity | ||||
KEGG | ||||||
SR vs FR | 苯丙素生物合成、MAPK信号途径、植物-病原体互作、谷胱甘肽代谢 Phenylpropanoid biosynthesis, MAPK signaling pathway, plant- pathogen interaction, glutathione metabolism | 淀粉和蔗糖代谢、ABC转运蛋白 Starch and sucrose metabolism, ABC transporters | ||||
SR vs TR | 植物-病原体互作、苯丙素生物合成、MAPK信号途径、类黄酮生物合成 Plant-pathogen interaction, phenylpropanoid biosynthesis, MAPK signaling pathway, flavonoid biosynthesis | 剪接体、嘌呤代谢、内质网中的蛋白质加工、内吞作用 Spliceosome, purine metabolism, protein processing in endoplasmic reticulum, endocytosis | ||||
GO | ||||||
SP vs FP | 细胞外区域、聚半乳糖醛酸酶活性、内肽酶活性 Extracellular region, polygalacturonase activity, endopeptidase activity | 金属离子运输、细胞葡聚糖代谢过程、质外体、序列特异性DNA结合 Metal ion transport, cellular glucan metabolic process, apoplast, sequence-specific DNA binding | ||||
SP vs TP | 对生物刺激的反应、多糖代谢过程、防御反应、纤维素合酶活性、聚半乳糖醛酸酶活性 Response to biotic stimulus, polysaccharide metabolic process, defense response, cellulose synthase activity, polygalacturonase activity | DNA复制、DNA代谢过程、染色体、DNA包装复合体、微管结合 DNA replication, DNA metabolic process, chromosome, DNA packaging complex, microtubule binding | ||||
KEGG | ||||||
SP vs FP | 苯丙素生物合成、淀粉和蔗糖代谢 Phenylpropanoid biosynthesis, starch and sucrose metabolism | 植物-病原体互作、脂肪酸降解 Plant-pathogen interaction, fatty acid degradation | ||||
SP vs TP | 苯丙素生物合成、卟啉与叶绿素代谢、生长素响应、淀粉和蔗糖代谢 Phenylpropanoid biosynthesis, porphyrin and chlorophyll metabolism, auxin response, starch and sucrose metabolism | DNA复制、类黄酮生物合成、错配修复、色氨酸代谢、糖酵解/糖异生 DNA replication, flavonoid biosynthesis, mismatch repair, tryptophan metabolism, glycolysis/gluconeogenesis |
表4
单粒精播种植叶片、根及荚果中与产量相关差异表达基因列表"
基因ID Gene_ID | 基因说明 Gene description | 比较组 Comparison group | |
---|---|---|---|
转录因子Transcription factor | SL vs FL | ||
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.DV7QWZ | MYB类DNA结合域MYB-like DNA-binding domain | 2.62 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.HAG9AR | MYB类DNA结合域MYB-like DNA-binding domain | 1.86 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.C9M3KU | MYB类DNA结合域MYB-like DNA-binding domain | 1.78 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.F9DTFM | GRAS结构域家族GRAS domain family | 2.19 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.CF7XAP | GRAS结构域家族GRAS domain family | 1.67 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.8X00QX | GRAS结构域家族GRAS domain family | 1.68 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.52HH2Q | DnaJ结构域DnaJ domain | 2.74 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.BDT6Z1 | DnaJ结构域DnaJ domain | 2.87 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.206U1W | WRKY DNA结合域WRKY DNA-binding domain | 2.81 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.KK3V44 | WRKY DNA结合域WRKY DNA-binding domain | 2.01 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.EXJ5K8 | WRKY DNA结合域WRKY DNA-binding domain | 1.98 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.TC7Y0P | WRKY DNA结合域WRKY DNA-binding domain | 2.48 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.N4K2VQ | HSP70蛋白HSP70 protein | 2.05 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.LTRJ1V | HSP70蛋白HSP70 protein | 1.82 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.ECZ3V7 | HSP70蛋白HSP70 protein | 1.95 | |
SL vs TL | |||
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.ZTD7SX | WRKY DNA结合域WRKY DNA-binding domain | 3.48 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.13YX47 | WRKY DNA结合域WRKY DNA-binding domain | 2.62 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.EXJ5K8 | WRKY DNA结合域WRKY DNA-binding domain | 2.36 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.WH6N3S | WRKY DNA结合域WRKY DNA-binding domain | 3.51 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.TC7Y0P | WRKY DNA结合域WRKY DNA-binding domain | 1.69 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.LTRJ1V | HSP70蛋白Hsp70 protein | 1.88 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.N4K2VQ | HSP70蛋白Hsp70 protein | 1.91 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.PR7AYB | MYB类DNA结合域Myb-like DNA-binding domain | 1.74 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.UW10HH | DnaJ结构域DnaJ domain | 1.29 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.BDT6Z1 | DnaJ结构域DnaJ domain | 2.44 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.6YZ37K | DnaJ结构域DnaJ domain | 1.55 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.FPX6WQ | GRAS结构域家族GRAS domain family | 1.38 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.F9DTFM | GRAS结构域家族GRAS domain family | 2.17 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.3U6Z4I | GRAS结构域家族GRAS domain family | 1.52 | |
MAPK信号途径MAPK signal pathway | SR vs FR | ||
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.VQ5KVR | 聚酮环化酶Polyketide cyclase | 1.18 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.UY7VYK | 氨基转移酶Ⅰ类和Ⅱ类Aminotransferase classⅠandⅡ | 2.33 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.744VXT | 半胱氨酸富集分泌蛋白家族Cysteine-rich secretory protein family | 5.92 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.WP6DIZ | 半胱氨酸富集分泌蛋白家族Cysteine-rich secretory protein family | 10.14 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.SLKX21 | 半胱氨酸富集分泌蛋白家族Cysteine-rich secretory protein family | 8.91 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.T12YHH | 半胱氨酸富集分泌蛋白家族Cysteine-rich secretory protein family | 10.98 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.WFS9KG | NADPH 氧化酶NADPH oxidase | 3.56 | |
SR vs TR | |||
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.XA421G | 蛋白激酶结构域Protein kinase domain | 1.61 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.RQ7QZ9 | 蛋白激酶结构域Protein kinase domain | 1.27 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.CD5B6Y | 蛋白磷酸酶2C Protein phosphatase 2C | 1.39 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.GYA3XJ | 蛋白激酶结构域Protein kinase domain | 2.02 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.SQ16A9 | 蛋白激酶结构域Protein kinase domain | 1.65 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.UY7VYK | 氨基转移酶Ⅰ类和Ⅱ类Aminotransferase classⅠandⅡ | 2.64 | |
arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.S2Q0RR | 氨基转移酶Ⅰ类和Ⅱ类Aminotransferase classⅠandⅡ | 4.41 |
表5
SP vs TP中DEGs的GO条目"
分类 Category | GO ID | 描述 Description | 基因占比 Gene ratio | Bg比例 Bg ratio | <BOLD>P</BOLD> | padj | 基因号 <BOLD>G</BOLD>ene ID | 基因 Gene | 数量 Count |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
生物过程 Biological processes | GO:0009733 | 生长素响应 Response to auxin | 4/1852 | 56/15502 | 0.914927 | 1 | arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.T2QDAL/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.DWH8JW/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.SE3NL1/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.3U3G48 | arahy.T2QDAL/arahy.DWH8JW/arahy.SE3NL1/arahy.3U3G48 | 4 |
GO:0016567 | 蛋白泛素化 Protein ubiquitination | 7/1852 | 93/15502 | 0.938425 | 1 | arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.VNN39M/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.AS1G8G/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.2EPV6W/novel.3009/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.U5RGLT/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.SWIT4Z/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.3VLA0M | arahy.VNN39M/arahy.AS1G8G/arahy.2EPV6W/-/arahy.U5RGLT/arahy.SWIT4Z/arahy.3VLA0M | 7 | |
GO:0032446 | 蛋白修饰 Protein modification by small protein conjugation | 7/1852 | 95/15502 | 0.946406 | 1 | arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.VNN39M/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.AS1G8G/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.2EPV6W/novel.3009/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.U5RGLT/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.SWIT4Z/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.3VLA0M | arahy.VNN39M/arahy.AS1G8G/arahy.2EPV6W/-/arahy.U5RGLT/arahy.SWIT4Z/arahy.3VLA0M | 7 | |
GO:0070647 | 蛋白修饰 Protein modification by small protein conjugation | 9/1852 | 156/15502 | 0.996949 | 1 | arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.VNN39M/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.AS1G8G/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.2EPV6W/novel.3009/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.U5RGLT/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.SWIT4Z/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.IA0PF7/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.3VLA0M/novel.4376 | arahy.VNN39M/arahy.AS1G8G/arahy.2EPV6W/-/arahy.U5RGLT/arahy.SWIT4Z/arahy.IA0PF7/arahy.3VLA0M/- | 9 | |
细胞组成 Cell composition | GO:0009507 | 叶绿体 Chloroplast | 4/629 | 18/5537 | 0.139551 | 0.853529 | arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.L27P26/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.ZGZX3T/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.RCVM4C/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.L0KK3Q | arahy.L27P26/arahy.ZGZX3T/arahy.RCVM4C/arahy.L0KK3Q | 4 |
分子功能 Molecular function | GO:0004842 | 泛素蛋白转移酶活性 Ubiquitin-protein transferase activity | 7/2629 | 125/23997 | 0.987201 | 1 | arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.VNN39M/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.AS1G8G/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.2EPV6W/novel.3009/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.U5RGLT/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.SWIT4Z/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.3VLA0M | arahy.VNN39M/arahy.AS1G8G/arahy.2EPV6W/-/arahy.U5RGLT/arahy.SWIT4Z/arahy.3VLA0M | 7 |
GO:0019787 | 泛素类蛋白转移酶活性 Ubiquitin-like protein transferase activity | 7/2629 | 125/23997 | 0.987201 | 1 | arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.VNN39M/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.AS1G8G/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.2EPV6W/novel.3009/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.U5RGLT/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.SWIT4Z/arahy.Tifrunner.gnm1.ann1.3VLA0M | arahy.VNN39M/arahy.AS1G8G/arahy.2EPV6W/-/arahy.U5RGLT/arahy.SWIT4Z/arahy.3VLA0M | 7 |
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