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中国农业科学2016 Vol.49 按期号、起始页码排序 Please wait a minute... 选择: 下载引用 EndNote Reference Manager ProCite BibTeX RefWorks 显示/隐藏图片 Select 1. 水稻开颖半不育突变体的观察、遗传分析和基因定位 陈立凯，黄明，刘永柱，王慧，陈志强，郭涛 2016, 49 (1): 1-13.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.001 摘要 （847）   HTML （10）    PDF （7668KB）（738）    可视化    收藏 【目的】通过对一份航天诱变水稻（Oryza sativa L.）开颖半不育突变体ohss（open-hull semi-sterility）进行形态特性调查、遗传分析和基因定位，筛选候选基因，为下一步基因克隆和功能分析奠定基础。【方法】以籼稻品种航恢七号为材料，通过“神舟八号”飞船搭载，诱变获得一份水稻开颖半不育突变体ohss。对其进行形态特征解剖观察，分析颖花器官发育突变特点。调查突变体和野生型的花粉可育率、自然结实率和套袋自交结实率，对其育性进行鉴定。随机选取5个成熟单株，考察穗部谷粒相关性状并进行统计分析。通过覆盖全基因组的SSR分子标记检测，解析空间诱变的分子变异效应。以航恢七号、Francis和02428与突变体ohss配制杂交组合，观察F1和F2植株的花器官表型，进行?2测验，对突变性状进行遗传分析。以02428/ohss的F2分离群体作为目标基因定位群体，同时利用SSR标记以及新开发的多个InDel分子标记开展基因定位研究。利用RAP水稻基因组注释数据库对定位区间的候选基因进行预测，通过序列比对和基因表达分析筛选候选基因。【结果】开颖半不育花器官突变体ohss与野生型相比，抽穗期穗部明显包茎，颖花发育出现异常，内外稃片瘪弱、扭曲变形且开裂不抱合，颖花内部发育类似内稃状的器官，部分颖花没有内稃的分化。ohss发育异常颖花中可育花粉率58.74%，导致单株结实率、穗重、穗实粒数与野生型相比极显著降低。全基因组SSR标记检测表明突变体ohss总变异频率为0.0336，除了第7、12染色体未检测到突变位点，其他染色体上检测到突变频率范围为0.0143—0.0889。遗传分析结果显示ohss的开颖半不育表型受单隐性核基因ohss(t)控制，并将ohss(t)定位在水稻第3染色体上2个InDel标记InDel6043和InDel6070之间约27.6 kb的物理距离内。该区域有3个预测注释基因，序列比对和表达分析表明突变体ohss的OsMADS1编码区及启动子序列未发生突变，但是表达模式发生强烈改变。【结论】开颖半不育的花器官发育突变体ohss受单隐性核基因ohss(t)控制，ohss(t)定位在水稻第3染色体上InDel6043和InDel6070标记之间约27.6 kb的物理距离内，其OsMADS1的编码序列及5′UTR区未发生碱基突变但表达受到强烈抑制。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(2) Select 2. 结球甘蓝SRK-ARC1-Exo70A1互作域的确定及作用强度 施松梅，高启国，廉小平，毕云龙，刘晓欢，蒲全明，刘贵喜，柳菁 2016, 49 (1): 14-26.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.002 摘要 （420）   HTML （1）    PDF （1983KB）（694）    可视化    收藏 【目的】深入研究甘蓝自交不亲和信号传导关键元件S-位点受体激酶SRK与臂重复蛋白ARC1及ARC1与Exo70A1间相互识别的分子机理，鉴定SRK-ARC1及ARC1-Exo70A1之间的互作区段，并分析其作用强度，明确蛋白间互作功能域。【方法】通过生物信息学分析得到蛋白功能域，根据分析结果以典型的自交不亲和结球甘蓝E1为材料分别扩增SRK、ARC1和Exo70A1含不同功能域的截短体片段，利用分子克隆技术将SRK激酶域（SRKj）及其截短体SRKjΔ1—SRKjΔ4，Exo70A1全长及其截短体Exo70A1Δ1—Exo70A1Δ3的编码序列分别亚克隆至pGADT7（AD）质粒，将ARC1及其截短体ARC1Δ1—ARC1Δ8的编码序列分别亚克隆至载体pGBKT7（BD）质粒。用PEG/LiAc法将获得的AD和BD重组质粒两两组合分别共转化到酵母AH109感受态中，观察融合菌株在SD/-Leu-Trp-His-Ade/ X-a-gal/25 mM 3-AT平板上的菌落生长情况和颜色变化情况，进一步测定其β-半乳糖苷酶活性。最后通过原核表达体外孵育检测蛋白质相互作用的方法对SRK-ARC1及ARC1-Exo70A1的相互作用进行验证。【结果】DNA测序和内切酶分析显示成功构建18个酵母双杂交表达载体，且无自激活能力。在SRK-ARC1的10个试验组合中，只有ARC1Δ4、ARC1Δ8、ARC1与SRKj组合的融合菌株在SD/-Leu-Trp-His-Ade/X-a-gal/25 mM 3-AT培养基上长出蓝色菌落，激活报告基因HIS3、ADE2和MEL1。随着SRKj或ARC1截短体片段的延长，二者的β-半乳糖苷酶活性逐渐增加，其中，ARC1Δ4与SRKj组合的β-半乳糖苷酶活性最高（酶活为15.98）。在ARC1-Exo70A1 16个试验组合中，Exo70A1Δ3与ARC1Δ1Δ3都相互作用，其融合菌株在SD/-Leu-Trp-His-Ade/X-a-gal/25 mM 3-AT培养基上长出蓝色菌落，激活报告基因HIS3、ADE2和MEL1。随着ARC1或Exo70A1 截短体片段的延长，二者的β-半乳糖苷酶活性呈现先增加后降低的趋势，其中ARC1Δ2与Exo70A1Δ3组合的β-半乳糖苷酶活性最大（酶活性为25.07）。说明ARC1的N端和 Exo70A1的N端发生了互作，而ARC1的C端、全长与Exo70A1都不发生互作。体外表达检测蛋白相互作用发现，SRKj与ARC1Δ4、ARC1Δ2与Exo70A1Δ3均可以直接发生相互作用。【结论】SRK的激酶域（SRKj）与ARC1的C端臂重复区发生互作，缩短SRK激酶域中的任何结构域或者缩短ARC1的臂重复区，二者都不会发生互作。ARC1的亮氨酸拉链和蜷曲螺旋与Exo70A1的N端结构域（去除pfamExo70A1域）介导了二者的相互作用。SRK-ARC1的作用力强度小于ARC1-Exo70A1的作用力强度。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(2) Select 3. 基于SLAF-seq技术的甘薯SNP位点开发 苏文瑾，赵宁，雷剑，王连军，柴沙沙，杨新笋 2016, 49 (1): 27-34.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.003 摘要 （683）   HTML （10）    PDF （1265KB）（1152）    可视化    收藏 【目的】单核苷酸多态性（SNP）是基因组中最普遍的遗传变异，是构建遗传图谱、完成分子标记辅助育种的一种非常重要的遗传标记。新一代高通量测序平台为SNP位点的检测提供了强有力的技术支持。多倍体作物通常表现为基因组序列大且重复比例高，一直以来多倍体作物的SNP位点挖掘面临巨大的挑战。【方法】共收集300份甘薯种质资源，利用SLAF-seq测序技术进行测序。首先以马铃薯基因组为参照，通过生物信息学分析进行实验方案的系统设计，筛选特异长度的DNA片断，构建SLAF-seq文库。后通过高通量测序的方式获得海量序列，进而通过软件分析比对，获得多态性SLAF标签，最后在多态性SLAF标签上开发大量特异性SNP位点。【结果】对照拟南芥的测序数据与其参考基因组进行比对的结果表明，双端比对效率在本试验中为87.71%，酶切效率为93.22%，说明本试验SLAF建库正常。通过测序共产生498.14 Mb的读长数据，测序后各样品所获得的读长数目在441 595—2 731 920范围内，其中，冀薯4号获得的数据量最大，共计获得2 731 920个读长，对照拟南芥数据量最小，共计获得441 595个读长。测序质量值Q30的范围在88.37%—90.67%，样品3043 Q30测序值仅为87.31%，样品鄂紫1号Q30测序值为91.31%，所有样品Q30值均在80%以上。测序获得GC含量的范围在37.23%—38.09%，样品苏薯9号和浙薯2号存在极端值，样品苏薯9号的GC含量在39.80%，样品浙薯2号GC含量在37.10%，所有样品GC含量均值为37.64%，GC含量普遍不高，说明达到测序要求。本研究共计获得597 094 个SLAF标签，样品的平均测序深度为11.77×，其中多态性SLAF标签260 000个，占SLAF标签总数的43.54%。根据所获得的260 000个多态性SLAF标签来统计SNP位点信息，共计获得795 794个群体SNP位点。【结论】共获得498.14 Mb的读长数据，597 094个高质量的SLAF标签，260 000个多态性SLAF标签，从260 000个多态性SLAF标签上共计开发获得795 794个高质量SNP位点。表明SLAF-seq技术可以很好地应用于甘薯SNP位点的开发，其效率远远高于SSR、AFLP、RAPD等分子标记技术。从全基因组范围获得的SNP位点可以进一步的用来完成后续群体进化分析和特异性SNP标记的开发。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(28) Select 4. 不同播栽方式下杂交籼稻非结构性碳水化合物与枝梗和颖花形成及产量性状的关系 田青兰，刘波，钟晓媛，赵敏，孙红，任万军 2016, 49 (1): 35-53.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.004 摘要 （668）   HTML （7）    PDF （891KB）（848）    可视化    收藏 【目的】研究播栽方式对杂交籼稻非结构性碳水化合物（NSC）积累与分配及对枝梗和颖花分化与退化的影响，并探明穗分化期NSC代谢与枝梗及颖花分化与退化的关系及抽穗后NSC积累与产量构成的关系。【方法】在前2年试验的基础上，于2014年采用两因素裂区试验设计，研究了3种播栽方式（机直播、机插和手插）下2个杂交籼稻组合（宜香优2115和F优498）抽穗前和抽穗后植株NSC积累与分配、稻穗不同部位枝梗和颖花分化与退化的规律及差异。【结果】（1）穗分化期NSC的竞争茎鞘较幼穗有明显优势；机插在抽穗期茎鞘贮藏了较多NSC，在籽粒灌浆结实期茎鞘向籽粒高效输送较多的NSC，使其成熟期穗部获得较高的NSC积累量。（2）各播栽方式的枝梗分化及退化差异主要是二次枝梗现存数及退化率、三次枝梗分化数；机插的二次枝梗分化数及现存数、二次颖花分化数及现存数较高，从而有较高的总枝梗数和总颖花数；二次枝梗和一次颖花的退化主要分别发生在穗的下部和上部；二次枝梗分化数和二次颖花退化数均为下部＞中部＞上部；二次颖花分化数为中部＞下部＞上部；机插的下部、中部、上部二次颖花现存数均高于手插和机直播；（3）抽穗前12 d和抽穗前4 d及抽穗期茎鞘较高的NSC贮藏量不利于幼穗枝梗和颖花的分化与退化，而抽穗前16 d至抽穗前8 d幼穗NSC积累量与大多数颖花性状呈显著或极显著正相关，是决定大穗形成的关键时期；抽穗后NSC分配主要是通过影响叶片和穗部NSC分配从而影响产量；枝梗及颖花性状与产量关系密切，千粒重和单位面积有效穗均与枝梗及颖花性状呈显著或极显著负相关，而每穗粒数、结实率及产量与枝梗及颖花性状呈显著或极显著正相关；（4）F优498较宜香优2115有更高的茎鞘NSC转运率及对穗部的贡献率，且其大多数枝梗及颖花性状显著或极显著高于宜香优2115，F优498的每穗粒数和结实率极显著高于宜香优2115，相应产量也较高。【结论】不同播栽方式下NSC积累与分配及枝梗和颖花分化与退化有较大差异，且品种间差异较大，机插配合大穗型品种有更高的增产潜力。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(11) Select 5. 玉米早期发育阶段粒位效应的蛋白质组学分析 于涛，李耕，刘鹏，董树亭，张吉旺，赵斌，柏晗 2016, 49 (1): 54-68.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.005 摘要 （587）   HTML （3）    PDF （3859KB）（1111）    可视化    收藏 【目的】从蛋白质组学的角度研究早期发育阶段玉米上、中部籽粒差异表达的蛋白质，分析其功能，探明玉米粒位发育差异的分子机理。【方法】在大田条件下，以粒位效应显著的玉米品种登海661（DH661）为供试材料，90 000株/hm2密度下种植，在开花期人工饱和授粉后0、3、6、12 d取果穗上部与中部籽粒。采用TCA-丙酮沉淀法提取籽粒总蛋白，双向电泳分离后获得蛋白质图谱。分别以0、3、6、12 d中部籽粒的凝胶作为参考胶，将上部籽粒凝胶与其进行比对，利用Image master 2D 7.0软件分析籽粒早期发育不同阶段上、中粒位蛋白质表达的差异。通过 MALDI-TOF/TOF MS 质谱分析及 NCBI数据库搜索，对差异表达蛋白质进行鉴定并分析其涉及的生物学功能。【结果】较高密度种植后，果穗籽粒早期发育阶段共检测到超过1000个清晰蛋白质点。通过图像处理软件成对匹配分析，果穗上、中部籽粒早期发育阶段差异蛋白质点为66个，其中52个蛋白质点与NCBI数据库匹配，鉴定率为78.8%。差异蛋白质涉及籽粒呼吸与能量代谢（10个蛋白质点，19%）、胁迫与防御（9个蛋白质点，17%）、蛋白质代谢（9个蛋白质点，17%）、氮代谢（6个蛋白质点，11%）、细胞分化与增殖（5个蛋白质点，10%）、转录与翻译（5个蛋白质点，10%）、次生物质代谢（3个蛋白质点，6%）等功能范畴。对相关的差异蛋白质表达丰度分析，与中部籽粒相比，上部籽粒涉及细胞分化与增殖、呼吸与能量代谢的大部分蛋白质在一个或多个时间段内均显著下调，说明上部籽粒胚乳细胞增殖及呼吸能量代谢能力显著降低。同时，上部籽粒涉及胁迫与防御的多种抗氧化酶系、乙二醛酶1以及涉及蛋白质代谢的4个分子伴侣蛋白质在发育早期也处于低水平表达，说明上部籽粒应对逆境条件防御能力较弱且蛋白质结构不稳定。另外，与中部籽粒相比，上部籽粒氮代谢中丙氨酸转氨酶以及S-腺苷甲硫氨酸合成酶1在授粉后6—12 d内均下调表达，说明上部籽粒氮同化能力较弱，影响后续的氨基酸合成与蛋白质代谢过程。【结论】与果穗中部籽粒相比，上部籽粒细胞分化与增殖相关蛋白质的表达水平较低，呼吸与能量代谢能力较弱，导致上部籽粒库容与库活性降低。另外，面对氧化应激等逆境时，上部籽粒相关的抗氧化酶以及分子伴侣蛋白表达水平较低，致使其防御能力低于中部籽粒。丙氨酸转氨酶、S-腺苷甲硫氨酸合成酶1（SAMS）的差异表达也可能是导致粒位效应的重要原因。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(13) Select 6. 玉米茎秆的支撑功能及其可塑性 杨锦忠，梁淑敏，李娜娜，刘永花，郝建平 2016, 49 (1): 69-79.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.006 摘要 （680）   HTML （4）    PDF （427KB）（713）    可视化    收藏 【目的】从植物茎支持功能相关性状出发，阐明其在各种生态因子作用下的可塑性变化及生态适应意义。【方法】定义玉米茎的3个支撑功能性状：（1）线密度=节间重量/节间长度；（2）承重自重比=节间承重/节间重量，其中，承重=节间上方全部组织与器官的重量(不包括该节间自重)；（3）承重线密度比=节间承重/节间线密度。可塑性用塑性系数表示，此系数值仿照变异系数的公式进行计算，其中方差组分根据数据的期望均方模型估算。共包括6个田间试验，处理组成分别为：5个地点×2个品种组合、11个采样期×2个品种组合、4个种植密度（3.0—9.75株/m2）×3个采样期组合、4个种植密度（2.4—6.0 株/m2）、3种施氮量×2个追肥期组合、高密无肥对比低密有肥。采用方差分析检验处理间差异，采用LSD比较处理均值，采用负对数模型拟合茎线密度依节位的垂直分布。【结果】节间线密度变幅为0.052—0.72 g DW·cm-1，其垂直分布符合负对数方程：线密度=a-b×log(节位)；承重自重比变幅为7—51，承重线密度比变幅为122—260 cm，计入雌穗重量后以上两个数值比的最大值出现在穗下第一节间，分别为246和3 425 cm。茎功能性状在品种间、地点间差异明显，在灌浆中后期线密度呈下降趋势；随种植密度增加，节间线密度持续下降，而承重自重比在较大密度范围内基本保持不变；加大施氮量提高了线密度，但是却不影响承重线密度比。茎性状的可塑性表现为：线密度＞承重自重比＞承重线密度比，干物质在茎上各节间的承重投入受最优化策略控制。【结论】以上3个茎支撑功能性状反映了植物的承重特征，从一个新的角度刻划了干物质投入及其投资效率，有助于深入认识植物的干物质分配现象。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(4) Select 7. 农杆菌介导的柳枝稷遗传转化体系的优化 刘燕蓉，岑慧芳，严建萍，张万军 2016, 49 (1): 80-89.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.007 摘要 （519）   HTML （4）    PDF （2639KB）（618）    可视化    收藏 【目的】为建立农杆菌介导的柳枝稷高效再生及遗传转化体系。【方法】试验以柳枝稷品种Alamo、Performer及Blackwell的成熟种子为外植体诱导愈伤组织。愈伤诱导6周后，借助解剖镜观察愈伤形态，去除愈伤组织外层含水量大、海绵状愈伤组织，挑选位于愈伤组织中心位置的核状、紧实型愈伤置于继代培养基培养。暗培养3周后，在解剖镜下挑选结构松脆、生长旺盛的愈伤组织按细胞系继代增殖培养。该类愈伤组织易于分化，属单子叶植物愈伤组织分类中的第Ⅱ型。经两次继代增殖培养后，可以获得足够的愈伤组织进行再生和遗传转化研究。为优化柳枝稷Ⅱ型愈伤组织的农杆菌侵染流程，试验比较了3种农杆菌侵染流程下的转基因效率。真空和干燥处理（VD）：将装有愈伤组织及菌液的50 mL离心管置于真空泵中抽真空10 min（压力-0.8MPa），28℃, 80 r/min慢摇20 min后弃菌液，将愈伤组织堆放于3层滤纸上干燥处理2 h，随后将愈伤组织转入含有500 μL无菌水的2层滤纸上进行共培养；冷处理加真空和干燥处理（CVD）：侵染前将愈伤组织置于3%麦芽糖、300 μmol·L-1谷氨酰胺（Gln）溶液中冰浴20 min，然后依VD流程侵染，共培养阶段用MP培养基代替无菌水；渗透冷处理加真空和干燥处理（PVD）：用6%的麦芽糖溶液替代CVD中3%麦芽糖溶液。通过比较Gus染色及PCR阳性率来评价三种方法的转化效率。【结果】愈伤挑选方法不仅从柳枝稷低地型品种中挑选得到再生率达95%以上的Ⅱ型愈伤细胞系，也首次获得高地型品种Blackwell的Ⅱ型愈伤组织，分化率达50%。不同转化方法评价过程中发现，低地型品种AlamoⅡ型愈伤组织采用CVD农杆菌侵染流程转化效率最高，达72%，显著高于侵染流程VD（53%）和PVD（44%）。应用CVD转化法，Performer转化率达96%；首次成功进行了高地型品种Blackwell的遗传转化，转化效率为5.6%。【结论】本研究建立了借助解剖镜挑选柳枝稷易于再生的Ⅱ型愈伤组织的方法，该方法适用于柳枝稷不同生态型品种；农杆菌转化过程中采用CVD侵染流程可显著提高转基因效率。本研究首次报道了柳枝稷Ⅱ型愈伤组织的挑选流程，建立了适合不同生态型柳枝稷的高效再生及遗传转化体系，首次获得高地型品种Blackwell的转基因植株，为柳枝稷遗传改良及其功能基因研究奠定基础。该方法也适用与其他难于再生的单子叶植物再生及遗传转化体系的建立。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(3) Select 8. 甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）和甘薯褪绿矮化病毒（SPCSV）荧光定量RT-PCR检测方法的建立 卢会翔，吕长文，吴正丹，罗凯，尹旺，杨航，王季春，张凯 2016, 49 (1): 90-102.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.008 摘要 （963）   HTML （24）    PDF （2400KB）（835）    可视化    收藏 【目的】甘薯病毒病（sweet potato virus disease, SPVD）是甘薯上的毁灭性病害之一，严重时可造成90%以上的产量损失。论文旨在对甘薯SPVD染病植株中甘薯羽状斑驳病毒（Sweet potato feathery mottle virus，SPFMV）和甘薯褪绿矮化病毒（Sweet potato chlorotic stunt virus, SPCSV）2种病毒的复合侵染情况进行研究，建立SPVD荧光定量RT-PCR快速检测方法，为SPVD的早期预警和流行学研究提供技术手段。【方法】选取重庆地区具有不同SPVD典型症状的甘薯品种（系）叶片作为试验材料，对其进行症状和SPFMV、SPCSV的硝酸纤维素膜酶联免疫吸附（NCM-ELISA）检测；对供试材料叶片中的SPFMV外壳蛋白CP和SPCSV热激蛋白HSP70核苷酸序列进行克隆和序列分析，根据保守核苷酸序列设计荧光定量RT-PCR检测引物。以甘薯泛素（ubiquitin，UBI）和组蛋白（histone，H2B）编码基因为内参对供试样品进行荧光定量RT-PCR检测，与感染SPVD典型症状和NCM-ELISA检测结果进行比较，并对取自不同甘薯品种(系)、相同品种(系)不同单株以及相同植株不同部位叶片检测结果进行比较，筛选可快速、精确、定量检测SPVD的荧光定量RT-PCR检测方法。【结果】症状学诊断表明不同甘薯品种（系）的感病叶片可能表现出不同的典型症状特点，同一品种（系）的不同感病植株感病症状相似但也存在差异。序列分析结果表明供试材料中SPFMV至少存在2个株系类型(RC和EA)，SPCSV至少存在1个株系类型（WA）。在15份供试材料中，10份材料由NCM-ELISA和荧光定量RT-PCR均检测到SPFMV和SPCSV的共同感染，且荧光定量RT-PCR检测结果与发病症状和NCM-ELISA检测结果相吻合，其检测结果可准确反映甘薯SPVD染病植株中2种病毒复合侵染情况。荧光定量RT-PCR检测结果还表明，不同品种(系)或相同品种(系)不同单株病叶中SPFMV CP与SPCSV HSP70转录水平存在差异；相同植株顶端幼嫩叶片和中部成熟叶片中SPFMV CP与SPCSV HSP70转录水平也存在差异。染病材料中SPFMV中CP转录水平均相对较高，是SPCSV的HSP70转录水平的3—556倍。4份材料经NCM-ELISA检测只有SPFMV而没有SPCSV感染，而荧光定量RT-PCR还可检测到其中2份材料中SPCSV HSP70转录水平，说明这2份材料中也存在SPFMV和SPCSV的共同感染，表明荧光定量RT-PCR比NCM-ELISA检测结果更灵敏、准确。【结论】 筛选出可利用SPFMV CP与SPCSV HSP70转录水平进行检测的荧光定量RT-PCR检测引物，建立了SPVD荧光定量RT-PCR快速检测方法，为SPVD针对性地监测预警提供了极为有效的方法。在建立甘薯SPVD防御体系时，需综合考虑2种甘薯病毒的共侵染特性和甘薯品种差异，采取针对性的监测和预警机制。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 Select 9. 葡萄A病毒RT-LAMP检测方法的建立 张永江，辛言言，李桂芬，乾义柯 2016, 49 (1): 103-109.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.009 摘要 （513）   HTML （8）    PDF （721KB）（720）    可视化    收藏 【目的】葡萄A病毒（Grapevine virus A, GVA）是葡萄皱木复合病的重要病原之一，以带毒种苗的嫁接为田间主要传播途径。使用无毒葡萄苗木进行生产是控制该病毒病害的根本措施，而简便灵敏的检测技术是筛选无毒种苗的有效保证。为此，开展针对GVA的反转录环介导等温扩增技术（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP）研究，旨在建立其RT-LAMP特异性检测方法。【方法】通过比对分析GVA的CP（coat protein）基因序列并经引物设计软件Primer Explore 4.0设计，获得6条检测引物GVA-FIP (5′-CTTACAGCCACGCTCAGAGTCC-CGTGGGAAGTTGGTTGTGT-3′)、GVA-BIP (5′-GCCCGTCAAAGGGGCTACAC-TCATA GGCGTTCTGTGCGA-3′)、GVA-F3(5′-AGAAGATGGGGATAGACCCG-3′)、GVA-B3 (5′-CCGCCATTAACACGAGGAA-3′)、GVA-LF (5′-AT CCTTCCCACCAGCTCGG-3′)和GVA-LB (5′-TCAGGCAGATGTGTGAACCT-3′)。将RT-LAMP的反应温度分别设为59、61、63和65℃，根据1 h扩增曲线出现的先后次序确定最佳反应温度。以同样侵染葡萄的沙地葡萄茎痘相关病毒（Grapevine rupestris stem pitting-associated virus，GRSPaV）、葡萄卷叶病毒（Grapevine leafroll- associated virus，GLRaV）、葡萄斑点病毒（Grapevine fleck virus, GFKV）的阳性材料及阴性对照（健康葡萄叶片，用NC表示）的总RNA为模板，对RT-LAMP方法的特异性进行测定。将GVA的总RNA进行10倍梯度稀释，得到101、102、103、104、105、106倍的不同稀释液后用作模板分别进行RT-LAMP和普通RT-PCR检测，比较两者的灵敏度。RT-LAMP产物可进行实时扩增曲线检测，阳性样品在浊度仪上出现扩增曲线，阴性样品无扩增曲线；还可进行染料颜色反应检测，在反应产物中加入SYBR Green I染料，阳性样品产生肉眼可见的绿色，阴性反应为橙色。【结果】建立了GVA的RT-LAMP快速特异性检测方法，最佳反应温度为65℃。该方法约27 min即可检测到扩增曲线，而普通RT-PCR获得检测结果约需1.5 h。特异性试验表明只有GVA的总RNA能够出现扩增曲线，反应液颜色变为绿色，显示为阳性，而其他3种参试病毒和健康对照没有出现扩增曲线，反应液的颜色为橙色，显示为阴性；RT-LAMP检测结果可通过肉眼观察直接判断，比普通RT-PCR结果判断容易。灵敏度试验显示RT-LAMP可检测到101、102、103、104和105倍的GVA总RNA稀释液模板，而普通RT-PCR只能检测到101、102、103和104倍的GVA总RNA稀释液模板，表明前者比后者的灵敏度高10倍。【结论】研究建立的RT-LAMP方法能够快速特异地检测GVA，可为筛选无GVA葡萄苗木提供技术支持；适用于检疫、科研及生产机构在进境检疫、苗木繁育和大田监测工作中对GVA的检测鉴定。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(4) Select 10. 基于大型渗漏池监测的褐潮土农田水、氮淋失特征 张亦涛，王洪媛，刘宏斌，任天志 2016, 49 (1): 110-119.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.010 摘要 （562）   HTML （2）    PDF （730KB）（475）    可视化    收藏 【目的】明确华北平原褐潮土农田典型种植模式下水分和氮素的输入及淋失特征，阐明施氮量对淋失水质的影响，为从源头减少氮素淋失、防控农田面源污染提供科学依据。【方法】2007—2012年在“国家褐潮土土壤肥力与肥料效益长期监测基地”上，针对玉米单作种植模式，设置不同施氮梯度（不施氮CK，优化施氮T1，习惯施氮T2），利用“渗漏池”监测玉米生育期间土壤水分和氮素淋失过程，同时利用田间小气候气象站监测降雨发生过程，并详细记录灌溉事件。【结果】降雨和灌溉发生在4—10月，淋失发生在5—11月，相对降雨和灌溉时间有所滞后。年际间降雨量差异较大（134—525 mm），除2009年降雨少、无灌溉且未监测到淋失事件以外，其他年份水分输入总量均高于500 mm，并均监测到淋失事件。施氮处理比不施氮处理的淋失发生次数和淋失水量均有所减少，其中CK共发生淋失37次，淋失水量422 mm，T2共发生淋失31次，淋失水量310 mm。5年监测期间，灌溉和降雨携带的全氮共计157 kg·hm-2，其中可溶性总氮106 kg·hm-2，但年际间差异较大（7.53—34.1 kg·hm-2）；灌溉和降雨携入氮量越多的年份，任一处理的氮素淋失量明显高于其他年份相同处理。硝态氮是淋失水中的主要氮素形态，并且施氮量越高，淋失水中硝态氮比重越大；无论是单次淋失事件还是年度淋失总量，T2淋失的可溶性总氮和硝态氮均明显高于CK和T1。CK和T1处理5年内全部淋失事件中的硝态氮平均浓度分别低于2.0、5.0 mg·L-1，而T2处理的5年31次淋失事件中硝态氮浓度平均为29.5 mg·L-1，超过地下III类水标准（20 mg·L-1）的次数有15次，最高浓度达79.0 mg·L-1。【结论】灌溉和降雨是导致淋失的主要原因，输入的水量越多，越易发生淋失，硝态氮是淋失水中的主要氮素形态；年际间，氮素淋失量与灌溉和降雨携入的氮量呈正相关关系，灌溉和降雨携带氮量越多的年份，农田氮素淋失量越多；同一年内，硝态氮淋失量和硝态氮淋失浓度均随施氮量的增加而增加。因此，只有合理施氮才能减少氮素淋失量并保证淋失水硝态氮含量不超标，但在确定合理的农田施氮量时，要充分考虑灌溉和降雨携带氮量对氮素淋失的影响。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(5) Select 11. 少免耕及秸秆还田小麦间作玉米的碳排放与水分利用特征 胡发龙，柴强，甘延太，殷文，赵财，冯福学 2016, 49 (1): 120-131.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.011 摘要 （682）   HTML （4）    PDF （451KB）（1066）    可视化    收藏 【目的】利用间作和保护性耕作对土壤碳减排及水分高效利用的潜力，将二者集成于同一系统中以发挥各自的优势并催生彼此间的协同效应，从而建立减排与节水双赢的间作高效种植模式。【方法】以河西绿洲灌区长期规模化种植的小麦间作玉米为研究对象，集成应用保护性耕作的理论与技术，利用带状耕作和秸秆覆盖建立免耕立茬（NTSSI）、免耕秸秆覆盖（NTSI）、少耕秸秆翻压（TISI）和传统收割（CTI）4种处理，并以传统收割单作小麦（SW）和单作玉米（SM）作为对照，系统研究了不同处理土壤呼吸与作物耗水状况。应用土壤呼吸测定系统EGM-4（environmental gas monitor-4，UK，PP system）测定土壤呼吸速率，以此计算不同处理生育期内土壤碳排放总量。用产量与耗水和土壤碳排放量与耗水两种方法计算水分利用效率，客观评价间作系统的水分利用状况。【结果】不同种植模式中，单作玉米土壤呼吸速率最大（1.57 μmol CO2·m-2·s-1），间作次之（0.83 μmol CO2·m-2·s-1），单作小麦最小（0.72 μmol CO2·m-2·s-1）；4种秸秆还田方式中，NTSI处理土壤呼吸速率最低，2011与2012年分别较CTI降低了20.4%和11.9%，由此减少碳排放量12.4%。在间作中集成应用带状耕作和秸秆覆盖能有效降低系统耗水总量、增加产量、提高水分利用效率（WUEGY），与CTI处理相比，NTSI处理平均减少耗水量达4.1%，增产29.7%，水分利用效率提高15.6%。同时，间作系统的单位耗水碳排放平均降低了5.9%，碳排放效率提高了28.2%。【结论】小麦间作玉米与保护性耕作结合，并集成应用带状耕作及秸秆覆盖技术可使系统的产量、碳排放和耗水得到有效协调，能促进耗水更多转化为作物产量并降低在该转化过程中产生的碳排放，实现碳减排与水分高效利用的协同促进。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(14) Select 12. 冰糖橙果实品质无损伤在线检测分级技术的建立与应用 李娜，杨星星，戴素明，李荣华，姜航，罗跃雄，亚历山德拉·金蒂来，邓子牛 2016, 49 (1): 132-141.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.012 摘要 （577）   HTML （2）    PDF （438KB）（1184）    可视化    收藏 【目的】冰糖橙果实外观分级与内部品质不一致极大地影响了其市场声誉，建立冰糖橙果实品质分级标准和果实快速规模化无损伤品质检测分级技术，并进行在线应用，为快速分选不同糖酸度冰糖橙产品提供技术支持。【方法】在利用常规果实品质分析方法对主产区的冰糖橙果实进行多年品质分析的基础上，找出果实外观和内在品质的相关性，确定不同果型横径与糖酸度含量的关系，形成冰糖橙果实分级标准。在此基础上，采集710—960 nm波段近红外透射光谱建立果实无损伤检测模型，利用常规品质分析数据对原始光谱反复进行校正并验证，确定无损伤检测的准确性，并在分级线上进行应用；调查统计应用无损伤检测生产线分级后各级冰糖橙的产量、销售单价和销售额。【结果】（1）根据果实横径大小进行初选分级，68—74 mm为大果型，62—67 mm为中果型，56—61 mm为小果型，再按果实的糖度（可溶性固形物Brix度）和酸度不同将冰糖橙划分为4个等级：糖度≥14、酸度≤0.4%为特级果；12≤糖度＜14、酸度≤0.4%为一等果；糖度≥14、0.6%≥酸度＞0.4%为二等果；糖度＜12、酸度≤0.4%为合格果。通过反复矫正，建立了冰糖橙果实品质分级标准。（2）通过多次进行单果糖度和酸度的分析矫正，建立了冰糖橙果实糖度和酸度的检验线。第1次建立的冰糖橙糖度检量线检测范围为10.1—14.9 Brix，再利用常规品质分析验证无损伤检测结果，合格率仅为26%。第2次建立的糖度检量线延长高糖检测范围，为10.1—16.2 Brix，经验证后合格率达90%。第3次建立的糖度检量线扩大低糖检测范围，为9.8—16.2 Brix，经验证后合格率为90%。第1次建立的冰糖橙酸度检量线检测范围为0.1%—1.26%，再利用常规品质分析验证无损伤检测结果，合格率仅为64%。第2次建立的酸度检量线延长高酸检测范围，为0.1%—1.37%，经验证后合格率达94%。第3次建立的酸度检量线继续扩大高酸检测范围，为0.1%—1.53%，经验证后合格率为92%。（3）新建立无损伤糖酸度校正和验证模型，糖度有效检测范围为8.7—15.1 Brix，酸度有效检测范围为0.14%—2.0%，经验证后糖度合格率达到98%，酸度合格率为98%。应用该分级技术，分选速度达到10个冰糖橙/秒，品质分级后最高单价48元/kg，年产量4 500 t，实现产值9 122万元。【结论】研究结果预测糖酸度准确，测量范围全面涵盖冰糖橙商品果的糖酸度，能大批量、快速、高质量和无损伤在线鉴别冰糖橙果实内在品质，结合外观品质分级标准，分选出内外品质均一的产品。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(3) Select 13. 番荔枝花器官发育基因AsAG的克隆、亚细胞定位及表达分析 刘锴栋，黎海利，钟舒婷，袁长春，陈燕，刘金祥，钟军弟 2016, 49 (1): 142-154.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.013 摘要 （463）   HTML （4）    PDF （2714KB）（861）    可视化    收藏 【目的】从番荔枝中分离花器官特征决定基因AGAMOUS，并进行亚细胞定位及基因表达分析，为进一步研究该基因参与调控花发育调控的分子机理，及解决番荔枝花发育异常问题奠定基础。【方法】以番荔枝成熟花为材料，通过试剂盒提取总RNA，并以RACE方法克隆获得基因AG的全长序列。序列拼接和氨基酸序列分析采用DNAMAN软件；相似性分析通过BLASTn和BLASTp程序进行；进化树构建采用MEGA 5.1软件；蛋白质二级结构预测与3D结构建模分别采用ExPaSy的SOPMA和Phyre2程序进行；亚细胞定位表达采用烟草上皮细胞瞬时转染系统和基因枪轰击洋葱表皮细胞方法；AG在花发育不同时期、不同器官及不同激素信号分子处理下的表达特性分析，利用实时荧光定量RT-PCR方法。【结果】从番荔枝中克隆得到AGAMOUS，其cDNA全长ORF序列长度为669 bp，编码222个氨基酸，命名为AsAG，序列提交到GenBank（登录号为KT159768）。二级结构预测发现AsAG所编码蛋白由延伸链结构（俄extended strand）、α-螺旋（alpha helix）、β-转角（beta turn）和不规则卷曲（random coil）组成，四者比例分别为14.41%、59.46%、8.11%和18.02%。生物信息学分析显示AsAG编码的蛋白与海枣（XP 008781978.1）、芦笋（BAD83772.1）、拟南芥（AT4G18960）、油棕（XP 010912706.1）、山玉兰（AFH74390.1）、石斛（ABQ08574.1）、红花玉兰（AEO52692.1）等同源蛋白的相似度达79%—84%。ASAG蛋白含有一个高度保守的MADS-box结构域和一个次级保守的K区，该蛋白分子量为25.7 kDa，等电点为9.15，为稳定蛋白，无信号肽。亚细胞定位显示AsAG编码蛋白定位于细胞核。实时定量RT-PCR结果表明，AsAG在不同的器官中表达量存在差异，在花中表达量最高。AsAG在番荔枝花发育的整个过程中都有表达，而在花蕾期Ⅳ中表达量最高。进一步分析发现AsAG的表达水平呈现花器官特异性分布（雄蕊＞雌蕊＞萼片＞花瓣）。进一步研究表明，AsAG在畸形花中的表达量低于正常花。检测GA和ABA等不同信号分子分别处理番荔枝花芽2 h和4 h后AsAG的表达量，结果表明AsAG的表达受GA负调控，受ABA正调控。【结论】推测番荔枝AsAG可能参与雌蕊和雄蕊的发育及激素信号的响应。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(10) Select 14. 近红外光谱法检测鸡、鱼肉加热终点温度 刘功明，孙京新，李鹏，徐幸莲，张万刚，黄明，周光宏 2016, 49 (1): 155-162.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.014 摘要 （394）   HTML （4）    PDF （2375KB）（694）    可视化    收藏 【目的】在肉制品生产中，加热终点温度（endpoint temperature，EPT）是控制食源性疾病的关键因素。现有的EPT检测方法诸多，如酶活性测定法，凝血试验和聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE电泳）法等，但普遍存在耗时、样品处理繁杂等不足。采用近红外光谱（near-infrared spectroscopy，NIR）结合偏最小二乘法（partial least squares，PLS）检测鸡、鱼肉加热终点温度，为研究近红外光谱法检测肉类EPT的可行性提供参考。【方法】分别将肉样以1℃·min-1的升温速率进行9个不同温度的加热处理（50、55、60、65、70、75、80、85和90℃），当达到终点温度时，迅速取出，冰水冷却到4℃。冷却后的肉样和释放的肉汁同时放到均质机中，均质1 min，绞碎成肉糜状。均质后的肉样存放于4℃的冰箱中，共制得144个样品（鸡、鱼肉样品数分别为77和67）。在近红外光谱仪上，采用硫化铅（PbS）检测器和旋转样品池，每个样品连续采集光谱3次，在11 000—4 000 cm-1波数范围内，以8 cm-1的分辨率扫描64次。将所采集的鸡、鱼肉的光谱数据分别随机分为校正集（样品总数108，其中鸡肉样58，鱼肉样50）和检验集（样品总数36，其中鸡肉样19，鱼肉样17），校正集用于校正模型的建立，检验集用于检验模型的预测能力。在建立模型时，采用标准正则变换、一阶微分和Norris Derivative滤波平滑（N-D）3种方法结合对原始光谱进行处理，采用内部交叉验证均方差（cross-validation mean square error，RMSECV）确定主成分数，利用模型对检验集样品的预测均方差（prediction mean square error，RMSEP）、预测值与实测值间的相关系数r及预测标准差σ考察模型的预测性能。【结果】采用校正集的内部交叉验证均方差（RMSECV）确定鸡肉、鱼肉的主成分数分别为9和11，此时校正集的RMSECV值最小，分别为1.59%和0.96%；所得校正模型的预测温度与实际加热温度之间的相关系数分别为0.9844和0.9936；由所建模型对检验集样品的检验结果可看出，实际加热温度与近红外模型预测的加热温度具有很高的相关性，预测值的相关系数r分别为0.9966和0.9832；预测均方差RMSEP分别为3.02%和2.94%；预测标准差σ为0.97和1.63。【结论】本研究所建模型具有很好的预测性能，近红外光谱用于肉制品EPT检测具有很大潜力。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(5) Select 15. 温湿度动态变化过程中不同含水量稻谷的储运特性 陈银基，蒋伟鑫，曹俊，戴炳业，董文 2016, 49 (1): 163-175.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.015 摘要 （499）   HTML （3）    PDF （1163KB）（677）    可视化    收藏 【目的】中国是稻谷产销大国，稻谷安全储运至关重要。通过实验室模拟动态温湿度条件，研究动态储运条件下稻谷的品质变化和水分迁移规律，为优化稻谷安全储运条件提供参考。【方法】本研究通过动态温湿度的实验模拟，采用14%、16%、18%、20%、22%等5种不同水分稻谷进行3个月低温（10℃左右波动）、中温（20℃左右波动）和高温（30℃左右波动）的动态储运，观测微生物生长、质构品质、脂肪酸值和低场核磁共振数据的变化，阐明温度和水分对稻谷储运特性的影响。【结果】细菌总数随着储运时间延长而增加，不同温度和不同水分含量稻谷细菌总数的增加趋势不同；细菌总数随着温度的增加而增加。霉菌数量随着储运时间延长呈升高趋势，在中、高温下，稻谷霉菌数量显著增加，而且温度越高，霉菌数量上升趋势越明显；初始水分14%和16%的稻谷在低温、中温、高温3个动态模拟条件下，霉菌发生都处于较低水平；初始水分含量18%以上稻谷在中温和高温动态模拟储运15 d时霉菌发生显著高于水分含量为14%和16%的稻谷。稻谷蒸煮硬度和弹性随着储运时间延长逐渐上升，初始水分含量越大硬度上升越快（P＜0.01），储运过程中硬度与稻谷中的初始水分含量显著负相关，初始水分含量越高，硬度值越小，稻谷质地越好；初始水分含量对稻谷弹性影响显著（P＜0.01）；黏着性则随着储运时间的延长呈下降趋势，温度和水分对黏着性均有显著影响（P＜0.05）。脂肪酸值与初始水分含量呈正相关（P＜0.01），稻谷初始水分含量越高，脂肪酸值增加越明显；温度对高水分稻谷脂肪酸值影响尤为明显，温度越高，脂肪酸值上升越快。低场核磁信号总量（T2w）随储运时间的增加而减小，T2w信号总量与水分含量呈极显著的线性正相关（P＜0.01）。核磁共振图像显示，稻谷储运15 d时，水分主要集中在表皮层和糊粉层；储运30 d后，表层水分损失，水分分布更为均匀。【结论】水分含量14%或16%的稻谷短期（15或30 d）储运可以提高稻谷主要质构品质；温湿度动态变化（中温和低温）的长时间储运过程中稻谷初始水分应限定在16%及以下。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(26) Select 16. Sall4表达调控及其启动子核心调控区的筛选 王亚娴，杨藩，王华岩 2016, 49 (1): 176-185.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.016 摘要 （464）   HTML （5）    PDF （4301KB）（467）    可视化    收藏 【目的】Sall4是一种锌指结构转录因子，对建立和维持动物多能干细胞具有重要意义。为探索猪 Sall4 的表达和转录调控机制，克隆了猪Sall4启动子，对其进行了功能验证和核心调控区的筛选。【方法】从猪基因组中克隆获得2.1 kb Sall4启动子片段，并构建相应的报告载体；将报告载体pE2.1转染不同种类的细胞，进行细胞特异性表达检测；采用实时荧光定量PCR方法，检测Sall4在猪不同组织和细胞中的表达变化；通过生物信息学方法，分析Sall4启动子上各种关键顺式作用元件和潜在的转录结合位点；将多能转录因子Oct4、Sox2、Klf4、Myc、Esrra/b和Smad与Sall4启动子共转染293T细胞，利用双萤光素酶报告系统检测Sall4启动子活性；采用DNA片段缺失的方法，构建一系列Sall4启动子片段缺失报告载体，将缺失片段载体分别转入293T细胞中，并利用双萤光素酶报告系统检测启动子的活性。【结果】Sall4在多能干细胞、生殖细胞和癌化肿瘤细胞中：包括P19、293T、CHO和Hela等细胞中特异性高表达。另外，通过实时荧光定量PCR检测结果显示，Sall4的表达具有明显的组织特异性，其在猪iPS细胞和生殖相关组织，如睾丸和卵巢组织中表达最高，而在脑、心、肝和肌肉等组织中的表达较低，表明该基因与细胞多能性维持具有互作关系。应用JASPAR和GPMiner软件分析发现，Sall4启动子上有TATA box、GC box、CAAT box等顺式作用元件，以及Oct4、Sox2、Klf4、Myc、Esrra/b、Stat3和Smad等多能转录因子的预测结合位点。其中，Oct4、Sox2和TGF-beta信号通路因子对Sall4启动子活性有较显著的激活作用，与对照组比较Sall4启动子活性提高了3倍；而Klf4因子对Sall4启动子活性有一定的抑制作用。采用分段PCR的方法，对2.1 kb启动子进行了片段缺失，分别构建了pL2.1、 pL1.0和pL0.5等3个报告载体，检测结果发现，在pL2.1与pL1.0之间相差1 kb左右，但是启动子的活性没有显著差异。载体pL1.0与pL0.5之间多了486 bp片段，启动子活性提高了1倍多。另外，pL0.5的启动子活性与对照组比较提高了8倍。这些结果表明，猪Sall4启动子在-367 至-852 bp和-1 至-366 bp两个区域内存在核心调控区。【结论】克隆了猪Sall4启动子，证明Sall4的表达具有明显的组织特异性；Sall4启动子序列上存在众多潜在的转录因子结合位点和启动子核心调控域，是参与调控 Sall4 表达的重要序列，这些转录因子与Sall4相互作用对Sall4在多能细胞中的表达调控发挥重要作用。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 Select 17. 持续偏热环境对肉鸡盲肠菌群多样性的影响 彭骞骞，王雪敏，张敏红，冯京海，甄龙，张少帅 2016, 49 (1): 186-194.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.017 摘要 （455）   HTML （13）    PDF （469KB）（734）    可视化    收藏 【目的】环境温度是影响家禽肠道菌群的重要因素之一，随着环境温度的改变，家禽肠道正常菌群也会受到影响，研究持续偏热环境对肉鸡肠道微生物多样性及结构的影响，为肉鸡健康养殖提供理论依据。【方法】试验选取22 d爱拔益加（AA）肉鸡144只转入环境控制舱，随机分成3个处理组（21、26和31℃），每个处理6个重复，每个重复8只鸡（公母各4只），在21℃、相对湿度60%的环境下适应7 d。29 d时，试验温度分别调整到21、26和31℃，相对湿度60%，至试验结束，共14 d。于试验第7、14天末，每处理随机选取6只（公母各3只；每重复选1只），无菌采集盲肠内容物，将同一处理组的6个样品混合均匀，迅速放入无菌的离心管中，液氮速冻，-80℃冰箱保存备用。采用16S rDNA的PCR-DGGE分子技术，结合共性和特异性条带割胶回收DNA进行克隆和测序，分析持续偏热处理7、14 d时，对盲肠内容物菌群的结构和多样性的影响。【结果】（1）26、31℃组肉仔鸡盲肠DGGE条带数（菌群丰富程度）均低于21℃组，且31℃组低于26℃组；31℃组肉仔鸡盲肠DGGE条带数，在试验14 d明显低于试验7 d；（2）不同组之间聚类图和多样性指数分析可知，26、31℃组对肉鸡盲肠菌群的影响较大，且31℃组肉鸡盲肠菌群多样性，在试验14 d明显低于试验7 d；（3）DGGE图谱条带序列分析表明，适温和偏热环境下肉鸡盲肠内的共性菌群是Alistipes timonensis和Barnesiella viscericola，21℃组肉鸡盲肠中特异性菌群是Ruminococus faecis，26、31℃组肉鸡盲肠中特异性菌群是Lutispora thermophila和Faecalibacterium prausnitzii，31℃组肉鸡盲肠中特异性菌群是Gemmiger formicilis。【结论】持续偏热处理（26和31℃）与21℃组相比，影响肉鸡肠道菌群的结构和多样性，且不同偏热程度、偏热处理时间对肉鸡影响程度不同。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(18) Select 18. 家蚕microRNA 7靶基因Bmhairy的鉴定和转录表达模式 刘仕平，吴小燕，张丹宇，黄亚玺，王伟，赵萍，夏庆友 2016, 49 (1): 195-204.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.01.018 摘要 （458）   HTML （3）    PDF （3004KB）（880）    可视化    收藏 【目的】microRNA是一类长约22个碱基的非编码RNA，通过与其靶基因的特异性结合来调控新陈代谢和生长发育等多种生命活动。鉴定家蚕(Bombyx mori)Bmhairy，比较Bmhairy和bmo-miR-7的表达模式，验证Bmhairy是否为bmo-miR-7的靶基因，为研究家蚕的变态发育机制提供线索。【方法】 用家蚕胚胎反转期的总RNA反转录合成的cDNA模板，克隆Bmhairy编码区（coding DNA sequence，CDS）和3′端非翻译区（3′ untranslated region，3′UTR）并进行序列分析。基于荧光定量PCR和芯片数据比较bmo-miR-7和Bmhairy的表达模式。利用RNAhybrid和MiRTif，预测和分析Bmhairy的mRNA 3′UTR上bmo-miR-7的靶位点。构建荧光素酶报告基因载体，用家蚕胚胎细胞系（BmE）进行共转染试验，验证bmo-miR-7对Bmhairy的3′UTR结合位点。【结果】 在家蚕中克隆了Bmhairy，含2个内含子和3个外显子，CDS长654 bp，编码217个氨基酸。Bmhairy的mRNA 3′UTR长366 nt。Bmhairy高度保守，含有bHLH、ORANGE和WRPW结构域。Bmhairy与鳞翅目（Lepidoptera）蛱蝶科（Nymphalidae）中的黑脉金斑蝶（Danaus plexippus）相似度最高。Bmo-miR-7在家蚕胚胎期高量表达，在5龄第3天的精巢中相对较高，而Bmhairy在成虫期的表达量最高，在5龄第3天的头部相对较高。Bmhairy mRNA 3′UTR上有bmo-miR-7一个靶位点。共转染试验表明，bmo-miR-7下调Bmhairy。【结论】Bmhairy的家蚕时期表达和5龄第3天组织表达均与bmo-miR-7的表达呈相反的模式。靶基因预测和双荧光素酶转染试验表明Bmhairy是bmo-miR-7的靶基因，为进一步研究bmo-miR-7和Bmhairy在家蚕体内的生物学功能及调控关系提供了依据。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 Select 19. 水稻穗退化突变体spd11的遗传分析及候选基因鉴定 钟萍，陈璞睿，王迁，肖富良，张宽，马芙蓉，黄美菱，王平荣，邓晓建，孙昌辉 2016, 49 (10): 1835-1843.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.001 摘要 （688）   HTML （5）    PDF （4612KB）（879）    可视化    收藏 【目的】对水稻穗退化突变体spd11进行遗传分析及候选基因鉴定，以便了解水稻穗发育的调控机制。【方法】用化学诱变剂甲基磺酸乙酯（EMS）处理粳稻品种中花11的直立密穗突变体dep2，从突变体库中筛选到一份穗退化突变体spd11。观察该突变体表型，并调查其主要农艺性状。由于突变体不能结实，将可分离出spd11突变植株的株系分单株收种、种植，并对后代株系的分离情况进行调查统计，分析该突变性状的遗传行为。将spd11杂合植株与冈46B杂交的F2后代作为定位群体，对spd11突变体进行基因定位，遴选候选基因并进行DNA测序验证；同时，对不同物种中spd11候选基因的同源基因所编码蛋白进行进化树和序列比对分析。【结果】与其对照亲本相比，spd11植株剑叶长度增加23%；穗部一次枝梗明显缩短，且一次枝梗数量减少58%。小穗几乎完全退化为白色絮状物，偶尔可见个别退化不完全的颖花着生，且该颖花仅由一个完全闭合的颖壳组成，不能正常结实。除此以外，spd11的分蘖数及剑叶宽等农艺性状无显著差异。遗传分析表明，在可分离出spd11突变株的后代中，一部分株系无分离，全部植株均为正常株，而另一部分株系有突变株分离，并且正常植株与突变植株分离明显，分离比例经卡方（χ2）测验符合3﹕1，表明spd11的突变性状由一对隐性核基因控制。利用分子标记将该突变基因定位于第1染色体长臂2个In/Del标记ch1-2295和ch1-2299之间约43.2 kb的区域内，遗传距离分别为0.23 cM和0.46 cM，该区间内共有8个预测基因。测序分析发现，spd11突变体中OsLOG编码区第116位碱基G突变为碱基A，造成编码蛋白的第39位半胱氨酸（C）突变为酪氨酸（Y）。同源蛋白比对和系统进化分析表明LOG蛋白在不同物种中都是高度保守的，并且spd11的突变发生在非常保守的氨基酸上。对已报道的多个log等位突变体的突变位点和突变表型严重程度的比对分析表明，spd11突变位点可能处于OsLOG蛋白功能的关键位点。【结论】SPD11可能是细胞分裂素激活酶基因OsLOG的等位基因，spd11在OsLOG外显子上一个关键位点发生了突变，导致OSLOG蛋白功能受损，使细胞分裂素的活化进程受阻，从而产生了穗退化的突变表型。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 Select 20. 芝麻AQP家族的全基因组序列鉴定及其特征分析 吴向阳，程朝泽，吕高强，王心宇 2016, 49 (10): 1844-1858.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.002 摘要 （609）   HTML （7）    PDF （1766KB）（802）    可视化    收藏 【目的】从芝麻全基因组中分离鉴定水通道蛋白AQP（aquaporin）家族基因，并进行系统进化关系、连锁群定位、基因结构、跨膜结构域和亚细胞定位预测、保守性氨基酸残基以及青枯雷尔氏菌诱导表达分析，为芝麻AQP的功能研究与利用奠定基础。【方法】通过生物信息学手段，结合芝麻基因组注释信息，鉴定芝麻AQP家族成员序列信息，并用InterPro逐一进行验证。利用ClustalW2对芝麻、拟南芥和水稻的AQP以及马铃薯的XIPs进行多序列比对，用MEGA6.0构建进化树。通过MapInspect和Gene Structure Display Server 2.0进行连锁群定位和基因结构分析。采用ProtParam、WoLF PSORT和TMHMM Server v.2.0在线工具预测芝麻水通道蛋白的分子质量和等电点、亚细胞定位及跨膜结构域。通过芝麻、拟南芥和水稻AQP及马铃薯XIPs的蛋白多序列比对结果推测NPA基序、ar/R滤器及P1—P5的氨基酸残基。利用前期研究获得的转录组测序结果进行青枯雷尔氏菌诱导表达分析，并通过qRT-PCR技术对差异表达较为明显的12个芝麻AQP进行验证。【结果】系统分析鉴定了36个芝麻AQP家族基因，根据多序列比对及系统进化分析将其分为5个亚家族：13个质膜内在蛋白（PIP）、12个液胞膜内在蛋白（TIP）、8个类NOD26膜内在蛋白（NIP）、2个膜内在小分子碱性蛋白（SIP）和1个未知内在蛋白（XIP），其中有34个基因定位在12个连锁群上。同一亚家族成员在基因结构、蛋白序列、亚细胞定位预测及保守性氨基酸残基等方面都较为相似。青枯雷尔氏菌诱导表达分析显示，NIPs、SIPs和XIPs表达无明显变化，部分PIPs和TIPs能够响应青枯菌诱导。SiPIP1;2、SiPIP1;3、SiPIP2;3和SiPIP2;4受青枯菌诱导后表达上调，SiPIP1;3和SiPIP2;3为持续上调，而SiPIP1;2和SiPIP2;4的表达先下调后上调；与之相反，表达下调较为显著的有SiPIP1;4、SiPIP2;1、SiPIP2;6、SiTIP1;1、SiTIP1;3、SiTIP2;1及SiTIP2;2。上述差异表达基因的qRT-PCR验证结果与转录组测序结果一致。【结论】通过全基因组分析，在芝麻中鉴定出36个AQP家族基因，分为5个亚家族，分布于12个连锁群上，大部分基因具有1—4个内含子（除SiNIP1;2有7个内含子外）。根据ar/R滤器和P1—P5氨基酸残基组成类型，预测不同亚家族AQP可能识别的底物。青枯菌诱导表达分析表明，部分PIPs和TIPs成员的表达发生了显著变化。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(1) Select 21. 全球气候变暖对中国种植制度可能影响Ⅻ. 气候变暖对黑龙江寒地水稻安全种植区域和冷害风险的影响 王晓煜，杨晓光，吕 硕，陈 阜 2016, 49 (10): 1859-1871.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.003 摘要 （526）   HTML （7）    PDF （2148KB）（884）    可视化    收藏 【目的】以1981年为时间节点，将1961—2010年划分为2个时段，结合未来不同升温情景，定量分析历史和未来气候变暖对黑龙江寒地水稻安全种植区域影响以及由此带来的冷害风险。【方法】利用积温带划分标准和农业气候指标，结合ArcGIS方法，对比分析历史和未来黑龙江积温带及寒地水稻安全种植区界限的空间变化特征。基于气象行业标准中水稻冷害标准分析寒地水稻安全种植北界变化敏感区域的延迟型冷害及障碍型冷害变化特征，评估气候变暖背景下水稻种植北界敏感地区冷害风险特征，并预估未来不同升温情景下冷害风险演变趋势。【结果】与1961—1980年相比，研究区域内1981—2010年积温带发生了明显的北移东扩，平均北移1.19个纬度，位移最大的是第五积温带和第六积温带，面积增加最多的是第二积温带，几乎覆盖了整个松嫩平原。未来不同升温情景下各积温带北扩趋势明显，面积增加最多的是第一积温带。1981—2010年寒地水稻安全种植北界相对于1961—1980年北移121 km，水稻安全种植北界北移至嫩江中部-五大连池-逊克北部一线。未来升温1—3℃情景下，寒地水稻安全种植北界向北移动410.5—545 km，向北扩展至黑龙江省呼玛以北地区，温度升高3℃时，除漠河地区外都可种植寒地水稻。比较寒地水稻种植界限敏感区域和非敏感区冷害风险可见，敏感区域冷害风险明显高于非敏感区域，其中障碍型冷害风险高于延迟型冷害，寒地水稻种植区严重冷害出现频率最高，其次是轻度冷害，中度冷害最低。1981—2010年敏感区域严重和轻度延迟型冷害较非敏感区域显著增加，中度延迟型冷害风险在敏感区域和非敏感区域均较低，敏感区域的各级障碍型冷害较非敏感区域明显增加；未来升温情景下敏感区域的各级冷害均高于非敏感区域。【结论】气候变暖背景下黑龙江积温带及寒地水稻安全种植北界发生了明显北移，未来升温情景下仍呈北移趋势。寒地水稻种植敏感区域的冷害风险明显高于非敏感区域，随着未来温度升高，冷害有不同程度的减轻，但仍需进一步关注寒地水稻种植区北缘北扩后的冷害风险，采取改进栽培技术与选育抗寒早熟品种等低温冷害防御措施，同时避免水稻种植区域的盲目扩大和品种越区种植，加强冷害防御能力。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(22) Select 22. 不同地力下基蘖肥运筹比例对水稻产量及氮肥吸收利用的影响 范立慧，徐珊珊，侯朋福，薛利红，李刚华，丁艳锋，杨林章 2016, 49 (10): 1872-1884.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.004 摘要 （651）   HTML （9）    PDF （477KB）（754）    可视化    收藏 【目的】研究不同地力条件下，水稻基蘖肥运筹比例对水稻产量、氮素利用率及群体质量的影响，并探明水稻高产适宜的基蘖肥运筹比例以及其是否受土壤地力条件的影响。【方法】选用武运粳23号为供试品种，采用大田小区试验，考察了5种基蘖肥运筹比例R1(10﹕0)、R2(7﹕3)、R3(5﹕5)、R4(3﹕7)、R5(0﹕10)在2种地力水平（高地力、低地力）下对水稻产量及产量构成因素、氮素吸收利用及转运和群体质量的影响。【结果】低地力土壤下，随着蘖肥比例的增加，分蘖速度先增加后减少，高峰苗数降低，干物质积累、氮素利用率及产量均呈现先增加后减少的趋势，基蘖肥比例在施氮量300 kg·hm-2时以3﹕7最佳，施氮量240 kg·hm-2时以5﹕5最佳，此时产量及氮素农学利用率分别可达13.12、13.16 t·hm-2及27.00、29.28 kg·kg-1，显著高于其他处理。在高地力土壤中，随着蘖肥比例的增加，穗数先增加后减少，穗粒数呈现增加的趋势，产量、氮素农学利用率及偏生产力呈现减少趋势，但处理间差异不显著。高地力条件下的分蘖发生速率大于低地力条件，达到高峰苗时间缩短，高峰苗数高于低地力条件。高地力条件下抽穗期至成熟期的干物质积累量较高，有利于后期向籽粒中转运光合产物，因此结实率和千粒重要高于低地力条件，从而导致高地力条件下产量整体高于低地力。在2种地力条件下，不施基肥（R5）处理的分蘖数及高峰苗数最低，分蘖发生时间推迟，表明基肥对于水稻实现分蘖快发、早发具有一定的促进作用；随着基肥用量的增加，分蘖发生时间缩短，缓苗加快，但是蘖肥期氮素供应不足，分蘖速率降低，使得群体到达有效穗数的时间延长。合理协调基肥和蘖肥的比例，低地力条件下基肥用量以50—60 kg·hm-2、基蘖肥比例为1﹕1时，可保证高产的同时减少总氮肥用量（从300 kg·hm-2 降低到240 kg·hm-2）。【结论】基蘖肥运筹比例对产量及氮素利用率的影响因地力水平的差异而不同，并受总施氮量的影响。在低地力下要保证高产并减少氮肥用量，必须注重基蘖肥的合理运筹，保证一定量的基肥投入，并调整好基蘖肥比例。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(16) Select 23. 链格孢菌苹果致病型的ATMT转化体系的建立 顾雪迎，施文骁，王洪凯，郭庆元 2016, 49 (10): 1885-1891.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.005 摘要 （503）   HTML （20）    PDF （1043KB）（516）    可视化    收藏 【目的】链格孢菌（Alternaria alternate）苹果致病型是苹果上的重要致病菌，可以侵染苹果叶片和果实。论文旨在建立农杆菌介导的链格孢菌苹果致病型高效稳定的分子转化体系，为在分子水平上研究链格孢苹果致病型病菌的致病机制提供技术支持。【方法】质粒pKO1-HPH是以pCAMBIA1300骨架为基础构建的穿梭质粒，含有潮霉素抗性基因，并在其多克隆位点上插入了绿色荧光蛋白基因，这个质粒在大肠杆菌和农杆菌细胞中都能够稳定地复制繁殖。将质粒pKO1-HPH采用冻融法转化到农杆菌菌株AGL1中，然后与链格孢苹果致病型菌株XP-1的分生孢子在诱导培养基上共培养进行基因转化，转化子在含有潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上进行筛选；在含有50 μg·mL-1潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上检测转化子细胞中抗性基因在转化子中的表达情况；用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白基因在转化子细胞中的表达情况。在初步确认可以将绿色荧光蛋白和潮霉素B磷酸转移酶基因转入链格孢苹果致病型菌株中后，对菌落培养时间、转化前分生孢子的预处理方法对转化效率的影响进一步优化。转化子的稳定性采用分生孢子5次继代培养后，能否在含有潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上稳定生长来检测；采用PCR方法检测绿色荧光蛋白外源基因和潮霉素B磷酸转移酶基因是否存在于转化子基因组中；用Southern杂交检测外源基因在转化子基因组中插入的拷贝数；在苹果果实和叶片上接种检测转化子致病性的变化。【结果】将100 μL孢子悬浮液（含105孢子）涂布于马铃薯-胡萝卜-琼脂平板上菌落培养36—48 h后，链格孢苹果致病型菌株XP-1可以产生足量的孢子用于农杆菌介导的分子转化。将分生孢子用无菌水洗下，在4℃处理6 h，再与含质粒pKO1-HPH的农杆菌进行诱导共培养，转化子在含有50 μg·mL-1潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上进行筛选，转化效率较好，107个分生孢子转化可获得约200个转化子。转化子经过5次继代培养，对潮霉素B的抗性没有改变。特异性引物PCR检测表明外源基因能够成功地整合到供试菌株的基因组中；Southern杂交表明外源基因多以单拷贝形式随机插入到链格孢苹果致病型菌株XP-1细胞的基因组中；转化子的菌丝和分生孢子在荧光显微镜下可以观察到明显的绿色荧光，说明荧光蛋白基因在菌丝及孢子中均能够成功表达。通过部分转化子的致病性试验，筛选获得数个在苹果果实和叶片上致病性都显著降低的菌株。【结论】建立了农杆菌介导的链格孢菌苹果致病型稳定高效的分子转化体系，为进一步开展此病菌与其寄主的分子互作研究打下基础。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(1) Select 24. 避雨栽培对葡萄霜霉病菌孢子囊飞散时空动态的影响 于舒怡，刘长远，王 辉，刘 丽，关天舒 2016, 49 (10): 1892-1902.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.006 摘要 （405）   HTML （1）    PDF （515KB）（800）    可视化    收藏 【目的】葡萄霜霉病是葡萄生产上最重要的病害之一，在多雨潮湿地区常造成严重的产量损失。研究旨在明确避雨栽培对葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)孢子囊飞散的影响，确定孢子囊飞散与病情变化之间关系，揭示避雨栽培对病菌数量的控制作用，推测避雨栽培下霜霉病的初侵染来源，为葡萄霜霉病的科学防控提供理论依据。【方法】2013年生长季7—9月份，分别对沈阳地区露地和避雨栽培小区内葡萄霜霉病发病情况进行定株定枝系统调查，统计得到病叶率和病情指数。应用SPSS19.0中回归曲线估计程序构建葡萄霜霉病流行时间动态模型，获得能描述不同栽培模式下葡萄霜霉病发病动态的模型参数，并推导2种栽培模式下霜霉病流行时期和流行速率。通过对田间小区内的孢子囊飞散进行定期监测，对比不同栽培模式下孢子囊飞散时间动态差异，探索关键流行时期内病害流行速率与捕孢量之间的关系。对比分析避雨栽培对葡萄霜霉病孢子囊水平、垂直方向飞散的影响，明确关键流行时期内孢子囊的主要来源和孢子囊飞散的主要影响因素。【结果】避雨和露地栽培下葡萄霜霉病的季节流行曲线趋势一致，均表现为典型的S形曲线。应用SPSS19.0软件分析，明确了Logistic模型能够反映沈阳地区葡萄霜霉病流行时间动态情况。露地和避雨栽培下病害流行时期：指数增长期分别为7月5—23日和8月18—30日，逻辑斯蒂增长期分别为7月23日至8月19日和8月30日至9月17日，衰退期分别为8月19日至葡萄生育末期和9月17日至葡萄生育末期。露地栽培下整个生长季孢子囊飞散表现为多峰曲线，当日降雨对孢子囊飞散有显著的冲刷作用。沈阳地区露地和避雨栽培下孢子囊飞散盛期分别为7—8月和8—9月。避雨栽培可明显降低空中孢子囊数量，从而减少孢子囊与避雨设施内葡萄叶片的接触概率，达到降低菌源基数的作用。避雨设施边行最早捕获孢子囊，且数量最多，随着逐渐向中心靠近，首次捕孢时间逐渐推迟，数量逐渐降低。葡萄叶幕对于孢子囊水平方向的飞散具有显著的阻隔效应。不同栽培模式下均以接近地面处的捕孢量最大，且随着高度增加，捕孢量逐渐减少。避雨设施对于接近棚顶处的孢子囊飞散有着显著的遮蔽作用。【结论】避雨栽培可推迟葡萄霜霉病始发时间和首次捕孢时间，缩短病害流行过程和孢子囊飞散周期，显著降低病害流行程度和孢子囊飞散数量。孢子囊飞散受到葡萄叶幕和避雨设施显著的阻隔效应。避雨栽培下葡萄霜霉病的初侵染主要为本地露地栽培下葡萄霜霉病病株上的病斑产生的孢子囊。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(8) Select 25. 长期施肥对黄壤性水稻土磷平衡及农学阈值的影响 刘彦伶，李渝，张雅蓉，张文安，蒋太明 2016, 49 (10): 1903-1912.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.007 摘要 （451）   HTML （1）    PDF （451KB）（1016）    可视化    收藏 【目的】研究长期施肥条件下土壤有效磷（Olsen-P）的演变特征及土壤磷素的累积状况，分析土壤磷素累积与土壤有效磷的响应关系，明确Olsen-P的农学阈值及合理磷肥施用量，为西南黄壤地区科学施用磷肥提供理论依据。【方法】以贵州黄壤肥力与肥料长期定位试验为平台，选择试验中6个处理分别是不施肥（CK）、偏施氮钾肥（NK）、常量氮磷钾肥（NPK）、常量有机肥（M）、减1/2有机肥+减1/2氮磷钾肥（1/2 M +1/2 NPK）和常量有机肥+常量氮磷钾肥（MNPK）。分析西南黄壤性水稻土19年（1995—2013）土壤Olsen-P含量与植株吸磷量，研究土壤Olsen-P的变化规律及土壤累积磷盈亏状况，通过Mitscherlich方程模拟作物相对产量对土壤Olsen-P的响应关系，明确西南黄壤性水稻土的农学阈值，并分析Olsen-P与施肥量之间的关系。【结果】长期施用磷肥处理可显著提高土壤Olsen-P含量，各施磷处理Olsen-P年增长速率在0.72—2.47 mg·kg-1·a-1，其中MNPK处理Olsen-P增长速率最大，NPK处理最小，主要与施肥量的高低有关；有机肥配施化学磷肥比单施化学磷肥和单施有机肥更能有效地促进作物对磷素的吸收；不施磷处理土壤磷素一直处于亏缺状态，施磷处理土壤磷素盈余量为176—1 200 kg·hm-2，其中MNPK处理磷素盈余量最高；土壤累积磷盈余量与土壤Olsen-P增量呈显著线性相关，土壤中磷素每盈余100 kg·hm-2，NPK、M、1/2M+1/2NPK、MNPK处理Olsen-P含量分别提高4.0、2.0、3.2和2.0 mg·kg-1；土壤每年磷盈亏和Olsen-P含量与磷肥施用量呈极显著正相关关系，磷肥用量（纯P）17.4 kg·hm-2时土壤磷盈亏呈持平状态，西南黄壤性水稻土Olsen-P的农学阈值为15.8 mg·kg-1；对应的施肥量（纯P）为每年37.2 kg·hm-2·a-1。【结论】土壤有效磷随土壤磷素盈余而变化，同时与磷素投入量密切相关，当磷肥用量（纯P）为17.4 kg·hm-2·a-1土壤磷素呈持平状态。当磷肥用量（纯P）为37.2 kg·hm-2·a-1时，可获得较高作物产量，磷肥当季利用率高，且磷素在土壤中累积较少。当磷肥用量（纯P）大于37.2 kg·hm-2·a-1时，作物产量对磷肥用量无响应，大量磷素累积在土壤中，增加土壤磷素的流失风险。土壤中累积磷盈余量一定的情况下，西南黄壤性水稻土长期单施化学磷肥提升土壤Olsen-P的速率大于施用有机肥处理。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(9) Select 26. 长期玉米连作下黑土各组分有机质化学结构特征 张福韬，乔云发，苗淑杰，韩晓增 2016, 49 (10): 1913-1924.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.008 摘要 （548）   HTML （3）    PDF （633KB）（777）    可视化    收藏 【目的】研究玉米连作24年前后黑土有机质红外光谱特征，探明长期玉米连作对黑土各团聚体及密度组分中有机质结构的影响，完善长期连作下土壤有机质化学结构动态变化理论。【方法】以中国科学院海伦农业生态试验站长期定位试验为研究平台，选取24年玉米连作下耕层（0—20 cm）土壤为研究对象，以试验设置前土样为对照，根据团聚体和密度大小，将土壤有机质进行分级，分别用元素分析仪和傅里叶红外光谱仪测定原土、各粒级团聚体及密度组分中的碳含量和有机质的红外光谱，对比分析玉米连作24年前后土壤有机质含量及红外光谱特征。【结果】玉米连作24年后，全土中碳含量降低5.3%，2—0.25 mm团聚体中碳含量显著降低，其他粒级团聚体中有降低的趋势；LF(游离态轻组)中碳含量增加32.74%，OF（闭蓄态轻组）中减少16.72%，MF（矿质结合态组分）中没有显著变化。土壤有机质中脂肪族-CH、多糖C-O、酚醇-OH吸收峰相对强度增强，芳香族C=C和羧基C=O吸收峰相对强度降低，脂肪族-CH/芳香族C=C比值增加。在各粒级团聚体中，-CH/C=C比值增加主要表现在＞2 mm团聚体中，主成分分析也表明＞2 mm团聚体中有机质结构变化最大，该粒级团聚体中3个密度组分LF、OF和MF有机质-CH/C=C比值增加，且LF中增加程度最大；在其他粒级中的3个密度组分有机质-CH/C=C比值有增加的趋势。【结论】长期玉米连作，黑土大粒级团聚体和各密度组分中有机质结构趋于脂肪化、简单化，团聚体和矿物质结合对有机质的保护作用降低，黑土有机质稳定性下降。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(4) Select 27. 基于可见/近红外光谱的黄河口区土壤盐分及其主要离子的定量分析 刘亚秋，陈红艳，王瑞燕，常春艳，陈哲 2016, 49 (10): 1925-1935.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.009 摘要 （498）   HTML （2）    PDF （579KB）（763）    可视化    收藏 【目的】定量、准确地监测盐渍土，对其防治和农业可持续发展至关重要，论文旨在明确黄河口区土壤盐分及其主要离子的特征光谱，建立适用于该区域的土壤盐渍化定量分析模型，提高其定量分析的精度和稳定性。【方法】首先以山东省垦利县为研究区，于2014年10月 5—9日野外采集代表性土样96个，对土样风干后，采用土壤化学分析方法室内分析盐分及其主要离子（Cl-、Na+、Ca2+）含量,并采用美国ASD Fieldspec 3光谱仪测定土样可见/近红外高光谱数据，对光谱反射率进行去噪、一阶导数变换等预处理；然后基于盐分及其主要离子不同含量的样本光谱分析盐分及其主要离子的光谱响应，在此基础上，对样本的土壤盐分及其主要离子含量与反射率的一阶导数光谱进行逐波段的相关分析，按照相关系数高且显著的原则，选取各自的敏感波段，再根据敏感波段的交叉情况选取集中波段为特征波段，进而选取特征波段中具有极值相关系数的波段作为显著特征波段，综合确定表征土壤盐分及其主要离子（Cl-、Na+、Ca2+）的特征光谱；最后分别采用多元线性回归（multiple linear regression，MLR）、支持向量机（support vector machine，SVM）和随机森林（random forest，RF）方法构建土壤盐分及其主要离子的定量高光谱分析模型。【结果】研究区土壤盐分及其主要离子（Cl-、Na+、Ca2+）含量的光谱曲线形状和走势整体一致；土壤盐分及其主要离子（Cl-、Na+、Ca2+）的光谱响应谱区为1 320—1 495、1 790—1 920、2 120—2 290 nm；基于相关分析的土壤盐分及其主要离子的敏感谱区为1 490—1 520、1 890—1 930 nm；最后综合光谱响应及相关分析确定土壤盐分及其主要离子的特征波段为1 493、1 801、1 911和2 289 nm，显著特征波段为1 493和1 911 nm。模型结果显示基于2个显著特征波段反射率一阶导数的模型精度均与4个特征波段的模型精度相当，表明显著特征光谱作为盐分及其主要离子的特征光谱进行其定量分析的有效性。比较3种建模方法，RF模型的预测效果最好，SVM模型次之，而MLR模型精度最低；对于盐分、Cl-和Na+，3种方法构建的模型均可有效地用于其定量分析，精度较高且稳定，然而Ca2+预测精度还有待提高。通过综合比较分析，基于显著特征波段（1 493和1 911 nm）反射率一阶导数构建的随机森林（RF）模型对盐分、Cl-和Na+均具有较好的估测精度和稳定性，也可用于Ca2+的定量估测。【结论】基于光谱响应及相关分析综合确定盐分及其主要离子的显著特征光谱（1 493和1 911 nm反射率一阶导数），进而采用随机森林方法构建盐分及其主要离子的定量估测模型，适用于黄河口区土壤盐渍化信息的有效提取。   参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(5) Select 28. 三种类型柑橘成熟果实表面蜡质分析 王金秋，何义仲，徐坤洋，罗 怿，盛 玲，罗 焘，刘 欢，程运江 2016, 49 (10): 1936-1945.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.010 摘要 （593）   HTML （12）    PDF （2333KB）（948）    可视化    收藏 【目的】分析中国主栽柑橘类型（‘鄂柑一号’椪柑（Citrus reticulata Blanco cv.Ponkan）、尤力克柠檬（C. limon cv Eureka cv. Lemon）和沙田柚（C. grandis Osbeck cv. Shatian Yu）成熟期果实表面蜡质，建立中国柑橘果实蜡质基础数据，为科学指导柑橘采后生产提供依据。【方法】以3种类型柑橘的成熟果实为材料，采用扫描电镜观察果实表面蜡质晶体结构；用GC-MS测定果实表面蜡质成分及含量；用定量PCR检测蜡质相关基因在不同类型柑橘果皮表达特性。【结果】扫描电镜结果显示沙田柚蜡质晶体呈较大的倒伏片状，椪柑片状晶体较小，柠檬介于上述两者之间。GC-MS分析表明，3种类型柑橘果实表面外蜡中脂肪族物质主要组成成分相同，分别为：脂肪醛、饱和游离脂肪酸、饱和正链烷烃和伯醇，但品种之间各组分比例及碳原子分布有一定差异。椪柑、柠檬以及沙田柚外蜡含量分别为1.1、2.2和9.3 μg·cm-2。椪柑外蜡中醛、脂肪酸、烷烃和伯醇所占比例为50%、16%、28%和6%；柠檬中各个成分比例分别为42%、30%、18%和11%；沙田柚中则分别为50%、31%、12%和7%。椪柑中26醛和28醛含量最高；柠檬中碳原子数分配比较均匀，没有绝对占主导的成分；沙田柚脂肪族物质中高碳原子数所占比例比其他柑橘类型果实蜡质中高，尤其是32酸、31和33烷烃含量很高。椪柑和柠檬总蜡含量分别为4.3和4.6 μg·cm-2。椪柑总蜡中醛、脂肪酸、烷烃和伯醇与外蜡各成分所占比例相似，分别为57%、14%、23%和4%；柠檬总蜡各成分所占比例则分别为53%、15%、19%和8%。总蜡不同种类脂肪族物质碳原子数分配与外蜡基本相同。萜类物质种类和含量在不同品种类型之间存在较大差异：柠檬中主要的三萜类成分是软木三帖酮（friedelin）、羽扇豆醇（lupeol）、α-香树精（α-amyrin）和β-香树精（β-amyrin）；椪柑中主要含有后3种，没有检测到软木三帖酮；角鲨烯和法尼醇为紧皮柑橘（柚和柠檬）特有。定量表达分析表明，超长链脂肪酸辅酶A合成酶KCS6在不同柑橘类型之间的表达趋势与其对应的物质含量比较吻合，推测该基因造成了这些柑橘类型蜡质含量的差异。酰基转移酶CER2在沙田柚中表达量最高，推测该基因则导致了沙田柚中大于30碳原子数的蜡质成分在不同柑橘类型中占据最高比例。3种类型柑橘果实表面总蜡和外蜡中脂肪族物质均以醛为主，烷烃或酸次之，伯醇最少。总蜡和外蜡物质分配存在差异，其中伯醇和超长链脂肪酸在外蜡中占据比例更高，烷烃则是在外蜡中占据比例较低。萜类物质中三萜类和淄醇仅在总蜡中可以测定出，而角鲨烯和法尼醇则在外蜡和总蜡中都含有。【结论】蜡质成分在柑橘果实中受遗传背景和果皮结构共同影响。宽皮柑橘与紧皮柑橘具有不同的蜡质特征，本研究结果对宽皮柑橘和紧皮柑橘品种特异性的果蜡配方研发具有重要参考价值。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(1) Select 29. 草莓果实不同发育时期的蛋白磷酸化水平 吕晓苏，李宇轩，苗 英，陈良珂，沈元月，秦 岭，邢 宇 2016, 49 (10): 1946-1959.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.011 摘要 （574）   HTML （2）    PDF （521KB）（722）    可视化    收藏 【目的】通过分析草莓果实生长发育过程中蛋白磷酸化水平的变化以期揭示蛋白磷酸化在果实生长发育成熟衰老过程中的作用。【方法】以iTraq（isobaric tags for relative and absolute quantification）定量蛋白质组学结合LC-MS/MS（liquid chromatography-mass spectrometry）的方法对草莓果实的5个不同发育时期（小绿果时期、大绿果时期、白果时期、果实成熟期、果实成熟后期）的蛋白磷酸化水平进行综合分析，并对这些鉴定到的磷酸化蛋白进行生物过程分类、亚细胞定位分类和分子功能分类。通过综合分析多个数据库的比对结果，对所鉴定的磷酸化蛋白进行功能的预测。【结果】不同发育时期的磷酸化蛋白有所差异，并且在大绿果时期到果实成熟期磷酸化差异蛋白总数比其他时期显著增加，其中，多数的磷酸化蛋白参与生长发育调控。生物过程分类结果显示，这些磷酸化蛋白多数集中在植物信号转导途径和糖代谢途径中，其中，参与信号转导途径的有17个，参与糖代谢生物过程的有8个。属于MAPK级联途径的有MAPKKK家族的101308592、MAPK家族的470122684和596127083。596127083的磷酸化水平在各个发育时期较为稳定，101308592随发育时期磷酸化水平逐渐升高，而470122684的磷酸化水平从软果期开始急剧下降。亚细胞定位分类结果显示，多数磷酸化蛋白定位在细胞核和细胞质中。分子功能分类结果显示，多数磷酸化蛋白具有转录调节和磷酸化去磷酸化的分子功能，鉴定出与生长发育调节相关的磷酸化蛋白有24个。其中，具有转录调控功能的有4个，参与细胞分裂的有6个，还有一部分磷酸化蛋白与调控生长发育的激素的响应有关，除此之外，还鉴定到3个与果实的成熟软化相关的磷酸化蛋白。另外，一部分蛋白有多种磷酸化修饰方式，其中，SNF1相关蛋白激酶β亚基有3种磷酸化修饰，且其磷酸化水平各不相同。【结论】同种蛋白可能同时存在不止一种磷酸化修饰方式。不同的磷酸化修饰方式的作用不尽相同。不同的时期占主导地位的修饰方式也不尽相同。磷酸化蛋白不仅参与转录调节和细胞分裂分化，还参与果实发育过程中对植物激素的响应和糖的代谢积累，甚至参与果实成熟软化的调节。另外，101308592和470122684可能参与果实生长发育的调控。总之，蛋白磷酸化修饰在草莓果实生长发育过程中起重要的调控作用。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(1) Select 30. 添加不饱和脂肪酸对酿酒酵母胞内脂肪酸成分和葡萄酒香气的影响 段亮亮，潘秋红，王亚钦，叶冬青，段长青，燕国梁 2016, 49 (10): 1960-1978.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.012 摘要 （550）   HTML （4）    PDF （900KB）（1661）    可视化    收藏 【目的】研究葡萄汁中不饱和脂肪酸（Unsaturated fatty acids，UFAs，包括油酸、亚油酸和α-亚麻酸）含量同时变化对葡萄酒发酵过程中酿酒酵母胞内脂肪酸成分和酿酒香气的影响，为提高葡萄酒品质提供参考。【方法】选用‘美乐’葡萄（Vitis vinifera L.）汁为培养基，试验设置对照组（不添加UFAs，CK）、低浓度UFAs添加组（LFG）和高浓度UFAs添加组（HFG），比较葡萄酒酒精发酵过程中3个处理组间酵母（Saccharomyces cerevisiae EC1118）生长（OD600）、细胞内脂肪酸成分以及酿酒香气成分的差异。【结果】提高UFAs浓度能够促进酵母细胞生长以及对UFAs的吸收，使胞内UFAs含量迅速增加，但抑制饱和脂肪酸（C4:0—C24:0）的合成。分析UFAs对葡萄酒香气物质的影响发现，高浓度UFAs能够促进酵母高级醇和乙醇酯类（包括己酸乙酯、辛酸乙酯和癸酸乙酯）香气的产生，但抑制了中短链脂肪酸（medium-chain fatty acids，MCFAs，C4:0—C12:0）的产生，对来源于葡萄果实的醛类、单萜和降异戊二烯香气的影响较小。【结论】提高葡萄汁初始UFAs含量能够促进细胞生长，提高葡萄酒发酵速度，有利于乙醇酯类香气物质的合成，从而增强葡萄酒的果香、花香和甜香特征。因此，调控葡萄或葡萄汁中不饱和脂肪酸浓度可以作为调控葡萄酒香气品质的一种重要手段。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(2) Select 31. 不同乳酸菌发酵对桂圆肉中酚类物质及抗氧化活性的影响 赖婷，刘磊，张名位，张瑞芬，张雁，魏振承，邓媛元 2016, 49 (10): 1979-1989.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.013 摘要 （645）   HTML （3）    PDF （403KB）（1112）    可视化    收藏 【目的】比较不同乳酸菌种发酵对桂圆肉（干制的龙眼果肉）中游离态、结合态酚类物质含量和单体酚组成及其抗氧化活性的影响，为开发营养保健的乳酸菌发酵龙眼新产品提供参考。【方法】将桂圆肉打浆（料水比为1﹕1.5）后作为发酵基质，进行高温湿热灭菌，再分别接入7种不同乳酸菌（植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、戊糖片球菌、明串珠菌、保加利亚乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种和干酪乳杆菌，菌浓度：8.0—9.0 lg CFU/mL），接种量为1%，在30℃下静置发酵48 h（pH 4.0—4.2），然后对发酵前后桂圆肉中游离态和结合态总酚、总黄酮含量的变化进行分析，采用高效液相色谱法分析其单体酚类的组成及含量的变化，采用铁离子还原能力（ferric reducing abi1ity of plasma，FRAP）和氧自由基吸收能力（oxygen radical absorption capacity，ORAC）两种方法评价其体外抗氧化能力差异。【结果】7种乳酸菌发酵均能不同程度增加桂圆肉中游离态总酚和总黄酮含量，降低结合态总酚和总黄酮含量。与发酵前相比，发酵后桂圆肉游离态总酚含量增加0.4%—11.9%，结合态总酚含量下降14.4%—41.4%；游离态总黄酮含量增加2.8%—19.6%，结合态总黄酮含量下降19.6%—70.6%。但不同菌种对其影响存在差异，其中植物乳杆菌释放桂圆肉中结合态酚类物质的能力最强，使游离酚含量增加11.9%，结合态酚含量下降41.4%，游离态总黄酮增加19.6%，结合态总黄酮下降70.6%。不同乳酸菌发酵对桂圆肉中单体酚（没食子酸、丁香酸、表儿茶素、高儿茶酚、原儿茶酸、对香豆酸和异槲皮苷）含量影响亦存在显著差异（P＜0.05)，其中发酵后的游离态的没食子酸和高儿茶酚含量分别增加8.6%—69.8%和0.4%—29.5%，结合态的没食子酸和高儿茶酚含量分别下降80.0%—88.3%和45.6%—73.9%。而乳酸菌发酵后，桂圆肉游离态FRAP和ORAC抗氧化能力与发酵前相比也有显著提高（P＜0.05)，其中植物乳杆菌发酵后，游离态FRAP和ORAC抗氧化能力分别提高11.8%和59.1%。【结论】乳酸菌发酵能提高桂圆肉中游离态酚类物质含量，降低结合态酚类物质含量，同时提高其抗氧化能力。植物乳杆菌在发酵桂圆肉的过程中，其释放结合态酚类物质的能力明显优于其他乳酸菌，其发酵后桂圆肉的抗氧化能力也有明显提高。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(4) Select 32. 山羊PRNP基因启动子转录活性研究 周荣艳，魏彦辉，锡建中，李兰会，陈 辉，高立杰，张振红 2016, 49 (10): 1990-1997.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.014 摘要 （415）   HTML （1）    PDF （2144KB）（513）    可视化    收藏 【目的】分析山羊PRNP基因启动子活性区域，旨在筛选调节朊蛋白表达水平的关键区域或转录因子，为阐明山羊PRNP基因的表达调控提供理论依据，并为从遗传学角度降低朊蛋白病的发生提供思路。【方法】以山羊PRNP基因序列（GenBank登录号：EU870890）为模板，设计特异性引物，扩增山羊PRNP基因5′侧翼区片段，并将扩增片段克隆至pEASY-T3载体，鉴定为阳性的克隆进行测序；利用生物信息学方法和在线工具进行启动子区域和转录因子结合位点的预测；利用缺失突变技术扩增启动子区不同长度的片段11个，并克隆至pEASY-T3载体后，鉴定为阳性的质粒和pGL3-Basic载体分别用限制性内切酶Mlu I和Bgl II进行酶切，并回收酶切产物；利用T4连接酶进行目的片段与pGL3-Basic连接，鉴定为阳性的荧光素酶报告基因重组质粒进行测序，并提取无内毒素质粒，用脂质体转染法瞬时转染至SH-SY5Y细胞，转染48h后，利用双荧光素酶检测试剂盒进行各缺失突变重组质粒在细胞内的启动活性检测。【结果】成功克隆了山羊PRNP基因5′侧翼区片段，长度为2 332 bp，且该片段含有预测的启动子活性区域、保守的motifs和多个转录因子的结合位点；成功克隆了11个含有不同长度启动子的片段，并与荧光素酶报告基因连接，并构建了目的片段与荧光素酶报告基因的重组质粒；转染时脂质体与DNA的比例为1﹕0.5，萤火虫荧光素酶载体与海肾荧光素酶比例为50﹕1；山羊PRNP基因5′侧翼区存在着核心启动子，启动子活性最强的区域为-519—+82 bp，且在-220—+59 bp这一区域存在着正调控元件，外显子1对启动子活性中起重要的调控作用；4个motifs可能为正调控元件结合位点；在强启动子活性区存在10个Sp1结合位点，2个AP-2 alpha结合位点和1个AP-1结合位点；山羊PRNP基因motif 3和motif 4分别预测为转录因子Foxp3和COE 1的结合位点。【结论】确定了山羊PRNP基因启动子的核心区域（-519—+82bp），外显子1对启动子活性起重要的调控作用。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 Select 33. 山羊IGFBP-2基因的克隆、序列分析及其组织表达 占思远，董 尧，李 利，仲 涛，王林杰，张红平 2016, 49 (10): 1998-2007.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.015 摘要 （403）   HTML （1）    PDF （3881KB）（494）    可视化    收藏 【目的】克隆获得南江黄羊IGFBP-2（Insulin-like growth factor binding protein -2）基因的CDS区全序列，对其进行生物信息学分析，并分析IGFBP-2的mRNA和蛋白组织表达特征，为深入研究该基因在出生后山羊生长和发育过程中的作用以及表达调控提供基础资料。【方法】下载NCBI的GenBank数据库中公布的绵羊（Ovis aries，NM_001009436）和牛（Bos taurus，NM_174555）的IGFBP-2基因的mRNA序列，经序列比对后采用保守区域序列并利用Primer Premier 6.0软件设计克隆引物，经PCR扩增后采用TA克隆技术获取含有阳性克隆子的菌液，送公司测序得到山羊IGFBP-2基因的完整编码区序列，并利用EditSeq、DNAMAN 6.0、MEGA 6.0和ExPASy在线平台等软件对CDS区序列和其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析；获得山羊IGFBP-2基因CDS区序列后，利用该序列设计实时荧光定量PCR（Q-PCR）引物，采用Q-PCR和蛋白质免疫印迹杂交（Western blotting）方法检测了IGFBP-2的mRNA和蛋白在出生后南江黄羊不同组织（心脏、肝脏、肺、背最长肌、半膜肌和臂三头肌）和不同发育阶段（3、30、60、90和120 d）的表达情况。【结果】①克隆得到954bp的南江黄羊IGFBP-2基因的CDS区全序列，碱基组成为GC含量69.39%，AT含量30.61%，共编码317个氨基酸残基，预测的山羊IGFBP-2蛋白分子量大小为33.8808 kD，等电点为7.82，二级结构由无规卷曲（68.14%）、α-螺旋（18.30%）和延伸链（13.56%）三种形式组成；蛋白结构域分析发现，IGFBP-2蛋白序列包含保守的IB（IGFBP homologues）和TY（Thyroglobulin type Ι repeats）结构域，IB结构域位于第37—125位氨基酸处，TY结构域位于第250—302位氨基酸处；②磷酸化位点预测发现，IGFBP-2蛋白中存在Ser（5）和Thr（7）共12个磷酸化位点；糖基化位点预测发现，IGFBP-2蛋白序列中存在10个N-糖基化位点和2个O-糖基化位点；③CDS区序列相似性比较发现，山羊IGFBP-2与绵羊、牛、猪、人和小鼠的相似性分别达到98.99%、97.73%、87.12%、78.33%和76.26%；氨基酸序列相似性比较发现，山羊IGFBP-2与绵羊、牛、猪、人和小鼠的相似性分别达到99.24%、98.10%、87.07%、70.27%和73.00%；④系统进化树分析发现，山羊IGFBP-2与绵羊和牛的亲缘关系最近；⑤组织表达分析表明，IGFBP-2在肝脏中的mRNA和蛋白的相对表达量均最高(P<0.01)，背最长肌次之；在不同发育阶段的肝脏组织中，IGFBP-2 mRNA和蛋白相对表达量均呈现一直上升的趋势；在不同发育阶段的背最长肌组织中，IGFBP-2的mRNA表达水平呈现一种“上升-下降-上升”的波动平衡。【结论】获得了山羊IGFBP-2基因完整的编码区序列和组织表达特征，生物信息学分析发现IGFBP-2基因的编码区序列具有物种间的保守性，肝脏是山羊IGFBP-2 的mRNA和蛋白表达的主要组织，同时在山羊不同发育阶段的肝脏和背最长肌组织中，IGFBP-2基因的mRNA和蛋白表达丰度呈现一定的规律性，表明IGFBP-2基因可能在出生后山羊的早期生长发育过程中发挥着重要的作用。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(1) Select 34. 猪圆环病毒2型诱导PK-15细胞产生IFN-β的信号通路研究 张新晨，赵其岭，陈萌萌，孙嘉瑞，鲍恩东，张书霞，吕英军 2016, 49 (10): 2008-2016.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.016 摘要 （507）   HTML （12）    PDF （587KB）（489）    可视化    收藏 【目的】研究猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2，PCV2)感染PK-15细胞后调控β-干扰素（interferon-β，IFN-β）生成的信号通路，为猪圆环病毒病的发生机理和防治提供理论基础。【方法】将PK-15细胞随机分成5组：对照组、PCV2组、BX795(TBK1/IKKε抑制剂)组、BAY 11-7082(NF-κB抑制剂)组和BX795+BAY 11-7082（混合抑制剂）组。 BX795组、BAY 11-7082组、BX795+BAY 11-7082组分别用0.5µmol BX795、5µmol BAY 11-7082、0.5µmol BX795+5µmol BAY 11-7082预先处理1h，然后感染PCV2。于感染后3、12、24、48和72h收集细胞，提取RNA。用荧光定量PCR检测IFN-β、模式识别受体（TLR3、TLR9、RIG-1、MDA-5、DAI）、接头蛋白（TRIF、MyD88、Sting、MAVS、IRF3）的mRNA含量。【结果】PCV2感染PK-15细胞后，IFN-β的mRNA含量在48、72h显著升高（P＜0.01），表明PCV2感染可以诱导PK-15细胞生成IFN-β；TLR3的mRNA含量在48h显著升高（P＜0.01），TLR9的表达量在48、72h显著升高（P＜0.01）；TLR3和TLR9下游的接头蛋白MyD88和TRIF的mRNA含量在48h显著升高（P＜0.01），表明PCV2激活了Toll样受体介导的NF-κB信号途径；MDA-5的mRNA含量在48、72h显著升高（P＜0.01），RIG-1的mRNA含量在72h显著升高（P＜0.01），MDA-5和RIG-1下游的接头蛋白MAVS、Sting、IRF3的mRNA含量在48h显著升高（P＜0.01），表明PCV2激活了RIG-1样受体介导的IRF3信号途径；DAI的mRNA含量在48、72h显著升高（P＜0.01），表明PCV2亦激活了DNA模式识别受体介导的IRF3信号途径；分别用BX795和BAY 11-7082抑制IRF3和NF-κB介导的信号通路，结果显示NF-κB抑制剂组的IFN-β的mRNA含量与PCV2组相比无显著性差异（P＞0.05），TBK1/IKKε抑制剂组的IFN-β的mRNA含量与PCV2组相比明显下降（P＜0.05），表明PCV2诱导IFN-β的产生主要由IRF3信号途径调控。【结论】PCV2感染可以诱导PK-15细胞中IFN-β表达量的上调，其上调主要与IRF3信号通路有关。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 Select 35. 2014-2015年中国部分地区蜜蜂慢性麻痹病病毒流行病学调查及系统发育分析 贾慧茹，吴艳艳，王强，代平礼，周婷 2016, 49 (10): 2017-2026.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.017 摘要 （370）   HTML （1）    PDF （3116KB）（327）    可视化    收藏 【目的】前期笔者课题组对北京地区蜂群进行了常见病毒感染情况的调查，发现蜜蜂慢性麻痹病毒（Chronic bee paralysis virus，CBPV）在病蜂群中的检出率显著高于在健康蜂群中的检出率，据此推测可借助病蜂群对CBPV进行研究。鉴于目前国内CBPV流行病学数据的匮乏，论文旨在了解中国主要养蜂区病蜂群中CBPV的分布及遗传变异情况，以期为该病的防控提供依据。【方法】2014—2015年间从四川、安徽、浙江、河南、山东、山西、黑龙江、北京8个主要养蜂省（市）共采集到136份病蜂样品，采用RT-PCR法检测CBPV的感染情况。每份样品随机选取10只蜜蜂，取其头部，利用Trizol法提取样品的总RNA；通过凝胶电泳及NanodropND-2000对总RNA的质量进行定性与定量检测。以样品总RNA为模板合成cDNA第一条链，而后以cDNA为模板扩增CBPV的特异性片段。所有扩增片段均进行琼脂糖凝胶电泳，对部分阳性样品进行测序与序列分析；通过扩增片段与阳性片段的比对确定每份样品中CBPV的检出情况。为研究CBPV中国分离株的系统发育特性，以样品cDNA为模板，扩增全部阳性样品的RdRP基因（RNA-dependent RNA polymerase）特异性片段，而后进行测序与序列分析。将序列提交至GenBank获取基因登录号。对获得的分离株的RdRP基因与GenBank上发表的相应序列进行比较分析，利用CLUSTAL W软件对全部参考序列及本研究获得的分离株的对应序列进行同源性比对，应用软件MEGA 6.0 中邻接法（neighbor-joining）对所有序列绘制系统进化树。【结果】蜜蜂头部总RNA质量检测结果显示，所有样品的总RNA相对完整，且浓度处于（980.5±37.1）ng·L-1范围内，A260/A280 在1.92—2.24。CBPV感染率检测结果显示，136份病蜂样本中共检出120份CBPV阳性样品，阳性率高达88.2%。全部阳性样品的电泳结果可见与预期大小一致的特异性片段，其序列与靶序列同源性达到99%以上。RdRp基因特异性片段的序列分析表明，本研究共获得8个CBPV中国分离株，其序列与多种其他地区的CBPV的相应序列同源性达到97%以上。中国分离株GenBank登录号分别为KT374042—KT374049。对其系统进化树分析后可知，世界流行的CBPV分离株可分为5个进化分支：两个欧洲分支（European clade 1、 European clade 2），两个中日混合分支（Chinese -Japanese clade 1、Chinese-Japanese clade 2）和一个美国分支（US clade）。获得的8个中国分离株均存在于同一进化分支上，且与之前得到的6个江苏分离株以及4个日本分离株共同形成两个混合分支。【结论】进一步证实了中国病蜂群中普遍存在CBPV感染；系统进化关系表明，目前国内CBPV分离株之间的遗传关系无明显地域性特征，与日本分离株亲缘关系较近。有关CBPV的监测工作亟需加强，且其预警作用需引起重视。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(1) Select 36. 家蚕bHLH转录因子Bmdimm与Bmchip的相互作用 赵朋，王叶菁，位曙光，刘莉娜，李珍珍，赵萍，何华伟 2016, 49 (10): 2027-2038.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.018 摘要 （406）   HTML （2）    PDF （3828KB）（777）    可视化    收藏 【目的】bHLH转录因子Bmdimm是家蚕（Bombyx mori）5龄后期调控蚕丝蛋白丝素重链基因表达的重要转录因子。分析发现Bmdimm蛋白中包含有可能发生泛素化修饰的赖氨酸残基K43，因此推测Bmdimm可能发生泛素化修饰而被降解。Bmchip属于家蚕泛素连接酶E3家族中的U-box亚家族，在家蚕5龄期后部丝腺中有表达。论文旨在明确Bmdimm与Bmchip之间的相互作用，以便于更好地理解Bmdimm在家蚕体内的泛素化修饰及其对丝素重链基因转录调控的生物学意义。【方法】利用家蚕各组织基因芯片表达谱分析Bmdimm和Bmchip在后部丝腺中的表达情况；分别通过PCR和基因合成获得Bmdimm和Bmchip的CDS序列，将其构建到不同的原核表达载体并转化大肠杆菌表达目的蛋白，筛选最优的表达条件；利用镍柱亲和层析纯化融合蛋白，加入蛋白酶酶切，并再次通过镍柱亲和层析去除融合标签，纯化Bmdimm和Bmchip蛋白；利用凝胶过滤层析分析Bmdimm和Bmchip在溶液中的聚集状态；利用圆二色光谱研究Bmdimm和Bmchip蛋白的二级结构；利用Far-western blotting和Pull-down研究Bmdimm和Bmchip在体外的相互作用；利用微量热泳动研究Bmdimm和Bmchip结合的亲和力。【结果】基因芯片表达谱揭示Bmdimm和Bmchip在家蚕5龄期后部丝腺中都有表达。构建了Bmdimm和Bmchip多种表达载体，发现ppSUMO-Bmdimm和pET-32M·3C-Bmchip表达载体在16℃，0.3 mmol·L-1 IPTG诱导下表达最好，并以此为基础表达纯化了Bmdimm和Bmchip蛋白；凝胶过滤分析表明Bmdimm和Bmchip蛋白在溶液中主要以二聚体的形式存在；圆二色光谱显示Bmdimm和Bmchip蛋白都含有α-螺旋结构; Far-western blotting和Pull-down结果表明Bmdimm和Bmchip可以在体外结合；利用微量热泳动实验计算出Bmdimm和Bmchip结合的平衡解离常数为(750±28.6)μmol·L-1。【结论】家蚕bHLH转录因子Bmdimm和泛素连接酶Bmchip在家蚕5龄期后部丝腺中均有表达，二者可以在体外发生瞬时相互作用，暗示了Bmdimm可能通过Bmchip介导发生泛素化修饰从而下调丝素重链基因的转录。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(5) Select 37. 玉米Glyco-hydro-16糖苷酶家族全基因组的鉴定及其遗传分化 林峰，葛敏，周玲，赵涵 2016, 49 (11): 2039-2048.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.11.001 摘要 （671）   HTML （3）    PDF （3791KB）（604）    可视化    收藏 【目的】全基因组水平鉴定玉米Glyco-hydro-16家族，分析该家族基因在不同组织中的表达模式以及在不同玉米杂种优势群中的遗传分化。【方法】根据Glyco-hydro-16家族相对保守的序列及结构域，构建Glyco-hydro-16家族的隐马尔科夫模型文件（Glyco-hydro-16.hmm），利用hmmersearch程序在玉米全基因组中进行比对，获得玉米中含有该家族保守结构域的所有序列。通过Blast2GO进行功能注释，利用蛋白质序列构建该家族的系统发育进化树。使用玉米自交系B73不同组织及不同发育时期的RNA-seq数据库分析该家族基因的表达模式。根据该家族基因在染色体上的位置筛选SNP标记，计算其在不同玉米杂种优势群间的群间遗传分化系数（genetic differentiation coefficient，Fst），分析其遗传分化。【结果】根据该家族相对保守的序列及结构域，在全基因组水平共鉴定出34个玉米Glyco-hydro-16家族成员，注释表明所有基因都是木葡聚糖转移酶/水解酶基因，3个保守性较高的Motif区段存在于该家族所有成员中。通过系统发育关系和序列相似性将该家族分为8个亚家族，每个亚家族有2—8个基因，分布在除第3和第6染色体外的其他8条染色体上，在第2、第5及第10染色体上成簇分布。该家族在禾本科作物中同源性较高，与拟南芥分属不同的分支，但只有3个玉米成员（AC210669.3、GRMZM2G413006和GRMZM2G166944）被划分到禾本科分支中，其他玉米成员被划分到单独的分支中。通过表达谱分析表明该家族成员在玉米中均有表达，但在不同组织中的表达水平有差异。为解析该家族基因在不同玉米种质资源中等位基因的变异，根据玉米Glyco-hydro-16家族基因在染色体上的位置筛选SNP标记，计算其在玉米杂种优势群SS及NSS间的群间遗传分化系数。结果显示，共有10个该家族基因所处位点的Fst值高于阈值0.15，达到高度分化水平，分别位于第1、第2、第4、第5、第7以及第9染色体上。其中，位于第2染色体上的GRMZM2G091118相应位点的Fst值为0.52，表明该位点在SS群和NSS群间的群间遗传分化度极大。【结论】通过全基因组扫描在玉米中鉴定出34个Glyco-hydro-16家族成员，均为木葡聚糖转移酶/水解酶基因，在不同组织中，其表达模式不同，可能参与不同生理发育过程。部分该家族成员所处位点在玉米杂种优势群SS和NSS间的等位基因分化极大。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 Select 38. 苦荞产区种质资源遗传多样性和遗传结构分析 屈洋，周瑜，王钊，王鹏科，高金锋，高小丽，冯佰利 2016, 49 (11): 2049-2062.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.11.002 摘要 （592）   HTML （2）    PDF （1324KB）（733）    可视化    收藏 【目的】了解苦荞产区种质资源遗传多样性和遗传结构，为苦荞资源的有效利用提供参考。【方法】采用相关性分析、主成分分析方法对苦荞8个植株性状进行分析；温室内培养苦荞资源，于3叶期，每个资源选取10株新鲜叶片，采用CTAB方法提取苦荞基因组DNA，结合SSR分子标记方法进行PCR扩增，然后对扩增产物进行电泳检测并照相保存，根据SSR检测位点构建[0，1] 矩阵，最后利用PowerMarker3.25和Structure2.3.4软件对83份苦荞种质资源进行遗传多样性和群体遗传结构分析。【结果】8个植株性状分布较分散，大部分植株性状间呈现显著相关，植株性状的前4个主成分累计贡献率达到85.22%，基本可以显示苦荞种质资源植株性状的相关性关系；不同植株性状间株高和主茎粗变异系数最大，遗传变异最丰富。不同省份的资源表现出不同的遗传多样性，西藏资源的表型遗传多样指数H′ 均值最高，为1.82，其次为四川，遗传多样性指数H′ 均值为1.78；不同省份资源植株性状的遗传多样性存在差异，四川生育期、株高、主茎分枝的遗传多样性指数H′ 最高，陕西叶宽的遗传多样性指数H′ 最高，云南千粒重的遗传多样性指数H′ 最高；植株性状的主成分分析表明相似产区的植株性状具有一定的相关性。13条核心引物共检测出208条清晰的条带，其中200条（96.15%）具有多态性，平均每条引物扩增出的条带数和多态性条带数分别为16个和15.4个；不同引物等位基因变化范围为4—58个，重要的基因频率变化范围为0.02—0.86，多样性指数变化范围为0.38—0.98，多态信息量（PIC）变化范围为0.35—0.98；不同地理来源苦荞种质资源的遗传多样性表明，北方产区亲缘关系较近，西南产区亲缘关系较近，说明不同地理来源的群体类别与产区存在一定的关系；来自陕西群体的等位基因数量最多、基因多样性指数和多态性信息量最高，分别为12.0769、0.8365和0.8265；基于模型的遗传结构分析将苦荞资源划分为3个类群，基于遗传距离的聚类显示苦荞种质资源穿插分布，资源的地理来源地分化不明显，但是同一产区的资源遗传距离较近，资源之间具有一定的产区分化。【结论】苦荞产区种质资源PIC较高，遗传多样性丰富，2大产区具有一定的资源交流和遗传物质交换。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(12) Select 39. 铝胁迫诱导根系分泌异羟肟酸及其对玉米抵御铝毒害的作用 高小凤，郭添香，唐新莲，黎晓峰 2016, 49 (11): 2063-2071.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.11.003 摘要 （434）   HTML （2）    PDF （488KB）（377）    可视化    收藏 【目的】通过对铝诱导玉米根系分泌异羟肟酸的研究，为揭示玉米的耐铝机制提供理论依据。【方法】选用玉米品种郑单958和泰玉11号，采用水培方法，设置铝胁迫试验，测定它们在铝胁迫下根伸长量、根尖铝含量、根尖胼胝质含量、根系异羟肟酸的分泌量、异羟肟酸解铝毒的相关指标等，分析玉米的抗铝性、铝对根系分泌异羟肟酸的影响及异羟肟酸的解铝毒作用。【结果】与对照（不加铝）处理相比，10 μmol·L-1铝（AlCl3）处理后郑单品种幼根伸长显著受阻而根尖铝含量和根尖胼胝质积累量显著增加。根伸长量降低了47.77%，根尖铝含量和根尖胼胝质含量分别增加了226.64%和60.74%。相反，铝处理对泰玉品种幼根伸长、根尖胼胝质积累的影响不显著。虽然20 μmol·L-1铝（AlCl3）处理44 h后泰玉品种根系柠檬酸分泌量比对照（不加铝）处理显著增加了41.28%，但处理24 h内2个玉米品种根系柠檬酸分泌量与对照（不加铝）处理的差异不显著，即24 h内铝不能诱导玉米根系分泌柠檬酸。而铝处理24 h后，铝能诱导泰玉根系分泌异羟肟酸（丁布和门布），且异羟肟酸的分泌量随着铝浓度（10、15和20 μmol·L-1）的增加和处理时间（3、6、9、12和24 h）的延长而显著增加，但铝（10、15和20 μmol·L-1）不能诱导郑单品种根系分泌异羟肟酸。与光照条件相比，在黑暗条件下20 μmol·L-1铝（AlCl3）诱导泰玉品种异羟肟酸的分泌量显著增加而根伸长也随之显著改善，丁布和门布的分泌量分别增加了40.81% 和72.02%，根伸长量增加了33.15%。与单独20 μmol·L-1铝（AlCl3）处理相比，铝溶液中添加丁布（3 mg·L-1）和门布（3 mg·L-1）后玉米初生根伸长量显著增加而根尖铝含量显著降低。添加丁布和门布后，郑单品种根伸长量分别增加了14.16%和13.85%，泰玉品种分别增加了16.16%和11.33%；郑单品种根尖铝含量分别降低了39.94%和43.54%，泰玉品种分别降低了39.92%和42.10%。另一方面，20 μmol·L-1铝（AlCl3）处理显著增加泰玉品种根和叶片中的异羟肟酸含量。然而，铝胁迫下郑单叶片中的异羟肟酸含量显著降低。【结论】玉米对铝的抗性与异羟肟酸的分泌有关，铝诱导玉米根系分泌异羟肟酸是玉米抵御铝毒害的一种有效机制，而植株叶片中的异羟肟酸含量可能与异羟肟酸的分泌有关。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(1) Select 40. 不同生育时期遮阴对大豆叶片光合和叶绿素荧光特性的影响 王一，张霞，杨文钰，孙歆，苏本营，崔亮 2016, 49 (11): 2072-2081.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.11.004 摘要 （701）   HTML （3）    PDF （365KB）（897）    可视化    收藏 【目的】研究在不同生育时期遮阴处理下，不同大豆品种植株叶片叶面积、比叶重、叶绿素含量、光合参数、叶绿素荧光参数和产量构成因素的变化规律，为中国南方丘陵和山区大面积推广的玉米大豆间套作种植技术提供理论依据。【方法】采用透光率50%的遮阳网对生育期和生育时期总天数不同的3个参试大豆品种桂夏2号、南豆12和C103进行遮阴，设置4个处理，分别为不遮阴（CK）、出苗至盛花期遮阴（VER2）、出苗至鼓粒期遮阴（VER5）和盛花期至完熟期遮阴（R2R8），测定叶面积、比叶重、叶绿素含量、光合参数、荧光参数和产量构成因素。【结果】VER2处理下大豆品种叶面积、叶绿素（a+b）含量和表观量子效率分别比对照高15.50%、12.95%和74.13%，比叶重、光补偿点和最大光合速率分别比对照低15.78%、26.16%和26.52%，R2R8处理下大豆品种叶面积、叶绿素（a+b）和表观量子效率平均分别比对照高0.3%、10.53%和28.07%，比叶重、光补偿点和最大光合速率平均分别比对照低10.15%、20.34%和12.13%；盛花期复光PSⅡ最大量子产量平均比对照低3.01%，非光化学荧光淬灭系数平均比对照高26.80%，鼓粒期复光PSⅡ最大量子产量平均比对照低8.47%，非光化学荧光淬灭系数平均比对照高40.79%；VER2、VER5和R2R8处理下，桂夏2号单株粒重分别比对照低40.84%、48.67%和59.16%，百粒重分别比对照低23.69%、39.31%和26.39%，南豆12单株粒重分别比对照低46.67%、54.16%和21.19%，百粒重分别比对照低3.91%、19.93%和26.14%，C103单株粒重分别比对照低69.8%、74.85%和73.89%，百粒重分别比对照低68.8%、69.55%和71.64%。【结论】出苗至盛花期遮阴对参试大豆品种叶片光合及叶绿素荧光特性的影响大于盛花期至完熟期遮阴，大豆植株遮阴后在盛花期复光，叶片光合能力有一定程度的恢复，在鼓粒期复光，则表现为受到强光胁迫，因此，从减小遮阴对大豆叶片光合作用不良影响的角度考虑，在中国南方丘陵和山区玉米大豆间作优于玉米大豆套作，在玉米大豆套作模式下选择品种、播期及种植技术时，应确保大豆在盛花期前恢复光照，避免遮阴超过大豆鼓粒期。前期遮阴和后期遮阴对大豆产量的影响大小因大豆品种而异，但遮阴时间越长对大豆产量构成影响越大。 参考文献 | 相关文章 | 多维度评价 被引次数: Baidu(18)