【背景】金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种常见的革兰氏阳性致病菌,可引发多种感染性疾病及毒素相关疾病。巨噬细胞作为先天免疫的核心,在机体清除S. aureus感染免疫中起关键作用,但S. aureus能通过诱导巨噬细胞凋亡来逃避宿主的免疫清除作用。鸟苷酸结合蛋白2(guanylate-binding protein 2, GBP2)是一种干扰素诱导的GTP酶,能够参与宿主抗胞内病原体的免疫调节。但其在S. aureus诱导巨噬细胞凋亡中的具体功能与调控机制尚未明确。【目的】探讨GBP2在S. aureus感染巨噬细胞过程中对细胞凋亡的调控作用及其分子机制,为揭示S. aureus免疫逃逸新机制,及开发抗S. aureus感染新策略提供理论依据。【方法】基于小干扰RNA(siRNA)技术,在巨噬细胞系RAW264.7中构建GBP2敲减的细胞模型。采用Western blot技术检测S. aureus感染巨噬细胞RAW264.7后巨噬细胞内目标蛋白GBP2、凋亡关键执行蛋白(Cleaved-Caspase3,Cleaved-PARP1)、调控蛋白(Bax, Bcl-2)以及MAPK信号通路关键分子(总蛋白JNK、ERK、p38及其磷酸化形式p-JNK、p-ERK、p-p38)的表达水平变化;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测GBP2的mRNA表达水平变化;免疫荧光染色观察GBP2的细胞内定位与表达情况;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)定量检测各组细胞的凋亡率。所有试验均设置严格的对照,数据结果采用适当的统计学方法进行分析,显著性水平设定为P<0.05。【结果】S. aureus感染能极显著诱导巨噬细胞RAW264.7内GBP2蛋白和mRNA表达水平的上调,并激活内源性凋亡通路,Cleaved-Caspase3和Cleaved-PARP1蛋白表达显著升高(P<0.001),促凋亡蛋白Bax表达上调而抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,Bax/Bcl-2比值显著升高(P<0.001)。流式细胞术结果也显示S. aureus感染组细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.001)。除此之外,S. aureus感染还显著激活了MAPK信号通路,其关键激酶JNK、ERK和p38的磷酸化水平(p-JNK,p-ERK,p-p38)在S. aureus感染后均极显著上调(P<0.001)。siRNA-GBP2+S. aureus组与S. aureus感染相比显著抑制了凋亡表型,即Cleaved-Caspase3和Cleaved-PARP1蛋白表达量显著降低(P<0.001),Bax/Bcl-2比值显著下降(P<0.001),流式细胞术检测的凋亡率也显著下降(P<0.001)。同时,GBP2敲减显著抑制了MAPK通路的活化,JNK、ERK和p38的磷酸化水平均极显著下调(P<0.001)。【结论】GBP2在S. aureus诱导巨噬细胞凋亡过程中扮演着重要的调控作用。其作用机制可能与调控MAPK信号通路的活化状态密切相关,这一发现不仅深化了对S. aureus致病机制和宿主-病原体相互作用机制的理解,揭示了GBP2在S. aureus感染免疫应答中的新功能。更重要的是,它提示靶向GBP2或其介导的MAPK凋亡信号通路,可能成为未来开发干预S. aureus感染、保护宿主免疫细胞、增强宿主清除S. aureus能力的新型防控策略。