山羊白细胞介素-18成熟蛋白的表达

doi:10.3864/j.issn.0578-1752.at-2005-6575

中国农业科学 ›› 2007, Vol. 40 ›› Issue (7): 1523-1527 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.at-2005-6575

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山羊白细胞介素-18成熟蛋白的表达

刘文强,赵宏坤

聊城大学农学院

收稿日期:2005-12-21 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-07-10 发布日期:2007-07-10

Expression and bioactivity of goat IL-18 mature protein

聊城大学农学院

Received:2005-12-21 Revised:1900-01-01 Published:2007-07-10 Online:2007-07-10

摘要/Abstract

摘要： 【目的】为了阐明重组蛋白的活性，置备具有生物学活性的重组白细胞介素18，应用于畜牧业生产。【方法】将含有山羊白细胞介素（gIL）-18基因的重组质粒pET-32a（+）在大肠杆菌BL21（DE3）中以1mmol•L-1 IPTG诱导4h或者更长时间进行表达。【结果】经SDS-PAGE试验检测到了gIL-18与pET载体融合表达的重组蛋白。以该重组蛋白与佐剂混合后，免疫小鼠制备多克隆血清。经Western-blotting 试验证实该重组蛋白具有免疫原性。经过包涵体变性、层析柱纯化和复性，证实该蛋白具有诱导MDBK细胞分泌IFN-γ和刺激PBMC增殖的生物学活性。这表明重组蛋白保留了天然蛋白大部分的生物学活性。另外，该重组蛋白还可以保护小鼠抵御PRV强毒的攻击。【结论】这为gIL-18作为免疫佐剂和免疫治疗剂的实际应用奠定了基础。

关键词: 山羊, 白细胞介素-18, 表达, 活性

Abstract: The gIL-18 gene was cloned into pET32a(+) vector. The recombinant plasmid pET-gIL-18 in E.Coli BL21(DE3) was introduced by 1mmol/L IPTG for 4h or more time for expression. The fusion protein of pET and gIL-18 was expressed. SDS-PAGE analysis suggests that the recombinant protein is about 38ku. Western-blotting indicated recombinant gIL-18 showed well reaction to its specific multi-antibodies. The recombinant protein can stimulate the proliferation of PBMCs and induce IFN-γproduction in MDBK cells after denature、renature and purified. The recombinat protein also can protect mice against the attack of PRV virulent strains. Which are helpful for the clinical use of this cytokines.

Key words: goat IL-18 expression bioactivity

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