中国农业科学 ›› 2024, Vol. 57 ›› Issue (4): 638-649.doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2024.04.002
李凯利1,2(), 魏云晓2, 种智力2, 孟志刚2, 王远2, 梁成真2, 陈全家1(
), 张锐2(
)
收稿日期:
2023-08-04
接受日期:
2023-09-26
出版日期:
2024-02-16
发布日期:
2024-02-20
通信作者:
联系方式:
李凯利,E-mail:835294355@qq.com。
基金资助:
LI KaiLi1,2(), WEI YunXiao2, CHONG ZhiLi2, MENG ZhiGang2, WANG Yuan2, LIANG ChengZhen2, CHEN QuanJia1(
), ZHANG Rui2(
)
Received:
2023-08-04
Accepted:
2023-09-26
Published:
2024-02-16
Online:
2024-02-20
摘要:
【目的】陆地棉(Gossypium hirsutum)的遗传转化技术存在转化周期长、转化效率低等问题,其中,愈伤组织增殖速度慢是导致棉花转化周期长的关键因素。探究陆地棉愈伤组织增殖的最适光照条件,为缩短棉花转化周期提供技术基础。【方法】以陆地棉受体品种WC的下胚轴为外植体诱导愈伤组织,设置红光、蓝光、红蓝光(1﹕1)和白光(CK)4种不同光照处理,研究不同光质下愈伤组织的增殖速度、形态特征,以及相关基因表达水平和相关酶活性的差异,解析光照对愈伤组织增殖的影响并获得最优光照条件。【结果】不同光质对诱导棉花外植体出愈和愈伤组织生长具有明显影响。在4种不同光照处理下,红蓝光相较其他光质具有更显著地促进外植体出愈和愈伤组织增殖的效果,表现为愈伤组织分化时间更短,7-15 d,即与其他处理存在明显表型差异,7 d愈伤组织鲜重红蓝光(0.39 g)>蓝光(0.34 g)>白光(0.24 g)>红光(0.23 g),15 d时,红蓝光(1.15 g)>蓝光(0.98 g)>白光(0.69 g)>红光(0.51 g),红蓝光照射下的愈伤组织鲜重是白光对照的1.65倍,比单一蓝光或红光照射下的愈伤组织鲜重增加16.5%或125.5%;与此相一致的是,红蓝光处理下,第二周的愈伤增殖率也最高,达14.67%,比红光处理(7.17%)增加1倍多。4种光质下,愈伤增殖及体胚再生相关基因的表达量,红蓝光处理均显示最高。此外,红蓝光处理下愈伤组织的过氧化氢酶(CAT)活性显著提高,活性氧(ROS)含量低于白光对照。【结论】不同光质条件下,棉花外植体的愈伤组织增殖速度不同,红蓝光(1﹕1)促进外植体出愈和愈伤增殖表现最优,其次为蓝光,再次为白光,单独的红光不利于棉花出愈和愈伤增殖。红蓝光(1﹕1)处理诱导光受体及其互作因子、愈伤增殖等相关基因的表达,增强愈伤组织内过氧化氢酶的活性,降低活性氧含量,促进细胞分裂,进而促进愈伤增殖。
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表1
用于RT-qPCR的引物序列"
基因Gene | 引物序列Sequence (5′-3′) |
---|---|
GhCRY1 (Gh_D05G286000) | CAGGAGGCAATGTTGGCAGTG |
GCTTTGATAGGGTCGGCATTCA | |
GhCRY2 (Gh_A02G046200) | AGACTTATGCTCGACGGCTGAA |
AGGTCTGCCATTGGATGAGGAG | |
GhPHYA (Gh_D11G331900) | GCGATGGATGCAGATGAGGCTA |
ATTCAAGTCGGAAGGCGGGTTT | |
GhPHYB (Gh_D10G217500) | CGAACCGATTCGACCGACAGTT |
ACCCACCAAATACCGCCCTTTC | |
GhPIF1 (Gh_A07G093600) | TCCTGTTCCCATTCCCGCTTTC |
ATGCTTCTCTGGGTTCGGTCAG | |
GhPIF1 (Gh_D07G243100) | CACCTGGCTCTTGTCAAACTCA |
CCAACACACCCTTCATCTTCCC | |
GhPIF3 (Gh_A11G310400) | TGTGCTTGCTGCTTCTGTTTGC |
GCTGCTCGGCTTCTCTTGAACC | |
GhPIF3 (Gh_D07G152900) | TCGCATCTGACACTGGCTGTT |
TGGCACACGAACAATCTGAAGG | |
GhTCE1 (Gh_D06G030700) | TGGGACACAGTTCCAACACAA |
TCATCACCAAACGGGCAGTA | |
GhRCD1 (Gh_A08G228700) | TTCACCAGCGTCATCGGCATAA |
CGGCAGCGAAGCACTTGATT | |
GhRCD1 (Gh_D08G189100) | GGTAGGAAGAGCAGTCGTAGCA |
CAGCCGATGGTGACCGTGAA | |
GhMYB-44 (Gh_D06G024900) | GGTGAGAACGTCGCATCAAGTG |
ACCCTCCCAGTCACATCAACCA | |
GhMYB-44 (Gh_A06G027000) | TTGCCTCCTCCTCCTTGTTTGT |
TCTTCCTGCTTATTGCCGTTGT | |
GhLEC2 (Gh_A09G089400) | GCCTGCAATTCCCATACAACCA |
GCACTACTTGTGTTGAAGCCCC | |
Actin | GAAGGCATTCCACCTGACCAAC |
CTTGACCTTCTTCTTCTTGTGCTTG |
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