中国农业科学 ›› 2001, Vol. 34 ›› Issue (5): 550-555 .

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牛类胚胎干细胞的分离与克隆

安立龙,杨奇,冯秀亮,杨春荣,雷安民,高志民,窦忠英,邱怀   

  1. 西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室
  • 出版日期:2001-05-20 发布日期:2001-05-20

  1. 西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室
  • Online:2001-05-20 Published:2001-05-20

摘要: 选用荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎 ,以 PMOL/ L EF细胞为饲养层 ,以 DMEM+ 15 ml/ 10 0 m l NBS+ 0 .1μm ol/L Na2 Se O3+ 0 .1mm ol/ Lβ-巯基乙醇 + 10 ng/ ml IGF+ 10 0 0 IU/ m l L IF为培养液 ,用消化法 ( ICM用 0 .2 5 g/ 10 0 ml胰蛋白酶 + 0 .0 4 g/ 10 0 ml EDTA) ,ES细胞集落用 ( 0 .12 5 g/ 10 0 ml胰蛋白酶 + 0 .0 2 g/ 10 0 m l EDTA)和机械剥离法离散ICM细胞集落和隆起明显的 ES细胞集落为细胞小块 ,获得了 9个传至 6代的牛类 ES细胞系和 2 2个传至 9代的小鼠类 ES细胞系。从形态特征、组织化学染色、核型分析和 ES细胞分化能力等方面对所分离与克隆的细胞进行鉴定 ,证明其具有 ES细胞的诸多特性

关键词: 牛, 小鼠, 胚胎干细胞, 内细胞团, 分离, 克隆

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