【目的】建立黄羽鸡肠多糖(polysaccharides from yellow-feathered chicken intestine,YFCI-P)高效提取工艺,解析关键组分结构特征,评价其体外抗凝血及抗血栓活性,为黄羽肉鸡副产物鸡肠的高值化开发利用提供理论依据。【方法】采用单因素试验结合响应面分析法(RSM)优化YFCI-P的酶解提取条件;利用绵羊血浆法测定酶解液的抗凝血效价。通过凝胶过滤柱层析分离纯化获得多糖组分YFCI-P1和YFCI-P2,检测其对活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶时间(thrombin time,TT)和凝血酶原时间(prothrombin time,PT)的影响以评价体外抗凝活性,并进行体外溶栓活性研究。采用高效凝胶渗透色谱(GPC/HPLC)测定YFCI-P1分子量,应用傅里叶变换红外光谱(FT-IR)和核磁共振(NMR)技术分析其官能团组成及糖苷键连接方式。【结果】确定最佳酶解提取条件为:温度55 ℃、酶底物比0.9%、时间3 h、氯化钠浓度3%、料液比1﹕1(g·mL-1)、pH 8.5,该条件下酶解液抗凝血效价达5.13 U·mL-1,经响应面模型验证,预测值与实测值吻合良好。获得两个多糖组分YFCI-P1和YFCI-P2,体外抗凝血活性研究表明,在1 000 μg·mL-1浓度下,YFCI-P显著延长APTT至485.7 s;YFCI-P1显著延长PT至600 s;YFCI-P2显著延长TT至367 s,表明三者分别通过内源与外源途径、外源与共同途径、内源与共同途径发挥抗凝作用。分子特性分析显示,YFCI-P1重均分子量(Mw)为10.2 kDa,结构中含有醛酸基、乙酰氨基及硫酸基团;其主链由葡萄糖醛酸(GlcA)与N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)通过β-1, 4和β-1, 3糖苷键交替连接构成重复二糖单元,具备典型糖胺聚糖特征。此外,YFCI-P、YFCI-P1和YFCI-P2还表现出促进纤溶酶原激活物(tPA)生成及体外溶栓活性,在1 000 μg·mL-1时血凝块溶解率分别为42.38%、36.91%和19.74%。【结论】建立了一套高效稳定的YFCI-P提取工艺,所优选的参数组合显示出良好的工业化应用潜力;YFCI-P1是一种具有糖胺聚糖特征结构的多糖,YFCI-P、YFCI-P1和YFCI-P2均具备体外抗凝及溶栓活性。