【背景】卵泡颗粒细胞(granulosa cells, GCs)的增殖是形成符合排卵条件的优势卵泡的关键发育步骤之一。MicroRNA (miRNA)是可通过影响下游基因表达来调节颗粒细胞功能的关键调控因子。课题组前期在蒙古马卵泡的全转录组测序结果发现,miR-362-3p在不同发情周期时间的表达量有显著差异,但是尚不清楚miR-362-3p对卵泡发育的调控机制。【目的】研究miR-362-3p是否通过BMPR2调控马卵泡GCs的增殖和类固醇激素合成情况,为丰富马卵泡发育的非编码RNA调控网络提供参考。【方法】采集蒙古马心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背腰最长肌、皮下脂肪、乳腺和卵巢共9个组织样本,采用实时荧光定量 PCR(reverse transcription-quantitative PCR, RT-qPCR)技术,构建 miR-362-3p在马的多组织表达谱。采用RT-qPCR、Western blot、CCK-8、EdU和ELISA等技术,研究miR-362-3p对马卵泡GCs增殖和类固醇激素合成的影响。利用 TargetScan、miRDB、miRWalk 和 ENCORI数据库,预测miR-362-3p的靶基因,结合课题组前期全转录组测序数据,确定目标靶基因骨形态发生蛋白受体2 型 (bone morphogenetic protein receptor type 2, BMPR2),采用RT-qPCR、Western blot等技术,研究过表达和抑制miR-362-3p对BMPR2 mRNA和蛋白表达的影响。构建BMPR2的野生型和突变型载体,通过双荧光素酶报告试验,验证 miR-362-3p与BMPR2的靶向结合关系。【结果】与脾脏、肌肉等组织相比,miR-362-3p在马的肝脏和卵巢组织中的表达水平最高。过表达miR-362-3p后,与对照组相比,增殖标志基因mRNA和蛋白的表达量显著降低,细胞活力显著下降,新生细胞数量显著减少,抑制miR-362-3p后,则结果相反。更重要的是,miR-362-3p还能显著影响类固醇激素合成相关基因mRNA的表达,进而抑制雌二醇(E2)并促进孕酮(P4)的合成与分泌。生物信息学预测结果显示miR-362-3p与BMPR2的3′-UTR区存在结合位点。在细胞增殖过程中,过表达miR-362-3p显著下调了BMPR2的mRNA和蛋白的表达量,抑制miR-362-3p则得到的结果相反。双荧光素酶报告试验结果证实miR-362-3p与BMPR2存在结合位点。【结论】miR-362-3p可以通过靶向结合BMPR2降低其表达水平进而抑制马卵泡GCs的增殖,同时影响E2和P4的合成与分泌,从而调控马卵泡生长发育。