【背景】骨骼肌组织和肌内脂肪组织发育直接影响牛肉品质,而成肌细胞和前体脂肪细胞增殖和分化对其生长发育起到关键作用。前期研究发现,叉头转录因子O1(forkhead box protein O1, FoxO1)分别在牛成肌细胞和前体脂肪细胞增殖和分化过程中起到转录调控作用,但在两种细胞中的共同调控机制尚不清楚。【目的】探究FoxO1在牛成肌细胞和前体脂肪细胞中共有的关键调控途径,为阐明FoxO1是影响牛肉品质的关键遗传调控因子提供一定理论基础。【方法】对干扰FoxO1并诱导分化4 d的牛成肌细胞和前体脂肪细胞进行转录组测序联合分析,筛选出FoxO1调控牛成肌细胞和前体脂肪细胞分化的共有显著富集的KEGG信号通路及显著差异表达基因。利用小干扰RNA(siRNA)来抑制细胞内FoxO1的表达;利用蛋白质印记法(Western blot,WB)检测关键信号通路标志蛋白的表达水平;利用EdU染色检测关键信号通路对牛成肌细胞和前体脂肪细胞相对增殖率的影响;利用流式细胞术分析关键信号通路对牛成肌细胞和前体脂肪细胞的细胞周期分布的影响;利用免疫荧光染色检测关键信号通路对牛成肌细胞肌管形成的影响,利用油红O/Bodipy染色检测关键信号通路对前体脂肪细胞脂滴生成能力的影响;通过双荧光素酶报告基因试验验证FoxO1与靶基因的相互作用。【结果】转录组联合分析共筛选到11条共有显著富集的KEGG信号通路和13个共有显著差异表达基因,其中TGF-β信号通路和TGFBI与肌生成和脂肪生成密切相关,且TGFBI是TGF-β信号通路的下游因子,受其直接靶向调控。WB检测结果显示,干扰FoxO1将显著提高牛成肌细胞和前体脂肪细胞中p-SMAD2/总SMAD2的水平,表明干扰FoxO1表达将激活牛成肌细胞和前体脂肪细胞的TGF-β信号通路,并进一步检测确定了牛成肌细胞和前体脂肪细胞中TGF-β信号通路激活剂和抑制剂的处理浓度为5 µmol·L-1。EdU检测结果显示,激活TGF-β信号通路将显著降低牛成肌细胞和前体脂肪细胞的相对增殖率(P < 0.01)。流式细胞周期检测结果显示,激活TGF-β信号通路将抑制牛成肌细胞和前体脂肪细胞G1/S期的转化过程。肌管染色和脂滴染色结果显示,激活TGF-β信号通路抑制了牛成肌细胞的肌管形成和牛前体脂肪细胞的脂滴生成;而抑制TGF-β信号通路则产生相反效应。双荧光素酶报告基因试验证实,FoxO1可以与TGFBI启动子的-509—-499 bp和-490—-480 bp区域相结合,并上调其转录活性。【结论】FoxO1可以通过TGF-β/SMAD-TGFBI途径来抑制牛成肌细胞和前体脂肪细胞的增殖和分化。