【目的】为满足人口增长和环境变化带来的粮食需求增长,需要不断培育高产、优质和多抗的品种。高效创制具有丰富遗传背景和遗传多样性的新种质,为培育兼顾多个优良性状的新品种提供参考。【方法】利用三明显性核不育材料简化杂交程序,选择多个地缘关系较远的优异亲本与之杂交,聚合多个优良性状。针对遗传基础窄、分子标记应用难度大等问题,通过S221先后与09598、鄂中5号、源丰占、云香软等材料连续杂交,在最后一次杂交后代中选择可育株,用系谱法结合耐热分析、米质分析及抗稻瘟病筛选等培育新品种。提取F10系列株系中的60个中选单株及4个亲本DNA,设计目标位点引物,通过PCR捕获目标DNA片段,并进行测序,最后进行目标位点的基因型分析。运用SLYm1R高密度水稻全基因组SNP芯片进行功能基因分析。【结果】基因型分析以碱基替代率的大小来分析其亲缘关系的远近或相似度。亲本材料鄂中5号、云香软与其他亲本的关系较远,09598与源丰占的关系较近;创新获得的3个株系群之间的碱基替代率分别为0.0099545(170531-170532)、0.0338213(170531-170533)和0.0371913(170532-170533),而在各个株系内部,碱基替代率均为0,表明3个株系群之间有差异,但各株系内的遗传没有差异,通过加代扩繁分别形成新的种质,分别命名为ZY531、ZY532和ZY533。功能基因分析结果显示,ZY532系列种质的功能基因分别来源于4个亲本,聚合了多个亲本的优异基因,如Os-MOT1;1来源于云香软,可减少钼积累等非生物胁迫;Bph3来源于09598和鄂中5号,可增强褐飞虱的抗性;OsGSK2来源于09598、源丰占和云香软,可使中胚轴长度增长适宜直播;Badh2来源于云香软,使稻米具有香味;多个抗稻瘟病基因来源于不同亲本,也可以聚合到创新资源中,使其获得较好的稻瘟病抗性。ZY532米质优、稻瘟病抗性好,耐热性强,配制的杂交组合耐热性达到3级。【结论】利用三明显性核不育材料可有效聚合多个优良基因,但同时造成的遗传背景复杂,会延长育种周期,结合高通量SNP标记检测,可快速筛选出稳定的株系和更多的类型,既拓宽了遗传基础又提高了育种效率,可高效创制兼顾多个优良性状的新种质。