中国农业科学 ›› 2011, Vol. 44 ›› Issue (2): 299-306 .
成团泛菌对玉米自交系PS056致病性基因yhfK的克隆
曹慧英,张力群,朱振东,王晓鸣,李洪杰,任争光
Cloning of a Pathogenicity Gene yhfK from Pantoea agglomerans on Maize Inbred Line PS056
CAO Hui-ying, ZHANG Li-qun, ZHU Zhen-dong, WANG Xiao-ming, LI Hong-jie, REN Zheng-guang
摘要:
【目的】通过克隆和鉴定成团泛菌(Pantoea agglomerans)的致病相关基因,阐明该种土壤习居细菌在玉米自交系PS056上引起细菌性干茎腐病的原因。【方法】利用转座子Tn5的随机插入突变特点,构建致病性菌株P. agglomerans XJ1突变体库;经对Tn5插入位点的侧翼扩增,确认突变体PA121的致病力相关基因;通过基因互补试验,证明yhfK与致病力的关系。【结果】通过对突变菌株的接种筛选,获得11个致病力丧失的突变体。Southern杂交和PCR扩增结果表明,Tn5在突变体PA121中为单拷贝插入,插入位点为细菌编码内膜蛋白的yhfK(Tn5 插入在yhfK的1 082 bp处)。将yhfK克隆到质粒pBBR1MCS上,并导入突变体PA121中进行互补,生物测定结果显示转化子完全恢复了正常的细菌生理功能,并能够在玉米自交系PS056上恢复致病力。RT-PCR试验证明,yhfK调控hrpA的转录。【结论】 成团泛菌XJ1中yhfK是调控其对植物致病性的基因之一,具有在玉米自交系PS056上引起细菌性干茎腐病的功能。