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方瀚墨,胡璋健,马巧梅,丁淑婷,王萍,王安然,师恺
FANG HanMo, HU ZhangJian, MA QiaoMei, DING ShuTing, WANG Ping, WANG AnRan, SHI Kai
摘要: 【背景】在全球气候变化的背景下,大气CO2浓度的升高会影响植物病害的发生,进而影响农业生产。β型碳酸酐酶(β-carbonic anhydrase,βCA)是植物CO2感应和浓缩系统中的重要组成元件,参与拟南芥和烟草的植物免疫过程,但在番茄(Solanum lycopersicum)等园艺作物中的研究较少。【目的】通过探究番茄βCA3在抵御植物病害中的作用及机制,为番茄生产中的抗性调控提供科学依据。【方法】以拟南芥βCAs氨基酸系列为参考序列,在番茄Sol genomics network 数据库中鉴定到4个番茄βCA基因。进一步以野生型(wild-type,WT)番茄 ‘Ailsa Craig’(AC)为材料接种丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000,Pst DC3000),利用qRT-PCR技术测定叶片中βCA的表达量,筛选出受Pst DC3000诱导表达的基因βCA3。在此基础上,以AC为背景,利用农杆菌介导法进行番茄遗传转化,构建βCA3稳定过表达植株(OE-βCA3)。通过观察OE-βCA3植株接种Pst DC3000后的抗性表型,明确βCA3在番茄抵御Pst DC3000过程中的作用。为了研究βCA3调控植物抗病性的内在机制,比较WT和OE-βCA3植株接种Pst DC3000与对照条件下转录组的变化,并利用KEGG数据库对差异基因进行功能分析,推测糖代谢与βCA3介导的免疫反应有关。最后,通过测定WT和OE-βCA3植株糖代谢及其信号途径相关基因表达量以及葡萄糖、果糖和蔗糖含量,对转录组结果进行验证及分析。【结果】OE-βCA3植株增强了对Pst DC3000的抗性,接种Pst DC3000后,叶片中的细菌生长量、病斑数以及死细胞积累量明显减少。转录组测序结果显示,正常条件下,OE-βCA3植株转录谱没有发生明显变化;接种Pst DC3000后,在WT和OE-βCA3植株中检测到的2 100个Pst DC3000诱导基因中,有63.3%的基因在OE-βCA3植株中表达量更高。KEGG分析结果显示,依赖于βCA3过表达的Pst DC3000诱导基因富集在糖代谢相关路径中,包括淀粉和蔗糖代谢,内质网中的蛋白质加工(糖基化),氨基糖和核苷酸糖代谢,真核生物中的核糖体生物合成以及光合作用等路径。糖代谢与糖信号密不可分,qRT-PCR及糖含量测定结果显示,接种Pst DC3000后,OE-βCA3植株叶片中糖代谢及其信号传导途径相关基因表达量与葡萄糖、果糖和蔗糖的含量较WT更高。【结论】番茄βCA3的过表达增强了植株对Pst DC3000的抗性,该过程可能与糖代谢及其信号通路在植物免疫中的作用有关。