中国农业科学 ›› 2008, Vol. 41 ›› Issue (11): 3893-3897 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.11.061

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能产生多角体的可线性化杆状病毒的构建

于 峰,朱姗颖,李 兵,沈卫德,王文兵

  

  1. 江苏大学生命科学研究院

  • 收稿日期:2007-05-18 修回日期:2007-07-17 出版日期:2008-11-10 发布日期:2008-11-10
  • 通讯作者: 王文兵

  

  1. 江苏大学生命科学研究院

  • Received:2007-05-18 Revised:2007-07-17 Online:2008-11-10 Published:2008-11-10

摘要:

【目的】改进用于同源重组研究的制备杆状病毒DNA的方法。【方法】采用PCR方法从BmNPV中扩增出多角体基因,并在其两端引入Bsu36 I酶切位点。将此片段克隆入转移载体pBacPAK8中,与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞,获得重组病毒。该病毒能形成多角体,便于纯化,同时可以被 Bsu36 I酶切。该重组病毒的多角体纯化后被裂解,并提取病毒DNA。病毒DNA经Bsu36 I酶切后,与含gfp基因的转移质粒共转染家蚕BmN细胞,在荧光显微镜下观察重组病毒的转染效率。【结果】BmNPV多角体基因克隆入转移载体pBacPAK8中后,与线性化的AcPak6及BmPak6 DNA共转染sf细胞及BmN细胞,均能产生大量的多角体。获得的重组病毒DNA经酶切后,进一步与含gfp基因的转移质粒共转染的实验表明,这种改造后的重组病毒仍具有较高的转染重组率。【结论】本实验成功地对用于同源重组的杆状病毒DNA进行了改进,简化了病毒DNA的纯化方法,并且重组效率较高。

关键词: 昆虫-杆状病毒, 表达, BmNPV, DNA提取