摘要：

【目的】围食膜（peritrophic membrane，PM）是衬托于昆虫中肠内的一种无脊椎动物特有的几丁质—蛋白复合结构，它能够促进食物消化，保护消化道免受微生物入侵。昆虫肠粘蛋白（IIM）是其重要组分之一。因此，作为中肠防御系统的PM已成为害虫生物防治的新靶标。分离和鉴定甜菜夜蛾肠粘蛋白基因cDNA。【方法】以甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）中肠为材料，依据stratagene公司试剂盒方法，构建甜菜夜蛾中肠cDNA表达文库。依据现代免疫学原理，利用粉纹夜蛾肠粘蛋白特异性多克隆抗体（anti-IIM antiserum）筛选该文库。【结果】cDNA表达文库滴度为8.51×106pfu/ml，重组率为99.97%。筛选文库得到一个编码甜菜夜蛾肠粘蛋白的cDNA克隆SeIIM-8。核酸序列分析显示，该cDNA长为2 234 bp，在polyA末端上游24 bp处有一个多聚腺苷酸信号序列AAATTA。最长读码框（ORF）编码714个氨基酸，与粘虫肠粘蛋白（Mamestra configurata intestinal mucin）序列相似性为42%。结构域分析表明，它具有5个几丁质结合功能域；一个富含苏氨酸类粘蛋白结构域，重复序列为TTTQAPTTT，高度O-联糖基化；一个天冬氨酸富集区，序列DDDKPGCNGNCPE重复达12次，该区域在已知的昆虫肠粘蛋白中属首次发现。与已知肠粘蛋白比较，推测其5′端还应包括信号肽序列和几丁质结合功能域的未知序列。SeIIM-8基因在GenBank登录号为EU047712。【结论】从本研究构建的高质量甜菜夜蛾中肠cDNA表达文库中筛选得到一个新的围食膜蛋白基因SeIIM-8。

关键词: 甜菜夜蛾, 中肠, cDNA表达文库, 昆虫肠粘蛋白, SeIIM-8