中国农业科学 ›› 2008, Vol. 41 ›› Issue (10): 3249-3255 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.043

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TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及HSP70蛋白表达的影响

  

  1. 南京农业大学动物科技学院
  • 收稿日期:2007-08-27 修回日期:2007-10-07 出版日期:2008-10-10 发布日期:2008-10-10
  • 通讯作者: 王根林

  1. 南京农业大学动物科技学院
  • Received:2007-08-27 Revised:2007-10-07 Online:2008-10-10 Published:2008-10-10

摘要: 【目的】探讨TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡和HSP70蛋白表达的影响。【方法】TGF-β1作用乳腺上皮细胞不同时间,收集细胞及培养液,应用MTT检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡率、比色法检测LDH活性、琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性、Western bolt 技术分析HSP70蛋白的表达量。【结果】1、5、10 ng•ml-1的TGF-β1均能抑制乳腺上皮细胞的增殖,且随浓度增加抑制作用加大,呈现剂量依赖性,其中10 ng•ml-1 TGF-β1组与对照组差异显著(P<0.05);10 ng•ml-1 TGF-β1作用于乳腺上皮细胞, 随着作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐升高,其中6、12和24 h与对照组相比差异极显著(P<0.01);LDH活力随作用时间延长而升高,12、24 h与对照组差异极显著(P<0.01);DNA完整性随 TGF-β1作用时间的延长发生不同程度降解;TGF-β1作用2~6 h细胞大量表达HSP70,6 h达到高峰,而后下降,2~12 h的表达量均极显著高于对照组(P<0.01)。【结论】TGF-β1可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖,具有浓度依赖性。10 ng•ml-1 TGF-β1可以显著增加细胞凋亡率,提高细胞培养液中LDH活力,使细胞DNA发生不同程度的降解,同时HSP70蛋白随TGF-β1作用时间发生显著的表达变化。本试验结果表明,TGF-β1可以以促进上皮细胞凋亡的方式,促进奶牛乳腺发生退化。

关键词: TGF-β1, 乳腺上皮细胞, 细胞凋亡, HSP70