中国农业科学 ›› 2003, Vol. 36 ›› Issue (5): 561-566 .

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库尔勒香梨脉黄病毒RT-PCR检测技术研究

牛建新,刘连科,王小兵,覃伟铭   

  1. 石河子大学新疆作物高产研究中心
  • 出版日期:2003-05-20 发布日期:2003-05-20

  1. 石河子大学新疆作物高产研究中心
  • Online:2003-05-20 Published:2003-05-20

摘要: 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对总RNA提取方法进行了研究 ,从中筛选出了适合库尔勒香梨总RNA的提取方法。结果表明 ,要获得良好的RT PCR扩增 ,RT体系中dNTPs浓度、互补引物、AMV、模板的浓度要分别达到 0 .1mmol·L-1、0 .2 μmol·L-1、0 .0 5U·μl-1、0 .0 1μg·μl-1以上。此外 ,使用RNasin能有效抑制RT体系中RNase对病毒RNA的降解作用 ,可使RT过程顺利进行 ;PCR体系中dNTPs浓度至少要达到 0 .1mmol·L-1,0 .2~ 0 .3mmol·L-1可以获得最佳的扩增效果 ;TaqE浓度要达到 0 .0 15U·μl-1以上 ;引物浓度适宜范围 0 .3~ 0 .7μmol·L-1;Mg2 + 要达到 1.2 6mmol·L-1以上。

关键词: 库尔勒香梨, 梨脉黄病毒, RT-PCR

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