中国农业科学 ›› 2010, Vol. 43 ›› Issue (7): 1448-1457 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.07.016
刘金仙,阙友雄,郭晋隆,许莉萍,徐景升,陈如凯
LIU Jin-xian, QUE You-xiong, GUO Jin-long, XU Li-ping, XU Jing-sheng, CHEN Ru-kai
摘要:
【目的】克隆甘蔗(Saccharum officinarum)S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase, SAMDC)基因,并进行序列特征、原核表达和不同逆境胁迫下表达特性分析。【方法】通过对甘蔗茎全长cDNA文库测序和分析,获得SAMDC基因cDNA全长,命名为Sc-SAMDC,并进行序列分析。随后将编码S-腺苷蛋氨酸脱羧酶的cDNA片段克隆到原核表达载体pET29a(+)中,构建融合表达质粒,转化至Esherichia coli BL21(DE3)中进行表达。最后利用定量PCR技术分析甘蔗幼苗中该基因在不同外源胁迫下的表达特性。【结果】序列分析显示,甘蔗Sc-SAMDC基因(GenBank Accession number: GQ246459)cDNA全长1 968 bp,存在3个读码框(袖珍读码框tORF、上游读码框uORF和主读码框mORF),mORF长1 200 bp,编码399个氨基酸的SAMDC酶原,预测分子量为43.6 kD,该酶原含有两个高度保守的功能结构域(酶原剪切位点和PEST结构域)。原核表达产物经SDS-PAGE表明,Sc-SAMDC以融合蛋白形式表达,相对分子量约为50 kD。定量PCR分析表明,Sc-SAMDC基因在聚乙二醇(PEG)、NaCl、水杨酸(SA)和H2O2外源胁迫下表达特性不同,受PEG和NaCl的诱导,受SA和H2O2的抑制。【结论】本研究成功地克隆了Sc-SAMDC基因并在原核生物中进行了表达研究,分析了该基因的表达特性,为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。