中国农业科学 ›› 2025, Vol. 58 ›› Issue (18): 3744-3765.doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2025.18.012
收稿日期:
2025-05-05
接受日期:
2025-06-24
出版日期:
2025-09-18
发布日期:
2025-09-18
通信作者:
联系方式:
林彦,E-mail:17590518936@163.com。
基金资助:
LIN Yan(), ZHENG LingLing, TIAN Jia, WEN Yue(
), CHEN Chen, WANG Lei
Received:
2025-05-05
Accepted:
2025-06-24
Published:
2025-09-18
Online:
2025-09-18
摘要:
【目的】库尔勒香梨萼片脱落有助于其果实品质提升。通过多组学联合分析,探究库尔勒香梨萼片脱落的分子机制,明确萼片脱落过程中的差异表达基因和蛋白,以及参与的代谢通路和信号传导途径,丰富库尔勒香梨萼片脱落机理,为进一步研究库尔勒香梨萼片脱落机制,以及生产上利用生理、分子等技术调控库尔勒香梨萼片脱落提供理论依据。【方法】以库尔勒香梨为研究材料,选取萼片离区形成关键期脱萼果离区和宿萼果离区对应部位为研究对象,进行转录组和蛋白质组的测序与联合分析,利用多种生物信息学工具筛选差异表达基因与蛋白,重点分析与脱落相关的基因与蛋白,明确其参与的代谢通路和信号传导途径,最后通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证差异表达基因。【结果】通过转录组分析共获得393个差异表达基因,主要富集在细胞壁生物合成、植物型细胞壁组织或生物合成、植物型细胞壁生物合成、植物型次生细胞壁生物合成、苯丙烷类代谢过程等,以及代谢途径、次生代谢物的生物合成及戊糖和葡糖醛酸相互转化等通路,表明差异表达基因大多参与细胞壁的代谢。通过蛋白质组分析共获得256个差异表达蛋白,联合分析结果显示,差异表达基因和蛋白主要富集在苯丙烷生物合成、各种植物次生代谢产物的生物合成、植物激素信号转导、戊糖和葡糖醛酸相互转化等通路,筛选出与植物激素(如乙烯响应转录因子、吲哚-3-乙酸O-甲基转移酶基因)和细胞壁相关基因(如果胶裂解酶基因、果胶酯酶基因、多聚半乳糖醛酸酶基因、过氧化物酶基因),它们在库尔勒香梨萼片脱落过程中发挥着重要作用。此外,对所筛选的10个差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证,其表达趋势与测序结果一致。【结论】从基因转录与蛋白质表达层面初步确定了库尔勒香梨萼片脱落的调控机制,筛选出植物激素和细胞壁相关的基因与蛋白,明确了库尔勒香梨萼片脱落过程主要涉及苯丙烷生物合成、植物激素信号转导、戊糖和葡糖醛酸相互转化通路。
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表1
qRT-PCR特异性引物"
基因编号 Gene ID | 正向引物 Forward primer (5′-3′) | 反向引物 Reverse primer (5′-3′) |
---|---|---|
Psin03G014400 | GGACAAAAGATCAGCAGCCTAC | ACCTGAGAAAGCTTGCCAAG |
Psin05G015600 | TGCAGCTGAAATTCGTGACC | CCTCAGCTGTCTCAAATGTGC |
Psin01G012900 | TCTCTTCTTCGGCTCCACTTC | AAATCCCCGTGCAGAATTCC |
Psin03G003950 | ACGACAACCTTGCACCTTTG | TTTGATCACTGTGGAGGAGACC |
Psin12G002990 | ACAGCCTAACAGCAAACCAG | TCAGGCCAACAGCAGAAAAC |
Psin01G002910 | TGCTTGATGACACACCAACC | AAGAAACAACTCCCGGACAC |
Psin01G014890 | ACTTTCGACAATGGCGGTTC | GCTCAATGACTCCTTTGGTTCC |
Psin10G013480 | AACAATTTGGGGGTCAAGGG | TCAGTGCAAGTAACGTCGTC |
Psin03G018850 | GTTCCATGTATCCTTGCAACGG | AACAACTTGTCGGCTGAACC |
Psin02G000220 | GTTCCATGTATCCTTGCAACGG | AACAACTTGTCGGCTGAACC |
表2
样品测序和数据比对统计"
样品 Sample | 原始序列数 Raw reads | 有效序列数 Valid reads | 有效碱基数 Valid bases | 基因组比对序列数 Reads mapped | Q20 (%) | Q30 (%) |
---|---|---|---|---|---|---|
T-L-1 | 53100666 | 51652274 | 7.75 | 47429147(91.82%) | 97.70 | 93.25 |
T-L-2 | 49583548 | 48231834 | 7.23 | 44281991(91.81%) | 97.62 | 93.07 |
T-L-3 | 50550552 | 49112684 | 7.37 | 45132315(91.90%) | 97.58 | 92.97 |
S-LD-1 | 59022886 | 57275596 | 8.59 | 52859617(92.29%) | 97.76 | 93.44 |
S-LD-2 | 64312592 | 62558674 | 9.38 | 57688769(92.22%) | 97.70 | 93.28 |
S-LD-3 | 52419448 | 51073616 | 7.66 | 47107851(92.24%) | 97.77 | 93.43 |
表3
差异表达基因前20个GO功能富集分析"
分类 Category | GO编号 GO number | 条目 Term | 差异基因数量 DEGs number | 校正后P值 Corrected P-value |
---|---|---|---|---|
生物过程 Biological process | GO:0009834 | 植物型次生细胞壁生物合成 Plant-type secondary cell wall biogenesis | 36 | 2.06×10-14 |
GO:0042546 | 细胞壁生物合成 Cell wall biogenesis | 48 | 5.28×10-37 | |
GO:0071669 | 植物型细胞壁组织或生物合成 Plant-type cell wall organization or biogenesis | 46 | 9.20×10-31 | |
GO:0009832 | 植物型细胞壁生物合成 Plant-type cell wall biogenesis | 38 | 1.17×10-30 | |
GO:0045492 | 木聚糖生物合成过程 Xylan biosynthetic process | 20 | 8.92×10-26 | |
GO:0044036 | 细胞壁大分子代谢过程 Cell wall macromolecule metabolic process | 32 | 4.63×10-24 | |
GO:0010383 | 细胞壁多糖代谢过程 Cell wall polysaccharide metabolic process | 28 | 3.96×10-21 | |
GO:0009698 | 苯丙烷类代谢过程 Phenylpropanoid metabolic process | 35 | 3.24×10-22 | |
GO:0070589 | 细胞组分大分子生物合成过程 Cellular component macromolecule biosynthetic process | 23 | 9.34×10-22 | |
GO:0044038 | 细胞壁大分子生物合成过程 Cell wall macromolecule biosynthetic process | 23 | 9.34×10-22 | |
GO:0010383 | 细胞壁多糖代谢过程 Cell wall polysaccharide metabolic process | 28 | 3.96×10-21 | |
GO:0045491 | 木聚糖代谢过程 Xylan metabolic process | 22 | 4.68×10-21 | |
GO:0010410 | 半纤维素代谢过程 Hemicellulose metabolic process | 24 | 3.22×10-20 | |
GO:0033692 | 细胞多糖生物合成过程 Cellular polysaccharide biosynthetic process | 30 | 3.51×10-19 | |
GO:0070592 | 多糖生物合成过程 Polysaccharide biosynthetic process | 23 | 1.63×10-22 | |
GO:0046274 | 木质素分解代谢过程 Lignin catabolic process | 15 | 9.74×10-18 | |
GO:0046271 | 苯丙烷类分解代谢过程 Phenylpropanoid catabolic process | 15 | 9.74×10-18 | |
分子功能 Molecular function | GO:0016682 | 氧化还原酶活性,以二酚及相关物质为供体、氧为受体 Oxidoreductase activity, acting on diphenols and related substances as donors, oxygen as acceptor | 18 | 2.21×10-18 |
GO:0052716 | 对苯二酚﹕氧氧化还原酶活性 Hydroquinone﹕oxygen oxidoreductase activity | 15 | 3.05×10-18 | |
GO:0016679 | 氧化还原酶活性,以二酚及相关物质为供体 Oxidoreductase activity, acting on diphenols and related substances as donors | 18 | 1.46×10-17 |
表4
差异基因显著富集的KEGG通路"
分类 Category | 通路编号 Path number | 途径 Pathway | 差异基因数量 DEGs number | 校正后P值 Corrected P-value |
---|---|---|---|---|
代谢 Metabolism | ko01100 | 代谢途径 Metabolic pathways | 64 | 5.82×10-7 |
ko00040 | 戊糖和葡萄糖醛酸相互转化 Pentose and glucuronate interconversions | 12 | 7.32×10-7 | |
ko01110 | 次生代谢物的生物合成 Biosynthesis of secondary metabolites | 34 | 1.39×10-3 | |
ko00909 | 倍半萜和三萜生物合成 Sesquiterpenoid and triterpenoid biosynthesis | 4 | 1.92×10-3 | |
ko00073 | 角质、木栓质和蜡的生物合成 Cutin, suberine and wax biosynthesis | 4 | 2.28×10-3 | |
ko00908 | 玉米素生物合成 Zeatin biosynthesis | 3 | 2.51×10-3 | |
ko00520 | 氨基糖和核苷酸糖代谢 Amino sugar and nucleotide sugar metabolism | 7 | 2.91×10-3 | |
ko00940 | 苯丙烷生物合成 Phenylpropanoid biosynthesis | 8 | 1.16×10-2 |
表5
差异表达蛋白前20个GO功能富集分析"
分类 Category | GO编号 GO number | 条目 Term | 差异蛋白数量 DEPs number | 校正后P值 Corrected P-value |
---|---|---|---|---|
生物过程 Biological process | GO:0042744 | 过氧化氢分解代谢过程 Hydrogen peroxide catabolic process | 7 | 1.17×10-5 |
GO:0006979 | 对氧化应激的响应 Response to oxidative stress | 7 | 8.96×10-5 | |
GO:0046274 | 木质素分解代谢过程 Lignin catabolic process | 4 | 9.21×10-5 | |
GO:0009627 | 系统获得性抗性 Systemic acquired resistance | 3 | 5.19×10-4 | |
GO:0009734 | 生长素激活的信号通路 Auxin-activated signaling pathway | 5 | 1.80×10-3 | |
GO:0051726 | 细胞周期调控 Regulation of cell cycle | 2 | 4.49×10-3 | |
GO:0006865 | 氨基酸运输 Amino acid transport | 3 | 6.44×10-3 | |
GO:0030036 | 肌动蛋白细胞骨架组织 Actin cytoskeleton organization | 2 | 6.64×10-3 | |
GO:0045492 | 木聚糖生物合成过程 Xylan biosynthetic process | 2 | 9.16×10-3 | |
GO:0000139 | 高尔基体膜 Golgi membrane | 7 | 1.02×10-2 | |
细胞组分 Cellular component | GO:0004601 | 过氧化物酶活性 Peroxidase activity | 7 | 2.83×10-5 |
GO:0005576 | 细胞外区域 Extracellular region | 12 | 3.23×10-5 | |
GO:0048046 | 质外体 Apoplast | 6 | 2.96×10-4 | |
GO:0005667 | 转录调节复合物 Transcription regulator complex | 2 | 1.21×10-3 | |
分子功能 Molecular function | GO:0020037 | 血红素结合 Heme binding | 12 | 4.82×10-5 |
GO:0052716 | 对苯二酚﹕氧氧化还原酶活性 Hydroquinone﹕oxygen oxidoreductase activity | 4 | 7.60×10-5 | |
GO:0015293 | 同向转运体活性 Symporter activity | 4 | 3.15×10-3 | |
GO:0008194 | UDP-糖基转移酶活性 UDP-glycosyltransferase activity | 6 | 4.10×10-3 | |
GO:0071702 | 有机物质运输 Organic substance transport | 2 | 4.49×10-3 | |
GO:0005504 | 脂肪酸结合 Fatty acid binding | 2 | 8.30×10-3 |
表6
差异蛋白显著富集的KEGG通路"
分类 Category | 通路编号 Path number | 途径 Pathway | 差异蛋白数量 DEPs number | 校正后P值 Corrected P-value |
---|---|---|---|---|
代谢 Metabolism | ko00940 | 苯丙烷生物合成 Phenylpropanoid biosynthesis | 9 | 1.44×10-4 |
ko00999 | 多种植物次生代谢物的生物合成 Biosynthesis of various plant secondary metabolites | 5 | 8.52×10-3 | |
ko00561 | 甘油酯代谢 Glycerolipid metabolism | 5 | 4.34×10-2 | |
ko00908 | 玉米素生物合成 Zeatin biosynthesis | 1 | 1.86×10-1 | |
基因信息处理 Genetic information processing | ko03410 | 碱基切除修复 Base excision repair | 3 | 4.96×10-2 |
ko03030 | DNA复制 DNA replication | 4 | 1.54×10-2 |
表7
差异表达蛋白与差异表达基因的功能关联分析"
分类 Category | 通路编号 Path number | 途径 Pathway | 差异蛋白数量 DEPs number | 差异基因数量 DEGs number |
---|---|---|---|---|
代谢 Metabolism | ko04075 | 植物激素信号转导 Plant hormone signal transduction | 4 | 9 |
ko00940 | 苯丙烷生物合成 Phenylpropanoid biosynthesis | 9 | 8 | |
ko00040 | 戊糖和葡糖醛酸相互转化 Pentose and glucuronate interconversions | 2 | 12 | |
ko00999 | 多种植物次生代谢产物的生物合成 Biosynthesis of various plant secondary metabolites | 5 | 3 | |
ko00908 | 玉米素生物合成 Zeatin biosynthesis | 1 | 7 |
表8
库尔勒香梨萼片脱落相关的差异表达基因和差异表达蛋白的关联分析"
通路名称 Path name | 蛋白质编号 Protein ID | 蛋白质名称 Protein name | 基因编号 Gene ID | 基因名称 Gene name | 上/下调 Up/Down |
---|---|---|---|---|---|
植物激素信号转导 Plant hormone signal transduction | Psin05G015600 | 乙烯响应转录因子 Ethylene-responsive transcription factor | 上调Up | ||
-- | Psin03G014400 | 吲哚-3-乙酸O-甲基转移酶Indole-3-acetate O-methyltransferase | 上调Up | ||
苯丙烷生物合成 Phenylpropane biosynthesis | GWHPDTVS001290-protein | 过氧化物酶 Peroxidase | Psin01G012900 | 过氧化物酶 Peroxidase | 上调Up |
GWHPDTVS022442-protein | 过氧化物酶 Peroxidase | Psin03G003950 | 过氧化物酶 Peroxidase | 上调Up | |
GWHPDTVS004740-protein | 过氧化物酶 Peroxidase | Psin12G002990 | 过氧化物酶 Peroxidase | 上调Up | |
Psin01G002910 | 过氧化物酶 Peroxidase | 上调Up | |||
戊糖和葡糖醛酸 互转化 Pentose and glucuronate interconversions | Psin01G014890 | 果胶酯酶 Pectinesterase | 上调Up | ||
GWHPDTVS009649-protein | 果胶裂解酶 Pectate lyase | Psin10G013480 | 果胶裂解酶 Pectate lyase | 上调Up | |
GWHPDTVS006230-protein | 多聚半乳糖醛酸酶 Polygalacturonase | Psin02G000220 | 多聚半乳糖醛酸酶 Polygalacturonase | 上调Up | |
Psin03G018850 | 多聚半乳糖醛酸酶 Polygalacturonase | 上调Up |
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