中国农业科学 ›› 2003, Vol. 36 ›› Issue (10): 1228-1232 .

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鸡传染性支气管炎病毒腺胃分离株的分子鉴定

程丽琴,周继勇,JohnDikki,沈行燕,陈吉刚,张德勇   

  1. 浙江大学动物预防医学研究所
  • 出版日期:2003-10-20 发布日期:2003-10-20

  1. 浙江大学动物预防医学研究所
  • Online:2003-10-20 Published:2003-10-20

摘要: 从发病鸡场中收集的腺胃肿大病料(编号为2/97、3/97和1/98),经匀浆和无菌处理后在SPF鸡胚中传代、分离和鉴定。结果显示,接种病料培养的鸡胚可干扰新城疫病毒的复制;这些分离毒株可与阳性标准参考株IBV抗血清反应,但表现出较低的中和反应能力。在理化和血凝特性等鉴定的基础上,参照已发表的IBV Beaudette毒株S1基因序列,设计并合成1对含有EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的特异性引物,利用RT-PCR技术扩增到分离毒株3/97、2/97、1/98长度为1.93kb的cDNA片段,并将其cDNA片段插入到克隆载体pBlueScript-SK(+)中,进行核苷酸序列的测定,确证所扩增和克隆的cDNA片段由1930个碱基组成,并编码1条由620个氨基酸组成的多肽。与GenBank中其它IBV S1基因序列进行比较,发现3/97、2/97和1/98毒株与所比较的IBV毒株核苷酸的一致性为73.6%~99.7%,氨基酸的一致性为78.4%~99.7%。

关键词: 鸡, 传染性支气管炎病毒, RT-PCR, SI基因, 克隆

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