有齿食道口线虫ITS及5.8S DNA片段的PCR扩增、克隆及序列分析

doi:10.3864/j.issn.0578-1752.as-2003-2063

中国农业科学 ›› 2005, Vol. 38 ›› Issue (03): 639-642 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.as-2003-2063

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有齿食道口线虫ITS及5.8S DNA片段的PCR扩增、克隆及序列分析

林瑞庆,陈丽莎,朱兴全,翁亚彪,吴绍强

华南农业大学兽医学院

收稿日期:2003-12-25 修回日期:2004-10-19 出版日期:2005-03-10 发布日期:2005-03-10

PCR Amplification, Cloning and Sequence Analysis of the ITS and 5.8S rDNA of Oesophagostomum Isolates

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华南农业大学兽医学院

Received:2003-12-25 Revised:2004-10-19 Published:2005-03-10 Online:2005-03-10

摘要/Abstract

摘要： 运用PCR方法以保守引物NC5及NC2扩增了从广东阳江地区猪体分离的食道口线虫rDNA 的内转录间隔区（ITS）及5.8S序列。将PCR扩增出的片段纯化后克隆至pGEM-T Easy载体，用PCR技术及酶切鉴定阳性菌落，对阳性菌落质粒DNA进行测序。结果表明，扩增的片段大小为828 bp，包含部分的18S、28S及全部的ITS-1（362 bp）、5.8S(153 bp)及ITS-2（217 bp）序列。序列比较表明，该食道口线虫为有齿食道口线虫。本研究在国际上首次报道了中国猪有齿食道口线虫的ITS及5.8S序列，为食道口线虫的分子生物学的进一步研究奠定了基础。

关键词: 食道口线虫, ITS, 5.8S, PCR, 克隆, 序列分析

Abstract: The internal transcribed spacer (ITS) and 5.8S rDNA of Oesophagostomum spp isolated from Guangdong Province was amplified by PCR using a pair of conserved primers and the amplicons were cloned into pGEM-T Easy vector. The inserts were successfully sequenced, and the results revealed that the inserts were 828 bp in length and consisted of partial 18S, 28S, and complete ITS-1, 5.8S and ITS-2 DNA sequences. The Oesophagostomum isolates were identified as O.dentatum based on ITS-2 sequence. It was the first time that the complete sequence of ITS-1 and 5.8S rDNA of Oesophagostomum dentatum was reported. The results of the present study have laid a foundation for further studies of Oesophagostomum.

Key words: Oesophagostomum, ITS, 5.8S, PCR, Cloning, Sequence analysis

林瑞庆,陈丽莎,朱兴全,翁亚彪,吴绍强. 有齿食道口线虫ITS及5.8S DNA片段的PCR扩增、克隆及序列分析[J]. 中国农业科学, 2005, 38(03): 639-642 .

,,,,. PCR Amplification, Cloning and Sequence Analysis of the ITS and 5.8S rDNA of Oesophagostomum Isolates[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2005, 38(03): 639-642 .

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有齿食道口线虫ITS及5.8S DNA片段的PCR扩增、克隆及序列分析

PCR Amplification, Cloning and Sequence Analysis of the ITS and 5.8S rDNA of Oesophagostomum Isolates

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