中国农业科学 ›› 2008, Vol. 41 ›› Issue (8): 2332-2338 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.016

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川楝素半抗原设计及其抗体制备

  

  1. 西北农林科技大学无公害农药研究服务中心
  • 收稿日期:2007-07-30 修回日期:2007-08-30 出版日期:2008-08-10 发布日期:2008-08-10
  • 通讯作者: 张 兴

  1. 西北农林科技大学无公害农药研究服务中心
  • Received:2007-07-30 Revised:2007-08-30 Online:2008-08-10 Published:2008-08-10

摘要: 【目的】获得抗川楝素的高灵敏度,高特异性多克隆抗体,建立川楝素的间接竞争酶免疫测定(IC-ELISA)方法。【方法】采用酯化反应合成川楝素的半抗原并经HRMS,NMR及IR鉴定;用混合酸酐法和活化酯法分别合成人工免疫抗原与包被抗原;通过免疫动物获得多克隆抗体。【结果】合成了琥珀酸单酰川楝素(TS)和戊二酸单酰川楝素(TG)2种半抗原,与载体蛋白BSA和OVA分别偶联制备了2种免疫原TS-BSA和TG-BSA,及2种包被原TS-OVA和TG-OVA。免疫后获得的2种抗体效价达6.4×104和3.2×105。经4种不同包被原-抗体组合优化,以(TS-Ab,TG-OVA)组合建立的川楝素IC-ELISA检测方法,线性检测范围为0.01~100 µg•ml-1,检测限达0.03 µg•ml-1,抑制中浓度为1.52 µg•ml-1;以(TG-Ab,TG-OVA)组合建立的方法,线性检测范围为0.1~100 µg•ml-1,检测限达0.11 µg•ml-1,抑制中浓度为3.49 µg•ml-1。水样中基于(TS-Ab,TG-OVA)组合的川楝素平均回收率为82.4%~106.0%,精密度为1.1%~14.3%。【结论】通过川楝素半抗原的合理设计,获得了高效价的抗川楝素多克隆抗体,建立了快速有效的川楝素IC-ELISA检测方法。

关键词: 川楝素, 半抗原, 多克隆抗体, ELISA