中国农业科学 ›› 2008, Vol. 41 ›› Issue (7): 1983-1988 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.07.014

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草莓斑驳病毒分子变异及PCR检测技术研究

杨洪一,李丽丽,代红艳,张志宏   

  1. 东北林业大学生命科学学院
  • 收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-07-10 发布日期:2008-07-10
  • 通讯作者: 张志宏

  1. 东北林业大学生命科学学院
  • Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2008-07-10 Published:2008-07-10

摘要: 【目的】明确草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus,SMoV)的分子变异特点;探索利用嵌套PCR和转录增强技术检测SMoV的方法。【方法】利用RT-PCR扩增SMoV 3′非编码区(non-coding region,NCR)和大外壳蛋白(large coat protein,LCP)基因特异片段,并对扩增产物进行克隆测序。利用生物信息学软件分析不同地区分离物变异特点及系统发育关系。参考测序结果,在SMoV基因组保守区设计引物,利用嵌套PCR和转录增强技术检测SMoV。【结果】获得了SMoV中国分离物的NCR区和部分LCP 基因核酸序列,不同分离物部分LCP基因核酸序列同源性为76.8%~99.7%。系统进化分析显示不同分离物呈现轻微的地理相关性。3个波兰分离物,4个中国分离物中的3个,7个荷兰分离物中的4个分别聚集成一簇;2个德国分离物与其它分离物亲缘关系较远,形成一个独立的分支。建立了利用半嵌套PCR和转录增强技术检测SMoV的技术体系,灵敏度高于常规PCR。【结论】SMoV不同分离物变异复杂,德国分离物可能是一个代表特殊株系的群体;基于定位基因组保守区引物,利用嵌套PCR和转录增强技术可有效检测SMoV。

关键词: 草莓斑驳病毒, RT-PCR, 嵌套PCR, 变异, 系统进化分析