中国农业科学

基于AlcR/alcA和Cre/loxP系统的标记基因诱导删除体系

赵青, 郭仰东, 谢华, 马荣才, 姚磊

中国农业科学. 2011, 44(17): 3491-3500. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.001

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【目的】通过构建能够在植物生长发育阶段经乙醇诱导将选择标记基因删除的载体，消除选择标记基因带来的潜在安全隐患。【方法】利用AlcR/alcA诱导系统和Cre/loxP位点特异性重组系统删除选择标记基因。当外源诱导物乙醇存在时，激活下游Cre的表达。Cre重组酶识别2个同向loxP位点，剔除位点之间的DNA片段，包括选择标记基因、AlcR/alcA系统和Cre/loxP系统，而目的基因gus在诱导前后均为组成型表达。【结果】拟南芥转基因植株受乙醇诱导严格控制Cre表达的“开”和“关”。经诱导的转基因植株不能在选择培养基上继续生长。分子生物学检测显示，2个同向loxP位点间序列均已删除，表明标记基因删除效果明显。【结论】基于AlcR/alcA和Cre/loxP系统的标记基因诱导删除体系切实可行，有广泛的应用前景。

小麦糯性与紫粒的遗传分析

黄碧光

中国农业科学. 2011, 44(17): 3501-3507. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.002

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【目的】研究糯麦和紫粒麦中糯性和紫粒性状的遗传特性，为培育紫糯小麦新种质提供指导。【方法】以糯小麦C75与紫粒小麦03初3为材料，通过正反杂交，并与糯小麦C75回交，根据后代表型，分析糯性和粒色性状的遗传特性并选育紫糯小麦。【结果】紫粒为母性影响遗传，紫色基因具有剂量效应；在F2:3中，紫色与红色籽粒株的比例符合9﹕7，在BC1F2中，该比例为1﹕3，说明紫粒受2对显性互补基因控制；杂交组合F2:3 的籽粒非糯株与糯株的分离比例符合63﹕1，测交组合BC1F2中，该比例为7﹕1，表明糯性性状受3对相互独立重叠互作的隐性基因控制，非糯为显性性状；控制紫色性状与控制糯性的基因相互独立；经过自交纯化，共收获了5个糯性基因和紫粒基因皆纯合的紫糯小麦新种质。【结论】紫粒呈2对显性互补基因控制的母性影响遗传，隐性性状糯性受3对独立重叠基因控制，采用恰当的杂交育种策略可获得紫糯小麦新种质。

基于掖478导入系的玉米产量性状QTL鉴定

赵璞, 刘瑞响, 李成璞, 邢向茹, 曹晓良, 陶勇生, 张祖新

中国农业科学. 2011, 44(17): 3508-3519. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.003

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目的】鉴定玉米产量相关性状基因位点及包含有利等位基因的导入系，为了解产量性状形成的遗传基础及针对玉米自交系产量性状的分子设计提供参考和依据。【方法】以QB80和Qi319为供体亲本，掖478为轮回亲本，采用回交结合定向选择，分别构建含有61和72个家系的基础导入系群体。通过2年4点田间试验，利用完备复合区间作图进行产量及其相关性状的QTL（quantitative trait locus，QTL）分析。【结果】4个环境下，在QB80为供体的导入系群体中，共检测到9个性状的49个QTL；在Qi319为供体的导入系群体中，检测到9个性状的42个QTL。在2个及以上环境中均检测到的QTL有16个。同一性状在不同环境下所检测的QTL定位在相同的染色体区域，不同性状的QTL也定位在相同或临近的染色体区域，形成多个QTL富集区。2个群体所检测的QTL位点具有较少的一致性，说明2个供体材料中含有不同的有利基因位点。同时，导入片段中含有利基因的导入系，其相关性状明显得以改良，这些导入系可用于QTL聚合以改良掖478的产量相关性状。【结论】QB80较Qi319与掖478间的遗传差异更大，能检测更多的产量性状QTL；2个导入系群体中含有优良等位基因的导入系可用于QTL聚合改良掖478；QTL富集区是为产量性状基因的克隆提供可供参考的重要染色体区域。

作物模型发展探讨

曹宏鑫, 赵锁劳, 葛道阔, 刘永霞, 刘岩, 孙金英, 岳延滨, 张智优, 陈煜利

中国农业科学. 2011, 44(17): 3520-3528. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.004

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为进一步深化与促进作物模型发展，并融入国际潮流，论文以系统学思想为指导，采用系统分析、分类、比较及认识论挖掘等方法，通过作物模型概念、分类、作用及其与数字种植业的关系分析，阐述了作物模型的作用，综述了国内外作物模型研究与应用新动态，比较了国际上作物生长模型四大研究组（DSSAT，School of de Wit，APSRU及中国）和功能-结构植物模型三大研究组（L-Studio，GREENLAB及中国）间作物模型的差异，分析了存在问题，提出了进一步发展的对策和建议。目前，虽然作物模型在数字种植业中的应用较少，但随着中国农业的发展，特别是城乡结构的变化，未来它将具有广阔的应用和发展前景。

氮肥和多效唑对小麦茎秆木质素合成的影响及其与抗倒伏性的关系

陈晓光, 石玉华, 王成雨, 尹燕枰, 宁堂原, 史春余, 李勇, 王振林

中国农业科学. 2011, 44(17): 3529-3536. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.005

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【目的】明确氮肥和多效唑对小麦茎秆木质素含量的影响，探讨氮肥和多效唑调节茎秆抗倒伏能力的机制。【方法】以小麦品种烟农21和藁城8901为材料，通过田间试验和室内分析，研究氮肥和多效唑对小麦不同时期茎秆抗折力、抗倒伏指数、木质素含量的影响以及木质素合成相关酶的活性变化。【结果】同品种条件下，与低施氮（225 kg•hm-2）处理相比，高施氮（300 kg•hm-2）处理降低了茎秆苯丙氨酸转氨酶（PAL）、酪氨酸解氨酶（TAL）、肉桂醇脱氢酶（CAD）和4-香豆酸:CoA连接酶（4CL）的活性，茎秆木质素含量、抗折力和抗倒伏指数降低。而喷施多效唑显著提高茎秆PAL、TAL和CAD的活性，木质素含量、茎秆抗折力和抗倒伏指数提高，倒伏面积和倒伏程度降低。相关分析表明，茎秆抗倒伏指数与木质素含量呈显著正相关（r=0.61，P＜0.05）；木质素含量与PAL、TAL和CAD酶活性呈显著正相关，与4CL酶活性相关不显著。【结论】高施氮量处理降低了茎秆木质素合成相关酶的活性和木质素含量，茎秆抗倒伏能力降低。而施用多效唑显著提高茎秆木质素合成相关酶的活性和木质素含量，进而增强了茎秆抗倒伏能力。

哈茨木霉几丁质合酶基因ThChsC的克隆及序列分析

冀颖, 李梅, 田云龙, 刘卫德, 牛静, 蒋细良

中国农业科学. 2011, 44(17): 3537-3546. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.006

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【目的】克隆哈茨木霉几丁质合酶基因全序列，并对序列进行生物信息学分析。【方法】利用多聚酶链式反应（PCR）和染色体步移技术（genome walking）克隆几丁质合酶基因全序列；应用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白序列进行分析；通过同源建模，对蛋白质的三维结构进行预测。【结果】从哈茨木霉（Trichoderma harzianum Th-33）中扩增得到几丁质合酶基因ThChsC（GenBank登录号HQ419000），编码区（CDS）长为2 835 bp，由4个外显子和3个内含子组成，开放阅读框（ORF）长2 688 bp，编码895个氨基酸。序列比对和同源性分析显示，该基因与串珠状赤霉（Gibberella moniliformis，ACY08039.1）和禾生刺盘孢菌（Colletotrichum graminicola，AAL23718.1）几丁质合酶基因相似性最高，分别为80%和81%；相应的氨基酸序列同源性均为80%，系统进化分析表明，ThChsC属于III型几丁质合酶亚家族。几丁质合酶ThChsC含有1个Chitin_synth_1结构域，1个Chitin_synth_1N结构域，1个Chitin_synth_2结构域，3个跨膜结构域，不含信号肽，为膜结合蛋白。对预测的三维结构分析表明，ThChsC含有糖基转移酶的保守DHD结构域。【结论】从哈茨木霉Th-33中克隆得到几丁质合酶基因ThChsC，对该基因的深入研究有助于探索哈茨木霉几丁质合成的机制。

B型烟粉虱对番茄不同品种光合特征和防御酶活性的影响

陈奕磊, 崔旭红, 蔡冲, 曹凤勤

中国农业科学. 2011, 44(17): 3547-3556. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.007

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【目的】从植物生理代谢角度评价B型烟粉虱对番茄不同品种的选择性差异。【方法】在人工气候室内，通过选择性试验比较研究B型烟粉虱在9个番茄品种上的落虫量以及番茄植株受B型烟粉虱侵害后光合参数（Fv/Fm、Fv/Fo、Gs、Pn、Ci）和防御酶（POD、CAT、PPO、LOX）活性变化。【结果】B型烟粉虱在9种番茄品种上的落虫量大小依次为黄圣果（HSG）＞浙杂205（ZA 205）＞浙杂203（ZA 203）＞浙杂206（ZA 206）=浙杂809（ZA 809）=合作903（HZ 903）=粉娘（FN）＞红圣女（HSN）=浙粉202（ZF 202）。落虫量较多的HSG和ZA 205的光合参数值及防御酶活性变化显著，而落虫量较少的HSN和ZF 202的光合参数值及防御酶活性没有显著变化，表明HSG和ZA 205受到B型烟粉虱取食胁迫,而HSN和ZF 202没有受到B型烟粉虱的取食胁迫。进一步的分析表明，9 h 后番茄各品种上的光合参数值的变化与落虫量，及光抑制特征参数Fv/Fm变化量与防御酶活性变化量均呈极显著正相关。【结论】植物的光合参数值和防御酶活性变化能很好反映出B型烟粉虱对不同番茄品种的选择性，B型烟粉虱对HSG和ZA 205的选择性最强，对HSN和ZF 202最弱，并且落虫量与植物受B型烟粉虱胁迫程度呈正相关性。

中国耕地质量状况分析

陈印军, 肖碧林, 方琳娜, 马宏岭, 杨瑞珍, 易小燕, 李倩倩

中国农业科学. 2011, 44(17): 3557-3564. doi:doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.008

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耕地质量是耕地土壤质量、耕地环境质量、耕地管理质量和耕地经济质量的总和。中国耕地质量总体偏低，中等和低等地共占耕地总面积的2/3以上。中国耕地质量变化态势如何，目前没有统一的认识，较为普遍的看法是中国耕地质量总体水平趋于下降，但农田土壤监测结果表明中国耕地土壤肥力指标总体上呈稳中有升的趋势。论文的分析结果表明，中国耕地质量总体上向好的方向发展，但耕地部分质量要素和局部区域耕地质量恶化问题突出。

不同有机物料还田对东北黑土活性有机碳的影响

梁尧, 韩晓增, 宋春, 李海波

中国农业科学. 2011, 44(17): 3565-3574. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.009

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【目的】阐明不同有机物料培肥对黑土总有机碳和活性有机碳组分的影响，探讨合理调控农田土壤肥力的施肥模式。【方法】以黑龙江省海伦市国家野外科学观测研究站试验区上进行了6年田间定位试验的小区土壤为研究对象，通过对土壤活性有机碳的提取以及室内作物栽培试验，对比和分析不同有机物料配施化肥处理下土壤活性有机碳与土壤生产力的变化。【结果】与试验初期相比，经过6年单施化肥处理后，土壤总有机碳（TOC）、微生物量碳（MBC）、水溶性有机碳（WSOC）以及轻组有机碳（LFOC）的含量显著下降；而有机无机配施则显著提高了土壤有机碳及各活性有机碳组分的含量。不同有机物料还田对土壤总有机碳和各活性有机碳组分的作用存在显著差异，作物秸秆与化肥配施更有助于TOC和LFOC的积累，其中以玉米秸秆配施化肥的效果最为突出，与单施化肥相比，增幅分别为26%和136%；粪肥配施化肥对MBC和WSOC的积累效果优于作物秸秆，其中以猪粪配施化肥的效果最为突出，与单施化肥相比，增幅分别为52%和85%。室内作物栽培试验表明，单施化肥处理将引起土壤生产力的下降，有机无机配施则能明显改善土壤生产力水平。不同有机物料配施化肥对土壤生产力的提升效果表现为：猪粪＞牛粪＞小麦秸秆≈玉米秸秆。【结论】在东北黑土区，不同有机物料处理之间土壤总有机碳、活性有机碳以及土壤生产力存在明显差异，玉米秸秆配施化肥能够显著提高土壤总有机碳和轻组有机碳的含量，而猪粪配施化肥则更有助于土壤微生物量碳和水溶性有机碳的积累，有利于土壤生产力的提升。

砂姜黑土玉米秸秆有机碳的矿化特征

张丽娟, 常江, 蒋丽娜, 徐姗, 章力干

中国农业科学. 2011, 44(17): 3575-3583. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.010

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【目的】探讨不同温度（10℃、20℃、30℃）、不同秸秆加入量（秸秆全量和过量）条件下，玉米秸秆还田对土壤有机碳矿化特征及其环境因子的响应机制。【方法】采用室内恒温控湿好气培养试验，对安徽淮北砂姜黑土在不同温度（10℃、20℃、30℃）条件下，设置50 g土样中加秸秆0.3 g（处理Ⅰ）、1.5 g（处理Ⅱ）、3.0 g（处理Ⅲ）及不加秸秆（CK）的处理，进行240 d的矿化培养。【结果】温度对有机碳矿化影响显著，在对照（CK）和秸秆加入量相同的处理中，有机碳的矿化累积量均随温度（10—30℃）升高而增加；温度较低（＜20℃）时，CK、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各处理的有机碳矿化温度系数（Q10）平均值约为1.229、1.251、1.572、1.399，温度较高（＞20℃）时，CK、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的Q10平均值约1.006、1.249、1.401、1.374，Q10值在温度较低时大于温度较高时，说明低温条件下，有机碳矿化速率对升温更敏感。同一温度条件下，不同处理秸秆加入量越大，有机碳矿化累积量越高，有机碳矿化的日变化量也越大。本试验中，一级动力学方程能较好地描述了不同处理土壤有机碳的矿化累积动态。土壤有机碳的潜在矿化量（C0）随温度变化不明显，在同一温度条件下，秸秆加入量越大，C0值越大。【结论】一级动力学方程能较好地描述不同处理土壤有机碳的矿化累积动态。不同温度、不同秸秆还田量及温度和秸秆还田量的交互作用，对玉米秸秆矿化过程中土壤有机碳含量的影响均达到显著水平。

黄瓜白粉病抗性基因的QTL定位

张圣平, 刘苗苗, 苗晗, 张素勤, 杨宇红, 谢丙炎, 顾兴芳

中国农业科学. 2011, 44(17): 3584-3593. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.011

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【目的】对黄瓜高抗白粉病材料K8进行研究，明确其抗性遗传规律，并完成抗性基因的QTL定位分析，为探索抗病机理和分子标记辅助选择（MAS）育种提供理论依据。【方法】利用黄瓜白粉病致病菌Podosphaera xanthii (syn. Sphaerotheca fuliginea）对K8×K18（感白粉病）杂交后代F2:3家系人工接种鉴定，进行抗白粉病遗传分析。以完成抗病性鉴定的F2和F2:3家系组成的抗感分离群体为研究对象，应用BSA法和2360对黄瓜SSR引物进行SSR分析，采用JoinMap 4.0作图软件和MapInspect软件构建连锁群并完成连锁群与染色体的对应。利用MapQTL4.0软件对白粉病抗性基因进行QTL定位分析。【结果】试材K8所含有的黄瓜白粉病抗性基因符合数量性状遗传的特点。本研究共检测到4个白粉病抗性基因的QTL位点pm5.1、pm5.2、pm5.3和pm6.1，其中，pm5.1、pm5.2、pm5.3在两年中被重复检出，pm5.2位点的贡献率最大，在其所在区域预测到了4个NBS类抗病基因。pm6.1位于黄瓜Chr.6上，是个微效的QTL位点。【结论】位于Chr.5上的pm5.2是黄瓜白粉病抗性基因的主效QTL位点，该抗性基因可能属于NBS类抗病基因。本研究结果为抗性基因主效QTL的精细定位和克隆及MAS抗病育种奠定了良好基础。

欧洲葡萄品种‘无核白’不同营养系果实的酚类物质

张宗勤, 孙锋, 金强, 刘文杰, 田贝贝, 王晶晶, 骆强伟, 高疆生, 王跃进

中国农业科学. 2011, 44(17): 3594-3602. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.012

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【目的】更有效地发挥欧洲葡萄品种‘无核白’不同营养系鲜食或制干的用途，筛选‘无核白’系列大粒与白藜芦醇含量较高的鲜食品系，酚类物质浓度与多酚氧化酶活性较低而适宜绿色葡萄干制备的制干品系。【方法】以‘无核白’葡萄为对照，以其性状上有变异的10个营养系成熟果实为材料，取样测定其果粒重，用折光仪测定可溶性固形物含量，HPLC法测定果皮与全果白藜芦醇含量、酚类物质，比色法测定多酚氧化酶活性。【结果】大粒无核白和W3等营养系浆果单粒重为对照的1.3286—1.4682倍；W2、W8、长穗无核白和W7等营养系果实白藜芦醇含量为对照的110.65%—128.41%；‘无核白’葡萄营养系果实中总酚含量具有明显差异，含量较低的有长粒无核白、W8、W3和大粒无核白等；不同营养系果皮中多酚氧化酶活性是全果的1.06—13.19倍。【结论】与对照相比，供试10个‘无核白’葡萄营养系中，单粒重、可溶性固形物含量、果皮与全果的白藜芦醇含量较高的有W3、大粒无核白、长粒无核白和W5等；酚类物质总量较低的营养系有大粒无核白、长粒无核白、W3等；多酚氧化酶活性较低的营养系有W7、长穗无核白、W3、W8。本研究结果为‘无核白’系列无核葡萄品种选育提供了部分依据。

草莓EST-SSR标记开发及在品种遗传多样性分析中的应用

董清华, 王西成, 赵密珍, 宋长年, 葛安静, 王静

中国农业科学. 2011, 44(17): 3603-3612. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.013

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【目的】探讨草莓EST序列中SSR位点的分布规律，开发草莓EST-SSR引物，并分析其在草莓品种遗传多样性研究中的应用。【方法】从NCBI公共数据库下载草莓表达序列标签（expressed sequence tag，EST）55 750条，利用MISA软件查找SSR位点，并利用Primer3.0 Plus软件设计60对引物，通过非变性聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）研究这些SSR引物的PCR扩增特点，并对部分扩增产物进行克隆和测序，以验证其真实性。【结果】55 750条草莓EST序列含有SSR位点的序列1 334条，SSR位点1 490个。其中，二核苷酸、三核苷酸和六核苷酸重复是最主要的SSR类型，分别占36.17%、26.51%和19.87%。60对引物中有42对引物能在20个草莓品种中扩增出理想的PCR产物，其中36对引物扩增条带具有多态性。利用11对验证的EST-SSR引物分析了20个草莓品种的亲缘关系。【结论】草莓EST-SSR标记的开发对于草莓品种鉴定与遗传多样性分析具有重要应用价值。

营养限制及补偿对羔羊小肠黏膜生长发育的影响

刘小刚, 李大彪, 侯先志, 考桂兰, 王海荣, 杨金丽, 张崇志, 夏巍

中国农业科学. 2011, 44(17): 3613-3621. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.014

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【目的】研究营养限饲及补偿对羔羊小肠黏膜结构生长发育的影响。【方法】选用80只平均体重为（14.72±1.10）kg的3月龄乌珠穆沁羔羊，按照体重相近原则分为4个试验组，即对照组（CG）、限制Ⅰ组（RG1）、限制Ⅱ组（RG2）和限制Ⅲ组（RG3）。营养限制期（0—60 d）4组对应日粮能氮水平分别为ME：10.61、10.49、8.36和8.10 MJ•kg-1；CP：150.8、92.4、150.1和62.7 g•kg-1。营养补偿期（60—150 d）各组饲喂同一能氮水平日粮（ME：9.77 MJ•kg-1；CP：124.8 g•kg-1）。试验期间每周称重并在限制期开始、限制期结束和补偿期结束，分别从各组选取4只与组内平均体重相近的羔羊，屠宰后迅速取其十二指肠、空肠和回肠中段，用多聚甲醛磷酸缓冲液固定。经H.E染色后，光镜下观察小肠黏膜的形态结构。【结果】营养限制结束，RG1、RG2组羔羊平均体重显著低于CG组(P＜0.05)，RG3组羔羊体重极显著低于CG组(P＜0.01)；在补偿期后60 d，RG3组平均日增重显著高于CG组(P＜0.05)，表现出较高的生长速率。不同能氮营养水平限制饲养后对小肠结构发育有影响，限制能量（RG2）比限制蛋白（RG1）表现出更高的补偿效应。【结论】乌珠穆沁羔羊受不同能氮营养水平限饲后，羔羊体重和小肠黏膜发育均表现出补偿生长效应，而且低能高氮限饲羔羊比高能低氮限饲羔羊表现出更强的补偿效应，限饲蛋白对小肠黏膜发育影响更大。当以ME（8.36 MJ•kg-1）和CP（150.1 g•kg-1）限饲60 d并经过90 d的营养恢复后，羔羊小肠黏膜发育实现了完全补偿，小肠吸收功能增强，生长速率加快。

大额牛（Bos frontalis）与瘤牛（Bos indicus）的种间杂交研究

和占星, 张继才, 亐开兴, 金显栋, 王喆, 王安奎, 黄梅芬, 赵刚, 杨国荣, 涂先云, 袁希平, 黄必志

中国农业科学. 2011, 44(17): 3622-3633. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.015

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【目的】探讨大额牛（Bos frontalis）与瘤牛（Bos indicus）杂交利用潜能及杂交育种前景。【方法】选用婆罗门（Brahman）母牛，以CUE-MATETM（孕酮阴道栓）+ PG（氯前列烯醇）法同期发情处理后用大额牛冷冻精液对其进行人工授精（artificial insemination，AI），调查记录母牛产犊时间、妊娠期及犊牛性别等；测定大额牛与婆罗门牛杂交F1（大婆F1）、大额牛和婆罗门牛的初生体重及6、12和18月龄的体重；进行大婆F1的核型分析；对大婆F1的繁殖性能进行研究。【结果】 ① 婆罗门母牛的同期发情率、妊娠率和产犊率分别为83.87%、60.56%和45.07%，母牛（n=24）的平均妊娠期为（290.83±5.26）d；② 大婆F1中母犊占71.88%，分别显著高于大额牛和婆罗门牛（P＜0.05）、极显著高于大额牛与黄牛杂交F1（大黄F1）和BMY牛（P＜0.01）；③ 大婆F1（n=29）初生体重及6、12和18月龄平均体重分别为（26.69±4.84）、（153.08±37.58）、（219.34±31.31）和（302.06±28.92）kg，分别比大额牛（n=18）高68.18%、37.12%、45.07%和40.13%（P＜0.01）；分别比婆罗门（n=45）低14.40%（P＜0.01）、5.23%（P＞0.05）、13.12%（P＜0.01）和12.76%（P＜0.01）；0—18月龄大婆F1中公牛和母牛平均日增重分别为（503.09±44.91）g和（502.89±53.54）g，分别比大额牛高35.98%和39.85%（P＜0.01），但分别比婆罗门牛低16.49%（P＜0.01）和6.63%（P＞0.05）；④ 大额牛、婆罗门牛和大婆F1的染色体数目（2n）分别为58、60和59；大婆F1母牛（n=2）的初妊娠年龄、初妊娠体重和初产年龄分别为（16.00±2.83）月龄、（342.50±30.41）kg和（26.00±2.83）月龄，且年产1犊；⑤ 对5头、15—24月龄大婆F1公牛进行电刺激采精，均未采集到精液。【结论】大额牛和瘤牛杂交，其杂种牛生长发育快，适应性强，杂种优势明显；F1代母牛可繁育，且成熟早，繁殖力强；但F1代公牛是否可繁育有待进一步研究。

外源褪黑素对牛卵母细胞体外成熟的影响

高超, 田秀芝, 张璐, 徐静, 汪锋, 卓志勇, 戴蕴平, 刘国世

中国农业科学. 2011, 44(17): 3634-3640. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.016

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【目的】探索外源褪黑素（melatonin，MT）处理对牛卵母细胞体外成熟的影响从而优化牛体外胚胎生产体系。【方法】在牛卵母细胞成熟过程中添加不同浓度的MT，观察并统计其体外受精后胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数。应用放射免疫分析法检测血清、卵泡液和成熟培养液内MT与孕酮（P）、雌激素（E2)、促卵泡素（FSH）、促黄体生成素（LH）水平的变化并检测卵母细胞的活力和活性氧（ROS）的浓度。【结果】存在于牛卵泡液中的MT浓度与血清中的相近，添加10-11 mol•L-1 MT组的P浓度（2.01±0.33）ng•mL-1显著高于对照组（（0.87±0.10）ng•mL-1，P＜0.05）。与对照组（（67.32±7.30）%）相比，10-9 mol•L-1 MT组卵裂率显著提高（（77.81±7.06）%，P＜0.05），并能提高囊胚率且囊胚细胞数（（29.61±9.55）%，（90.30±28.74）个），显著高于对照组（（19.64±9.22）%，（75.07±25.98）个，P＜0.05）；同时，10-9 mol•L-1 MT组卵母细胞的活力高于对照组，并能降低卵母细胞内的ROS含量但没有显著差异（P＞0.05）。【结论】牛卵泡液中存在MT，适当浓度的外源MT能促进牛卵母细胞体外成熟。

福寿螺多功能纤维素酶基因egx的克隆及其体外功能性表达

黄妙容, 刘德武, 吴珍芳

中国农业科学. 2011, 44(17): 3641-3648. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.017

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【目的】克隆福寿螺多功能纤维素酶基因egx，并在大肠杆菌和哺乳动物细胞中进行表达分析。【方法】通过RT-PCR的方法，从福寿螺胃组织总RNA中克隆福寿螺多功能纤维素酶基因egx序列，连接克隆载体pMD18-T，再通过Eco RⅠ和NotⅠ两个酶切位点分别与表达载体pET-32a（+）及pcDNA3.1（+）连接，构建原核、真核表达载体，并在E.coli BL-21（DE3）和猪肾细胞PK15中进行表达，最后采用DNS法测定表达产物酶学活性。【结果】RT-PCR扩增得到1 326 bp的序列，包括1 185 bp的编码序列和部分侧翼序列，编码序列与已报道的福寿螺多功能纤维素酶基因cDNA序列相似性为99%，氨基酸序列相似性为100%。原核细胞表达产物经包涵体复性后，对羧甲基纤维素钠、2-羟乙基纤维素、羟乙基纤维素、微晶纤维素、木聚糖的水解活性分别为：24.78、15.67、18.42、600.91和175.43 U•mg-1；而在PK15细胞中重组酶对以上5种底物的活性分别为：0.84、0.78、1.01、14.62和4.23 U•mL-1。【结论】克隆出了福寿螺多功能纤维素酶基因，并能在大肠杆菌和哺乳动物细胞中成功地表达。

蜜蜂蛋白质组研究进展

李建科, 冯毛, 郑爱娟

中国农业科学. 2011, 44(17): 3649-3657. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.018

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蜜蜂在自然界和人类社会中具有举足轻重的作用。蜜蜂授粉不但能够提高农作物的产量和质量，而且对维持自然界生物多样性具有重要贡献，同时蜜蜂提供给人类的蜂产品也具有较高的营养和保健功能。随着基因组测序工作的完成，作为模式生物，蜜蜂蛋白质组学研究进入了一个新的阶段。目前对蜜蜂蛋白质组的研究比较常用的是双向电泳结合质谱的研究方法，包括不同品系蜜蜂卵、幼虫、蛹、级型分化、咽下腺等发育相关蛋白质组及差异蛋白质组研究，蜜蜂毒腺、头部、胸部、血淋巴、精液、受精囊、附腺等器官和组织的蛋白质组分析，以及蜂王浆、蜂花粉、蜂毒等部分蜂产品的蛋白质组等。本文综述了近年来蜜蜂相关蛋白质组研究进展，对其今后在蜂业科学的研究应用进行了展望，以期对蜜蜂研究有所借鉴。

非酒精性脂肪肝模型小鼠肝中脂肪酸组成分析

王新, 曹玉珍, 郭桂芳, 李睿, 张秀英

中国农业科学. 2011, 44(17): 3658-3665. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.019

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【目的】通过检测非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）模型小鼠肝中脂肪酸的含量，分析肝脏中脂肪酸组成与NAFLD之间的关系。【方法】采用连续6周饲喂高脂饲料并结合每周皮下注射2次CCl4的方法诱导C57BL/6J小鼠的NAFLD。小鼠肝脏中脂肪酸经乙醚提取和BF3/甲醇溶液衍生化处理后，采用气相色谱-质谱 (GC-MS) 选择离子方式进行检测。样品中脂肪酸通过检索质谱数据库和脂肪酸标准品的保留时间进行定性分析，采用外标法进行定量分析。【结果】病理学检查表明成功诱导C57BL/6J小鼠的NAFLD。与对照组相比，试验组小鼠肝中C14:0、C16:0、C18:0和C20:3含量显著升高 (P＜0.01)，C15:0、C18:1、C18:2和C18:3 (n-3)含量显著降低 (P＜0.01)，饱和脂肪酸（SFA）含量显著增加(P＜0.01)，其余类别的脂肪酸均显著降低 (P＜0.01)。n-6 和 n-3 多不饱和脂肪酸（PUFA）的产物/前体比值显著升高(P＜0.01)，n-6/n-3 PUFA [C20:4/(C20:5+C22:6)]的比值显著降低 (P＜0.01)。【结论】NAFLD小鼠肝脏中SFA含量增加、不饱和脂肪酸含量减少以及 n-6 PUFA与 n-3 PUFA代谢紊乱不仅是NAFLD产生的效果，也是促进NAFLD发展的因素。

农产品市场价格短期预测研究进展

许世卫, 李哲敏, 李干琼, 董晓霞

中国农业科学. 2011, 44(17): 3666-3675. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.020

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论文系统概述了近百年来有关国内外农产品市场价格短期预测在理论、方法、实践应用等方面取得的进展，指出主要研究方法的优缺点，并对农产品市场价格短期预测方法研究的特点进行了总结，对今后研究的发展方向进行了展望。研究认为，随着数理统计学、计量经济学、模糊数学、神经网络等理论的发展及方法的广泛应用，目前在农产品市场价格短期预测领域已形成了众多模型，其中主要定量分析方法可概括为四大类，即计量经济预测法、数理统计预测法、智能分析法和组合模型法。在未来的一段时间内，农产品市场价格短期预测将呈现出以定量分析方法占主导、智能化组合化模型逐渐增多、分位数回归模型引入到农产品市场价格短期预测并形成趋势等发展特征。

玉米幼胚和源于幼苗的幼嫩叶段愈伤诱导及其植株再生的比较

陈靖, 董浩, 马海珍, 孙全喜, 刘江, 亓宝秀, 李新征, 董树亭

中国农业科学. 2011, 44(17): 3676-3682. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.021

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【目的】以育种上常用自交系的幼胚和源于幼苗的幼嫩叶段为外植体，研究它们在愈伤诱导及植株再生之间的区别与联系，为建立以叶段为外植体的另一高效稳定的玉米组培体系提供技术参考。【方法】选用6个育种上常用自交系，以幼胚和幼嫩叶段为外植体分别进行愈伤诱导及植株再生，研究2,4-D对不同外植体初级愈伤组织诱导的影响，对不同来源的6个自交系分别统计诱导率及分化率，并观察愈伤组织的形态。【结果】不同外植体对2,4-D浓度的要求不同，且幼嫩叶段相对幼胚较难诱导愈伤且需要的2,4-D浓度更高。同一基因型的幼胚和幼嫩叶段形成的愈伤形态基本无区别，不同基因型之间愈伤形态有差异。不同来源的6个基因型的愈伤诱导率、分化率也存在差异。【结论】通过再生过程中幼胚和叶段多方面的比较，筛选到3个诱导率较高且愈伤形态优良的基因型齐319、Mo17和鲁原92。

柑橘黄龙病病原菌非洲种和美洲种23S-5S rDNA序列的克隆及分析

廖惠红, 李杨瑞, 杨丽涛, 徐宁

中国农业科学. 2011, 44(17): 3683-3693. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.022

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【目的】克隆柑橘黄龙病病原菌非洲种和美洲种23S-5S rDNA序列并和亚洲种相应区域进行比对，阐明黄龙病3个种核糖体RNA操纵子之间的关系。【方法】根据亚洲种23S-5S rRNA基因区域序列的保守性设计引物，在非洲种和美洲种DNA样品上扩增，对PCR产物进行克隆和测序，并对新获得的序列进行序列验证和分析。【结果】非洲种获得了3 057 bp 序列包括23S rRNA 基因、细胞壁脱氢酶假基因和5S rRNA 基因；美洲种获得了3 033 bp序列包括23S rRNA 基因、glpK基因和5S rRNA 基因。3个种核糖体基因顺序分别是：亚洲种16S rRNA、tRNAIle、tRNAAla、23S rRNA、细胞壁脱氢酶假基因、5S rRNA 和 tRNAMet；非洲种16S rRNA、tRNAIle、tRNAAla、23S rRNA、细胞壁脱氢酶假基因和 5S rRNA；美洲种16S rRNA、tRNAIle、tRNAAla、23S rRNA、glpK 基因和5S rRNA。【结论】黄龙病病原菌核糖体RNA基因有特殊的排列方式，即在23S rRNA和5S rRNA基因区间均有反向编码的细胞壁脱氢酶基因，其中亚洲种和非洲种为假基因，美洲种为glpK基因。

基于Hsp70基因的马梨形虫分类学定位分析

罗金, 刘光远, 田占成, 谢俊仁, 张萍, 沈辉, 党根生

中国农业科学. 2011, 44(17): 3694-3700. doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.023

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【目的】为了进一步确定马泰勒虫的分类学定位。【方法】根据GenBank上登录的马巴贝斯虫Hsp70基因序列（AB248743.1），设计引物TeHsp70F, TeHsp70R，以马泰勒虫基因组DNA为模板进行扩增，获得全长为1 920 bp的核酸片段。将该基因序列与GenBank中23种已知虫种的相应序列进行分析比较。【结果】该片段编码639个氨基酸，其疏水性氨基酸达到208个，极性氨基酸167个。同一性分析显示，该基因片段与报道的马巴贝斯虫Hsp70基因（B. equi BAF02625.1）亲缘关系最近，其次是小泰勒虫(T. parva XP764717.1)和环形泰勒虫(T. annulata AAA30130.1)，而与感染马属动物的另一个虫种驽巴贝斯虫(B. caballi BAF02619.1)亲缘关系较远。【结论】马泰勒虫Hsp70基因的克隆及系统发育分析显示，之前被定名为马巴贝斯虫（B. equi）的虫种隶属于泰勒虫虫种。本试验为马巴贝斯虫正确更名为马泰勒虫（T. equi）的分类地位提供了又一佐证。

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