野生二粒小麦（Triticum dicoccoides）低分子量谷蛋白亚基基因的克隆与序列分析

中国农业科学 ›› 2007, Vol. 40 ›› Issue (3): 457-463 .

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野生二粒小麦（Triticum dicoccoides）低分子量谷蛋白亚基基因的克隆与序列分析

李巧云,安学丽,肖英,张倩,张艳贞,夏先春,何中虎,晏月明

首都师范大学生命科学学院

收稿日期:2005-12-12 修回日期:2006-01-20 出版日期:2007-03-10 发布日期:2007-03-10
通讯作者: 晏月明

Cloning and molecular characterization of LMW glutenin subunit genes in Triticum dicoccoides

首都师范大学生命科学学院

Received:2005-12-12 Revised:2006-01-20 Online:2007-03-10 Published:2007-03-10

摘要/Abstract

摘要： 【目的】旨在从野生二粒小麦中克隆新的低分子量谷蛋白亚基基因。【方法】首先通过SDS-PAGE方法对野生二粒小麦Y5和Y13的低分子量谷蛋白亚基（LMW-GS）进行鉴定，并利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）方法确定其精确分子量。然后采用AS-PCR方法，运用1对LMW-GS特异的引物，分别从Y5和Y13中扩增并克隆了2个亚基的编码基因（命名为LMW-Y5和LMW-Y13）。【结果】测序结果表明，所得基因均为完整的基因序列，包括上游区域、开放阅读框和下游区域，无内含子存在。由核酸序列所推导出的氨基酸序列表明，这两个基因的编码蛋白（命名为LMW-Y5和LMW-Y13）均属于LMW-i型亚基，分子量分别为38.9122 kD和31.8708 kD。其中LMW-Y5的分子量与质谱鉴定的分子量基本一致，表明该蛋白亚基没有翻译后修饰存在。但LMW-Y13的分子量与SDS-PAGE和质谱鉴定结果存在较大差异，其原因可能是在克隆过程中发生了重复区的碱基丢失。【结论】明确了野生二粒小麦两个LMW-i型亚基的分子结构特征，并讨论了LMW-i型亚基分子结构与品质的关系以及在小麦品质改良中的应用潜力。

关键词: 野生二粒小麦, LMW-GS, AS-PCR, 基因克隆

Key words: Triticum dicoccoides, LMW-GS, AS-PCR, Gene cloning

李巧云,安学丽,肖英,张倩,张艳贞,夏先春,何中虎,晏月明. 野生二粒小麦（Triticum dicoccoides）低分子量谷蛋白亚基基因的克隆与序列分析[J]. 中国农业科学, 2007, 40(3): 457-463 .

. Cloning and molecular characterization of LMW glutenin subunit genes in Triticum dicoccoides[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2007, 40(3): 457-463 .

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