高亲和力的农药克百威单克隆抗体的制备及鉴定

中国农业科学 ›› 2007, Vol. 40 ›› Issue (3): 518-523 .

高亲和力的农药克百威单克隆抗体的制备及鉴定

杨金易,吴青,王弘,潘科,雷红涛,肖治理,郑晓锋,孙远明

广东省教育厅食品质量与安全重点实验室／华南农业大学食品质量安全研究所

收稿日期:2005-03-22 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-03-10 发布日期:2007-03-10
通讯作者: 孙远明

Production and Identification of High Affinity Monoclonal Antibodies against Pesticide Carbofuran

广东省教育厅食品质量与安全重点实验室／华南农业大学食品质量安全研究所

Received:2005-03-22 Revised:1900-01-01 Online:2007-03-10 Published:2007-03-10

摘要/Abstract

摘要： 【目的】制备高亲和力农药克百威单克隆抗体，建立克百威残留免疫检测方法，控制克百威残留，保障人民身体健康与保护环境。【方法】合成克百威半抗原BFNB，用人工抗原BFNB－BSA免疫Balb/c小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合，经间接ELISA筛选及显微克隆法亚克隆，分离出阳性细胞株，腹水诱导法及辛酸－硫酸铵沉淀法大量制备及纯化单克隆抗体，间接ELISA法测定抗体滴度及亲和力，间接竞争ELISA法测定抗体特异性。【结果】获得1株稳定分泌抗克百威单克隆抗体的杂交瘤细胞株5D3，其培养上清和腹水抗体滴度分别为1﹕2.048×103和1﹕1.024×106，其抗体亚类为IgG1，亲和力常数为2.54×109 L•mol-1，IC50为1.18 ng•ml-1，最低检测限为0.01 ng•ml-1。与克百威降解产物呋喃酚的交叉反应率为4.59×10-4％，另外几种结构类似的氨基甲酸酯类农药的交叉反应率均小于3.0×10-4％。【结论】此抗克百威的单克隆抗体亲合力高、特异性强，为建立克百威简便、快速、特异的免疫检测方法奠定了基础。

关键词: 克百威, 单克隆抗体, 免疫化学分析

Abstract: To prepare hapten BFNB of carbofuran,Balb/c mice were immunized by synthesized BFNB-BSA. The splenocytes of immunized mice were fused with Sp2/0 cells and the cultural supernatants of hybridoma cell were screened by indirect ELISA with BFNB-OVA as coated antigen. Purified McAbs was got from ascites fluids deposited by octanoic acid and ammonia sulfate. The specificity and affinity of McAbs were characterized by ELISA.A hybridoma cell line (5D3) secreting anti-carbofuran McAb had been established. The titre of culture medium and ascites were up to 1∶2.048×103 and 1∶1.024×106 respectively. The immunoglobulin class of the McAb was IgG1. McAbs showed a high affinity (Ka5D3＝2.54×109L/mol, IC50=1.9 ng/mL) and minimum cross reactivity for several analogous compounds of carbofuran (7×10-4％ for carbofuranphenol, others less than 10-4％).The specific monoclonal antibody against carbofuran was obtained successfully and this made it possible to establish ELISA for rapid detection of carbofuran.

Key words: Carbofuran, Monoclonal antibodies

杨金易,吴青,王弘,潘科,雷红涛,肖治理,郑晓锋,孙远明. 高亲和力的农药克百威单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国农业科学, 2007, 40(3): 518-523 .

. Production and Identification of High Affinity Monoclonal Antibodies against Pesticide Carbofuran[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2007, 40(3): 518-523 .

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