中国农业科学 ›› 2009, Vol. 42 ›› Issue (7): 2359-2365 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.07.013
张 帅,张永军,苏宏华,高希武,郭予元
ZHANG Shuai, ZHANG Yong-jun, SU Hong-hua, GAO Xi-wu, GUO Yu-yuan
摘要：
【目的】克隆、分析和原核表达编码棉铃虫Helicoverpa armigera (Hübner)信息素结合蛋白HarmPBP2的cDNA,并纯化得到HarmPBP2蛋白。【方法】以棉铃虫触角为材料，通过RT-PCR 技术以获得编码中棉铃虫信息素结合蛋白HarmPBP2 基因成熟蛋白开放阅读框序列，使用半定量RT- PCR对表达谱进行研究，并在使用pGEX-4T-1表达载体在BL21（DE3）系统中进行原核表达，使用GSTrap FF预装柱进行纯化并切去标签。【结果】克隆了命名为HarmPBP2（GenBank登录号：EU647241）的棉铃虫信息素结合蛋白基因，该序列全长457 bp，编码149 个氨基酸残基，前端是一段25个氨基酸长的信号肽，推测蛋白具有昆虫信息素结合蛋白典型的6 个保守的半胱氨酸残基的特征。棉铃虫HarmPBP2在雌雄成虫的触角、足和翅中都有表达，另外在雌虫下颚须也有表达。雌雄组织表达量顺序相同，触角中表达量最高，翅中次之，足中最少。雌虫组织中表达量高于雄虫。构建的原核表达载体pGEX/ HarmPBP2，在大肠杆菌BL21（DE3）中成功地表达出一个分子量约为40 kD的融合蛋白，经亲和层析纯化与酶切得到去标签的HarmPBP2蛋白。【结论】克隆、分析和表达了棉铃虫信息素结合蛋白HarmPBP2的cDNA序列，并对其进行纯化，为进一步研究其分子结构和功能奠定了基础，同时对其表达谱进行了研究。
