【目的】H7亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)和H5亚型一样,多数属于高致病性毒株,通常在禽类间传播,引起家禽出现严重的临床症状和高死亡率。从1996年至2012年,加拿大、意大利、墨西哥、荷兰、英国和美国出现了人感染H7亚型流感病毒(H7N2、H7N3和H7N7)的病例。2013年,中国报告了人感染H7N9流感病毒的事件,此后,该病毒持续在人和禽类中传播。因此,开展H7亚型禽流感病毒抗体检测工作成为一个重要问题。【方法】该研究用纯化的H7-AIV作为包被抗原,辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP)标记的单克隆抗体1H9(HRP-1H9)作为竞争抗体,采用棋盘滴定法建立了一种检测H7亚型AIV抗体的竞争性酶联免疫吸附实验(Competitive enzyme-linked immunosorbent assay, cELISA)。【结果】抗原包被的最佳浓度为5 μg mL-1,血清稀释度为1/10,酶标抗体为1/3000。用ROC曲线分析法测定178份AIV阴性和368份AIV阳性血清(n=546)的cELISA临界值,当PI为40%时,cELISA的特异性和敏感性分别为99.15%和98.12%。该方法可检测H7Nx(N1--N4、N7--N9)禽流感病毒抗体,与H1 -- H6、H8 -- H15亚型禽流感病毒及鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)和传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus, IBDV)等常见禽类病毒无反应,具有良好的特异性。该方法与血凝素抑制试验的符合率为98.56%。重复性实验表明,批内和批间重复的变异系数均小于12%。【结论、创新性】综上所述,本研究利用H7亚型特异性酶标单克隆抗体作为竞争抗体,建立了cELISA抗体检测方法,其优势是酶标抗体与待检血清同时加入反应孔中进行竞争反应,与先加入待检血清,再加竞争抗体反应的常规方法比较,简化了操作步骤,缩短反应时间,为开展H7-AIV抗体的大量检测提供了一种简单、便捷的技术手段。