PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究

中国农业科学 ›› 2003, Vol. 36 ›› Issue (4): 398-402 .

PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究

陈中义,吴限,张杰,宋福平,管宇,黄大昉

中国农业科学院植物保护研究所

出版日期:2003-04-20 发布日期:2003-04-20

中国农业科学院植物保护研究所

Online:2003-04-20 Published:2003-04-20

摘要/Abstract

摘要： Bt菌株C0 0 2对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力 ,PCR RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等 ,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～ 9kb的EcoRI片段。染色体和质粒DNA分别经EcoRI完全酶切和Sau3AI部分酶切、电泳回收 6～ 9kb片段。E .coli Bt穿梭载体pHT315分别与目的DNA连接、转化大肠杆菌感受态细胞后获得了相应的DNA文库。约 5 0个转化子合为一个转化子池 ,采用PCR RFLP方法快速检测 ,分别从约 2 0 0 0质粒DNA文库转化子和 4 0 0个染色体文库转化子中筛选获得了cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知基因cryX的阳性克隆 ,相应命名为pHT 1Aa、pHT 1Ca、pHT 2Ab和pHT X。限制酶切分析表明 ,含有cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab基因的克隆片段均含有相应基因的保守物理图谱。进一步将这些质粒分别导入Bt无晶体突变株CryB-,SDS PAGE分析表明 ,只有cry1Ca表达了约 130ku杀虫晶体蛋白。初步杀虫生测结果显示 ,cry1Ca对甜菜夜蛾具有高毒力 ,7d校正死亡率为 10 0 %。

关键词: 苏云金芽孢杆菌, DNA文库, PCRRFLP, 杀虫蛋白基因, 基因克隆

Key words: NULL

陈中义,吴限,张杰,宋福平,管宇,黄大昉. PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究[J]. 中国农业科学, 2003, 36(4): 398-402 .

0
/ / 推荐

导出引用管理器 EndNote|Reference Manager|ProCite|BibTeX|RefWorks

链接本文: https://www.chinaagrisci.com/CN/

https://www.chinaagrisci.com/CN/Y2003/V36/I4/398

[1]	古丽旦,刘洋,李方向,成卫宁. 小麦吸浆虫小热激蛋白基因Hsp21.9的克隆及在滞育过程与温度胁迫下的表达特性[J]. 中国农业科学, 2023, 56(1): 79-89.
[2]	李雨泽,朱嘉伟,林蔚,蓝茉莹,夏黎明,张艺粒,罗聪,黄桂香,何新华. 香水柠檬RHF2A的克隆与互作蛋白的筛选[J]. 中国农业科学, 2022, 55(24): 4912-4926.
[3]	渠成,王然,李峰奇,罗晨. 烟粉虱味觉受体基因BtabGR1和BtabGR2的克隆与表达模式分析[J]. 中国农业科学, 2022, 55(13): 2552-2561.
[4]	张莉,张楠,江虎强,吴帆,李红亮. 中华蜜蜂NPC2基因家族克隆及表达模式分析[J]. 中国农业科学, 2022, 55(12): 2461-2471.
[5]	张璐,宗亚奇,徐维华,韩蕾,孙浈育,陈朝晖,陈松利,张凯,程杰山,唐美玲,张洪霞,宋志忠. 葡萄Fe-S簇装配基因的鉴定、克隆和表达特征分析[J]. 中国农业科学, 2021, 54(23): 5068-5082.
[6]	谭永安,姜义平,赵静,肖留斌. 绿盲蝽G蛋白偶联受体激酶2基因（AlGRK2）的表达分析及在绿盲蝽生长发育中的功能[J]. 中国农业科学, 2021, 54(22): 4813-4825.
[7]	王娜,赵资博,高琼,何守朴,马晨辉,彭振,杜雄明. 陆地棉盐胁迫应答基因GhPEAMT1的克隆及功能分析[J]. 中国农业科学, 2021, 54(2): 248-260.
[8]	张伟,王世银,高莉,杨力伟,邓双义,刘晓娜,石国庆,甘尚权. 巴什拜羊不同发育阶段骨骼肌中miR-486靶基因的研究[J]. 中国农业科学, 2021, 54(14): 3134-3148.
[9]	谭永安,赵旭东,姜义平,赵静,肖留斌,郝德君. 绿盲蝽雷帕霉素靶蛋白的克隆、抗体制备及在蜕皮激素诱导下的应答[J]. 中国农业科学, 2021, 54(10): 2118-2131.
[10]	李祖任,罗丁峰,柏浩东,徐晶晶,韩进财,徐强,王若仲,柏连阳. 小飞蓬捕光叶绿素结合蛋白基因CcLhca-J9克隆及表达分析[J]. 中国农业科学, 2021, 54(1): 86-94.
[11]	周坤能,夏加发,云鹏,王元垒,马廷臣,张彩娟,李泽福. 水稻直立短穗突变体esp的转录组研究[J]. 中国农业科学, 2020, 53(6): 1081-1094.
[12]	沈静沅,唐美玲,杨庆山,高雅超,刘万好,程杰山,张洪霞,宋志忠. 葡萄钾离子通道基因VviSKOR的克隆、表达及电生理功能[J]. 中国农业科学, 2020, 53(15): 3158-3168.
[13]	陈琳,魏纪珍,刘臣,牛琳琳,张彩虹,梁革梅. 棉铃虫中肠特异性结合蛋白ABCC1对Cry1Ac毒力的影响[J]. 中国农业科学, 2019, 52(19): 3337-3345.
[14]	蒋梦婷,朱宁,龚洪泳,侯应军,余心怡,渠慎春. ‘南通小方柿’赤霉素不敏感基因DkGAI2的克隆与功能分析[J]. 中国农业科学, 2019, 52(19): 3417-3429.
[15]	刘超，王玲利，吴頔，党江波，尚维，郭启高，梁国鲁. 枇杷叶片发育基因EjGRF5与启动子克隆及其在不同倍性枇杷中的表达[J]. 中国农业科学, 2018, 51(8): 1598-1606.

PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究

PDF

赞

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

Metrics

本文评价

推荐阅读 0