中国农业科学 ›› 2010, Vol. 43 ›› Issue (1): 192-199 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.01.023
刘振勇,吕志慧,郑亚东,窦永喜,乔 军,骆学农,张 艳,景志忠,才学鹏
LIU Zhen-yong, Lü Zhi-hui, ZHENG Ya-dong, DOU Yong-xi, QIAO Jun, LUO Xue-nong,ZHANG Yan, JING Zhi-zhong, CAI Xue-peng
摘要：
【目的】克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。【方法】通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定。【结果】序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase基因与六钩蚴的dUTPase基因核苷酸同源性为100%,而且其氨基酸序列中同样存在5个保守基序。SDS-PAGE显示在21kD附近出现与目的蛋白大小相符的特异条带,表达产物经纯化后dUTPase的含量为2.863 mg?mL-1。酶学活性试验证实重组dUTPase能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dUTPase的活性;而Mg2+可以增强猪囊尾蚴dUTPase的活性。【结论】成功克隆表达了猪囊尾蚴dUTPase基因并鉴定了它的酶学活性,为进一步研究dUTPase在猪囊尾蚴中的生物学功能奠定了基础,同时也为抗猪囊尾蚴病的药物设计和开发提供了研究基础。
