中国农业科学 ›› 2006, Vol. 39 ›› Issue (11): 2396-2396 .

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油柿下胚轴培养再生植株

谢启鑫,庄东红,吴奕恒   

  1. 汕头大学
  • 收稿日期:2006-06-05 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-11-10 发布日期:2006-11-10
  • 通讯作者: 庄东红

Plant Regeneration from Hypocotyl Explants of Persimmon(Diospyros.oleifera Cheng)

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  1. 汕头大学
  • Received:2006-06-05 Revised:1900-01-01 Online:2006-11-10 Published:2006-11-10

摘要: 试验于2004~2006在广东省汕头大学生物系遗传实验室进行。供试油柿幼果6月中旬采自汕头市澄海区栽培的成年油柿树。切取油柿幼果种子,用70%酒精表面消毒30 s,0.1%升汞浸泡15 min,无菌水冲洗6次。切开种子,取出幼胚,切除胚根、胚芽和子叶,将胚轴横切几处伤口后接种于预先配好的培养基上培养。分别以MS、1/2MS、MS(1/2N)为基础培养基,添加0.05 mg•L-1IAA和2.0 mg•L-1 ZT,将胚轴接种于培养基上培养,试验基础培养基种类对不定芽再生的影响。以MS(1/2N)为基础培养基,附加不同浓度的IAA(0.01、0.05、0.1 mg•L-1)和ZT(0.5、2.0、5.0 mg•L-1),确定不同浓度的激素组合对不定芽再生的影响。以1/2MS为基础培养基,添加0.1 mg•L-1 IAA和不同浓度的ZT(0.5、2.0、5.0 mg•L-1)和BA(2.0 、5.0、10.0 mg•L-1),试验不同种类和浓度的细胞分裂素对胚轴不定芽再生的影响。培养8周后统计再生结果。所有培养基均添加0.8%琼脂、3%蔗糖和500 mg•L-1PVP,pH调至5.8后于121℃高温灭菌15 min(下同)。培养物置于28℃、光周期为12 h、光照度为60 µmol•m-2•s-1的条件下培养。 用两种方法诱导生根:一种是把再生芽基部浸入250 mg•L-1 IBA溶液中不同时间(15、30、45 s)后接种于无激素的MS(1/2N)培养基;另一种是切取再生芽直接接种于单独或组合添加了IAA(0、0.25、0.5、1.0 mg•L-1)、IBA(0、0.25、0.5、1.0 mg•L-1)、NAA(0、0.5 mg•L-1)的MS(1/2N)培养基。先暗培养9 d再移至光照下培养。 结果表明,外植体接种后逐渐从乳白色转为暗黄色,2周左右即有褐色、致密的愈伤组织形成,3周后开始出现绿色芽点。大部分不定芽形成于胚轴基部的伤口末端和侧面,而顶部较少,单个外植体最多可再生17个不定芽。试验的3种基础培养基中,MS(1/2N)效果最好,其愈伤形成率、不定芽再生率和外植体平均不定芽数分别为100%、48.3%和4.3个;MS培养基效果最差,各指标分别为90.4%、22.4%和3.5个;1/2MS的效果居于前两者之间。 在不同浓度的IAA与ZT组合中,IAA 0.1 mg•L-1与ZT 2.0 mg•L-1组合的愈伤形成率、不定芽再生率和外植体平均不定芽数分别达到100%、81.7%和5.3个,均显著高于其它组合。ZT浓度较高(大于2.0 mg•L-1)时再生率均超过40%,随着IAA浓度的增加,形成的愈伤组织也增加。ZT诱导不定芽的效果明显好于BA,BA浓度从2.0 mg•L-1升高到10.0 mg•L-1,不定芽再生率和平均不定芽数分别从20.5%和2.2个下降到0。 试验结果显示,用250 mg•L-1IBA浸泡基部30 s和45 s时生根最快,第7天即有不定根出现,但形成的不定根较细,植株生长缓慢。添加了不同浓度、不同种类生长素的培养基中,以IAA和IBA各0.5 mg•L-1的组合,再生苗生根较快,生根率和平均根数分别达到100%和3.2条,且愈伤少、侧根多、植株生长快且健壮,移栽后易成活,为本试验中的最佳组合。再生植株经炼苗后移栽,30 d时成活率达96.2%。

Abstract: Shoot regeneration and rooting from hypocotyl explants of Diospyros.oleifera Cheng were studied. The result showed that modified Murashige and Skoog(MS)[MS(1/2N)] containing 0.1 mg•L-1 indole acetic acid and 2.0 mg•L-1 zeatin was the most optimum for shoot regeneration and the shoot percentage and average shoots number per explant were 81.67% and 5.32±2.05 respectively. As for regenerated shoots rooting, the modified Murashige and Skoog containing 0.5 mg•L-1 both indole acetic acid and indole-3-butyric acid was most effective, in which rooting percentage, average roots number and length per shoot reached up to 100%, 3.17 and 2.43 centimeter respectively. There were many ateral roots at the cut ends and the plantlets growed rapidly and vigorously. After rooting, the regenerated plants were transplant in pots where 96% plants survived after one month.