摘要: 从南方红豆杉(Taxus chinensis var. mairei)愈伤组织提取总RNA,根据已发表的中国红豆杉紫杉烯合成酶cDNA序列设计两对引物,通过RT-PCR技术扩增出该酶5’端长度为1201bp和3’端长度为1388bp的两个cDNA片段,将其克隆到pGEM-T Vector上并转化到E. coli DH5α中, 5’端片段经XbaⅠ和BglⅡ双酶切鉴定,3’端片段经BglⅡ和SacⅠ双酶切鉴定后,对阳性克隆进行序列测定,证实确为紫杉烯合成酶基因。将这两个cDNA片段拼接到一起,得到全长2589 bp的紫杉烯合成酶基因,编码862个aa,与中国红豆杉紫杉烯合成酶基因具有98%的同源性。两片段与双元载体pCAMBIA1300以T4 DNA连接酶连接并转化到E. coli DH5α中,经XbaⅠ和SacⅠ双酶切鉴定,证实紫杉烯合成酶cDNA全长连接成功并插入到pCAMBIA1300中,为下一步的转基因工作做好了准备。