中国农业科学 ›› 2023, Vol. 56 ›› Issue (10): 2021-2034.doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2023.10.016
• 畜牧·兽医 • 上一篇
收稿日期:
2022-01-13
接受日期:
2022-05-23
出版日期:
2023-05-16
发布日期:
2023-05-17
通信作者:
刁有祥,Tel:13605386443;E-mail:yxdiao@163.com
联系方式:
邵震,Tel:15526836071;E-mail:1250101253@qq.com。
基金资助:
Received:
2022-01-13
Accepted:
2022-05-23
Published:
2023-05-16
Online:
2023-05-17
摘要:
【目的】经长期对中国国内各省市的规模化鹅场常见病毒性疫病核酸检出率进行调查,发现国内许多规模化鹅场均可同时检出多种病毒核酸,并且这种现象非常普遍,鉴于目前国内关于规模化鹅场多种病毒性疫病核酸同时检出的相关数据较为匮乏,论文旨在了解规模化鹅场多种病毒性疫病核酸同时检出的情况并进行分析,为规模化鹅场病毒性疫病的防控提供理论指导和科学依据。【方法】2021年5—10月,自山东、黑龙江、四川、吉林、广西、河南、安徽、辽宁、河北、贵州、湖南及内蒙古等省市的47个规模化鹅场采集737份病料,对其采用普通PCR及RT-PCR方法进行番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus, MDRV)、鸭呼肠孤病毒(duck reovirus, DRV)、鹅星状病毒(goose astroviruses, GAstV)、禽腺病毒(fowl adenovirus, FAdV)、禽网状内皮增生病毒(reticuloendotheliosis virus, REV )、新城疫病毒(newcastle disease, ND)、鹅细小病毒(goose parvovirus, GPV)、鹅圆环病毒(goose circovirus, GoCV)、鹅出血性多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus, GHPV)、坦布苏病毒(tembusu virus, TMUV)及H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus H9, H9-AIV)等11种规模化鹅场常见病毒性疫病的检测。每份病料剖取完整的肝脏、脾脏、肺脏及肾脏,利用Trizol 法提取总 RNA;以总RNA为模板逆转录合成cDNA的一条链,而后以cDNA为模板继续扩增获得完整的cDNA,随后以该cDNA为模板利用番鸭呼肠孤病毒、鸭呼肠孤病毒、鹅星状病毒、禽腺病毒、禽网状内皮增生性病毒、新城疫病毒、鹅细小病毒、鹅圆环病毒、鹅出血性多瘤病毒、坦布苏病毒及H9亚型禽流感病毒的特异性引物,通过普通PCR反应扩增目的片段;所有扩增片段均进行琼脂糖凝胶电泳,对部分阳性样品进行测序;将所获得的测序结果与GenBank上发表的相应病毒基因序列进行比较,应用MEGA 6.0软件中的邻接法(neighbor-joining, NJ)绘制系统发育进化树进行分析。【结果】番鸭呼肠孤病毒、鸭呼肠孤病毒、鹅星状病毒、禽腺病毒、禽网状内皮增生性病毒、新城疫病毒、鹅细小病毒、鹅圆环病毒、鹅出血性多瘤病毒、坦布苏病毒及H9亚型禽流感病毒感染情况检测结果显示,GAstV核酸检出率最高,为58.21%;REV及NDV核酸检出率最低,分别为1.36%及1.50%;鹅群不同程度上均可同时检出多种病毒核酸,尤其以2种或3种病毒核酸同时检出的情况较为普遍,占样品总数的67.44%。两种病毒核酸同时检出率中GAstV与GoCV同时检出所占比例最大,为18.44%;3种病毒核酸同时检出率中MDRV、GAstV及GPV同时检出所占比例最大,为36.28%。【结论】明确了我国规模化鹅场可以同时检测到多种病毒核酸这一特征,这可能是我国规模化鹅场病毒性疫病复杂化和防控难度加大的重要原因之一。
邵震, 刁有祥. 规模化鹅场主要病毒核酸检测结果与分析[J]. 中国农业科学, 2023, 56(10): 2021-2034.
SHAO Zhen, DIAO YouXiang. Investigation and Analysis of Nucleic Acid Detection Results of Viral Viruses in Large-Scale Goose Farms[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2023, 56(10): 2021-2034.
表1
引物序列"
引物 Primer | 引物序列(5′-3′) Sequences (5′-3′) | 目的片段长度 Product length (bp) | 退火温度 Annealing temperature (℃) |
---|---|---|---|
MDRV-F | CCGATTGGGCCGACATCTCAT | 1002 | 55℃ |
MDRV-R | ACTACCTCAAGTGGTCGCAA | ||
DRV-F | GGTGCGACTGCTGTATTTGGTAAC | 513 | 53℃ |
DRV-R | AATGGAACGATAGCGTGTGGG | ||
GAstV-F | ATTCTTGGCTCGGTTGTC | 489 | 53℃ |
GAstV-F | CCTGTGTTGCTCCTTCTC | ||
FAdV-F | ATGGGAGCSACCTAYTTCGACAT | 590 | 52℃ |
FAdV-R | AAATTGTCCCKRAANCCGATGTA | ||
REV-F | GAGACTCTATCAGGCTTATCGG | 369 | 55℃ |
REV-R | CAGTTCTTCTTCCAATGTCCC | ||
NDV-F | AGGGACTGAAGAGGAGGATT | 427 | 54℃ |
NDV-R | TGAGTGTGATTGTATTAGGTGG | ||
GPV-F | CCTGGCTATAAGTATCTTGG | 593 | 52℃ |
GPV-R | GTAGATGTGGTTGTTGTAGC | ||
GoCV-F | TAAATGCGAGTTTGATGTGTCT | 564 | 51℃ |
GoCV-R | CATTTAACCCCTTCCAAAGAGT | ||
GHPV-F | CAGGCAGTGACTGTTGCAACA | 459 | 55℃ |
GHPV-R | TGTGTTTTCATTCCGGGATGGG | ||
TMUV-F | CTGAAATAGCGGAAGCACT | 520 | 52℃ |
TMUV-R | AATCCCATTCTCCACTCTTGC | ||
H9-F | GGAGGTTGGTCAGGATTAGTTG | 560 | 55℃ |
H9-R | ACAAGAGATGAGGCGACAGT |
表2
病料样品信息"
取样地点 Location | 样品数量(份) Quantity of samples | 鹅的品种 Sample type | 鹅场养殖数量(只) Number of goose farms | 采集样品类型 Type of sample collected |
---|---|---|---|---|
山东 Shandong | 265 | 三花鹅、朗德鹅、霍尔多巴吉、鹅、白鹅 Sanhua goose, Langde goose, Huoerduobaji goose, White goose | 15000 | 肝、脾、肺、肾、拭子 Liver, Spleen, Lung, Kidney, Swab |
黑龙江 Heilongjiang | 145 | 籽鹅、三花鹅、霍尔多巴吉鹅、白鹅 Zi goose, Sanhua goose, Huoerduobaji goose, White goose | 13000 | 肝、脾、肺、肾 Liver, Spleen, Lung, Kidney |
四川 Sichuan | 79 | 天府肉鹅、三花鹅 Tianfu goose, Sanhua goose | 8800 | 肝、脾、肺、肾、拭子 Liver, Spleen, Lung, Kidney, Swab |
吉林 Jilin | 72 | 籽鹅、三花鹅、五龙鹅 Zi goose, Sanhua goose, Wulong goose | 12000 | 肝、脾、肺、肾 Liver, Spleen, Lung, Kidney |
广西 Guangxi | 58 | 右江鹅、合浦鹅、扬州白鹅 Youjiang goose, Hepu goose, White goose | 9000 | 拭子 Swab |
河南 Henan | 46 | 皖西白鹅、三花鹅 White goose, Sanhua goose | 13000 | 肝、脾、肺、肾 Liver, Spleen, Lung, Kidney |
安徽 Anhui | 35 | 皖西白鹅、霍尔多巴吉鹅 White goose, Huoerduobaji goose | 11000 | 肝、脾、肺、肾 Liver, Spleen, Lung, Kidney |
辽宁 Liaoning | 16 | 籽鹅、三花鹅、霍尔多巴吉鹅 Zi goose, Sanhua goose, Huoerduobaji goose | 14000 | 肝、脾、肺、肾 Liver, Spleen, Lung, Kidney |
河北 Hebei | 9 | 籽鹅、三花鹅、霍尔多巴吉鹅 Zi goose, Sanhua goose, Huoerduobaji goose | 7000 | 肝、脾、肺、肾 Liver, Spleen, Lung, Kidney |
贵州 Guizhou | 5 | 白鹅 White goose | 7000 | 肝、脾、肺、肾 Liver, Spleen, Lung, Kidney |
湖南 Hunan | 4 | 白鹅 White goose | 8000 | 肝、脾、肺、肾 Liver, Spleen, Lung, Kidney |
内蒙古 Inner Mongoria | 3 | 三花鹅 Sanhua goose | 6000 | 肝、脾、肺、肾 Liver, Spleen, Lung, Kidney |
表8
不同病原双重病毒核酸检测"
病毒 Virus | 病毒检出数量/份 Number of virus | 检出占比 Detection ratio (%) |
---|---|---|
GAstV+GoCV | 52 | 18.44 |
DRV+GoCV | 47 | 16.67 |
MDRV+GAstV | 39 | 13.83 |
FAdV+GoCV | 26 | 9.22 |
DRV+GAstV | 24 | 8.51 |
GAstV+GPV | 23 | 8.16 |
DRV+FAdV | 17 | 6.03 |
FAdV+ND | 11 | 3.90 |
MDRV+GPV | 9 | 3.19 |
MDRV+FAdV | 6 | 2.13 |
GAstV+GHPV | 5 | 1.77 |
MDRV+TMUV | 4 | 1.42 |
DRV+GPV | 4 | 1.42 |
GAstV+TMUV | 4 | 1.42 |
GAstV+REV | 3 | 1.06 |
REV+GHPV | 2 | 0.71 |
MDRV+GHPV | 1 | 0.35 |
FAdV+GPV | 1 | 0.35 |
REV+GoCV | 1 | 0.35 |
GPV+H9 | 1 | 0.35 |
GPV+GHPV | 1 | 0.35 |
GoCV+GHPV | 1 | 0.35 |
表9
不同病原三重病毒核酸检测结果"
病毒 Virus | 病毒检出数量 Number of virus | 检出占比 Detection ratio (%) |
---|---|---|
MDRV+GAstV+GPV | 78 | 25.28 |
DRV+GAstV+GPV | 20 | 9.30 |
DRV+FAdV+GoCV | 19 | 8.84 |
MDRV+DRV+FAdV | 18 | 8.37 |
MDRV+GAstV+TMUV | 14 | 6.51 |
DRV+FAdV+GPV | 14 | 6.51 |
DRV+GAstV+TMUV | 6 | 2.79 |
MDRV+GAstV+GHPV | 5 | 2.33 |
MDRV+DRV+GAstV | 5 | 2.33 |
GAstV+GPV+GoCV | 4 | 1.86 |
MDRV+GAstV+GoCV | 3 | 1.40 |
MDRV+FAdV+GPV | 3 | 1.40 |
DRV+GAstV+H9 | 3 | 1.40 |
DRV+GAstV+FAdV | 3 | 1.40 |
DRV+GAstV+GoCV | 3 | 1.40 |
GAstV+GPV+TMUV | 3 | 1.40 |
MDRV+DRV+GoCV | 2 | 0.93 |
MDRV+FAdV+GoCV | 2 | 0.93 |
DRV+GPV+TMUV | 2 | 0.93 |
MDRV+GAstV+FAdV | 1 | 0.47 |
MDRV+DRV+GPV | 1 | 0.47 |
MDRV+DRV+H9 | 1 | 0.47 |
DRV+GAstV+GHPV | 1 | 0.47 |
DRV+GPV+GoCV | 1 | 0.47 |
GAstV+GPV+H9 | 1 | 0.47 |
GAstV+GPV+GHPV | 1 | 0.47 |
GAstV+REV+GPV | 1 | 0.47 |
表10
不同病原四重病毒核酸检测结果"
病毒 Virus | 病毒检出数量 Number of virus | 检出占比 Detection ratio (%) |
---|---|---|
MDRV+DRV+FAdV+GPV | 25 | 22.52 |
MDRV+DRV+FAdV+GoCV | 13 | 11.71 |
DRV+GAstV+GPV+H9 | 12 | 10.81 |
DRV+GAstV+FAdV+GPV | 10 | 9.00 |
DRV+GAstV+FAdV+GoCV | 9 | 8.11 |
MDRV+GAstV+GPV+H9 | 8 | 7.21 |
MDRV+GAstV+GPV+GoCV | 6 | 5.41 |
MDRV+DRV+GAstV+FAdV | 6 | 5.41 |
DRV+GAstV+GPV+GHPV | 4 | 3.60 |
MDRV+GAstV+FAdV+GoCV | 3 | 2.70 |
MDRV+DRV+GAstV+GPV | 2 | 1.80 |
DRV+GAstV+FAdV+TMUV | 2 | 1.80 |
DRV+FAdV+GPV+GoCV | 2 | 1.80 |
MDRV+GAstV+FAdV+GPV | 1 | 0.90 |
MDRV+DRV+GPV+GoCV | 1 | 0.90 |
MDRV+DRV+FAdV+H9 | 1 | 0.90 |
MDRV+DRV+GAstV+GoCV | 1 | 0.90 |
MDRV+FAdV+GPV+GoCV | 1 | 0.90 |
MDRV+FAdV+GoCV+H9 | 1 | 0.90 |
MDRV+FAdV+REV+GPV | 1 | 0.90 |
DRV+FAdV+GoCV+H9 | 1 | 0.90 |
DRV+FAdV+REV+GPV | 1 | 0.90 |
表11
不同病原五重病毒核酸检测结果"
病毒 Virus | 病毒检出数量 Number of virus | 检出占比 Detection ratio (%) |
---|---|---|
MDRV+DRV+GAstV+FAdV+GPV | 8 | 33.33 |
MDRV+DRV+GAstV+FAdV+GoCV | 5 | 20.83 |
MDRV+DRV+FAdV+GPV+GoCV | 5 | 20.83 |
DRV+GAstV+FAdV+GPV+GoCV | 2 | 8.33 |
MDRV+DRV+GAstV+GoCV+H9 | 1 | 4.17 |
MDRV+DRV+FAdV+GoCV+H9 | 1 | 4.17 |
DRV+GAstV+FAdV+GPV+H9 | 1 | 4.17 |
DRV+GAstV+FAdV+REV+GPV | 1 | 4.17 |
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