金黄色葡萄球菌,Sa442基因,环介导恒温扩增,快速检测
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金黄色葡萄球菌,Sa442基因,环介导恒温扩增,快速检测
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Staphylococcus aureus,Sa442 gene,loop-mediated isothermal amplification (LAMP),rapid detection
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中国农业科学 ›› 2010, Vol. 43 ›› Issue (8): 1655-1663 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.08.014
徐义刚,李苏龙,李丹丹,姜艳春,谢晓峰
XU Yi-gang, LI Su-long, LI Dan-dan, JIANG Yan-chun, XIE Xiao-feng#br#
摘要:
【目的】金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌,主要经食品传播,引起食物中毒、组织及器官的化脓性炎症,建立快速、准确的检测方法对预防和控制金黄色葡萄球菌的传染具有重要意义。【方法】DNA环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新颖的快速、高灵敏核酸扩增技术,本研究利用该技术建立金黄色葡萄球菌LAMP检测方法。基于金黄色葡萄球菌高度保守的Sa442基因序列,设计4条特异性LAMP扩增引物,两条外引物F3和B3及两条内引物FIP和BIP,在Bst DNA Polymerase作用下,65℃恒温水浴中,对26个种类共45株细菌进行扩增,所试的20株金黄色葡萄球菌均为LAMP阳性,说明所设计的LAMP引物具有高度特异性。【结果】本LAMP方法对纯培养的金黄色葡萄球菌检测灵敏度为25 CFU/mL,对污染食品中金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为42 CFU/g,40—60 min内即可完成检测。检验检疫实践证明,利用本LAMP方法对958份肉类、蛋奶及其制品、人工污染样品等进行检测,检出115份LAMP阳性,与国标法(GB)检测结果一致。【结论】本LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。