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OsDREB1J调控水稻籽粒大小的功能研究
韦萍, 潘炬忠, 朱德平, 邵胜雪, 陈珊珊, 韦雅倩, 高维维
中国农业科学    2025, 58 (8): 1463-1478.   DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2025.08.001
摘要   (103 HTML17 PDF(pc) (3410KB)(59)  

【目的】AP2/ERF(APETALA2/ethylene responsive factor)超家族是一类对植物生长发育以及响应逆境胁迫起重要调节作用的转录因子,在植物中广泛存在,且成员众多。探究AP2/ERF家族基因在水稻籽粒大小调控中的功能,为水稻粒形改良提供重要的基因资源。【方法】通过同源重组法克隆OsDREB1JLOC_Os08g43200),利用生物信息学、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)等技术对该基因的基本特性、组织表达特性及在激素下的表达模式等进行分析;利用酵母异源表达、水稻原生质体瞬时表达、烟草瞬时表达技术分析该基因的转录活性和亚细胞定位;利用遗传转化体系获得该基因的过表达和基因敲除水稻突变体,并运用表型分析技术对其粒型进行分析。【结果】亚细胞定位结果显示,OsDREB1J定位于细胞核。生物信息学分析结果显示,该基因序列全长为711 bp,编码236个氨基酸;OsDREB1J蛋白不具有跨膜结构域,相对分子质量为27.47 kDa,理论等电点为5.54,具有AP2/ERF家族特有的AP2保守结构域。启动子元件分析发现,该基因启动子的顺式作用元件包括与激素响应、光响应、逆境胁迫响应等相关的元件。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析结果显示,OsDREB1J在水稻不同组织中均有表达,无组织特异性,但在穗中的表达量最高;同时,在不同激素处理下,OsDREB1J的表达受不同程度的诱导或抑制。转录活性分析结果显示,OsDREB1J全长无转录自激活活性,但C端是转录自激活所必需的结构域。表型分析结果表明,osdreb1j突变体的粒长、长宽比、千粒重显著高于ZH11,OsDREB1J过表达转基因水稻则相反,改变OsDREB1J的表达不影响水稻籽粒的粒宽。表明OsDREB1J可能是通过调控籽粒细胞的长度而非细胞增殖和细胞扩展来影响籽粒大小的。【结论】OsDREB1J可能通过激素信号通路调控水稻籽粒大小。


引物名称Primer name 正向引物Forward primer (5′-3′) 反向引物Reverse primer (5′-3′)
OsDREB1J-GFP ACTAGTGGATCCGGTACCATGGAGAAGAACACCACCGC CTTGCTCACCATGGTACCGCTCCACAGCTCCATTTCAG
OsDREB1J-ox TCTCTCTCAAGCTTGGATCCATGGAGAAGAACACCACCGC ATACCGTCACTAGTGGATCCGCTCCACAGCTCCATTTCAG
BD-DREB1J GCCATGGAGGCCGAATTCATGGAGAAGAACACCACCGC CCGCTGCAGGTCGACGGATCCCGCTCCACAGCTCCATTTCAG
BD-DREB1J-N GCCATGGAGGCCGAATTCATGGAGAAGAACACCACCGC CCGCTGCAGGTCGACGGATCCCGAGCAGCCAGGCGGAGTC
BD-DREB1J-C GCCATGGAGGCCGAATTCATGCACGTCCCCCGCGC CCGCTGCAGGTCGACGGATCCCGCTCCACAGCTCCATTTCAG
OsDREB1J-q CATGACCAGCTGCCCGACGT GTGACAGAACGGGCGACGAC
DREB1J-62-sk CGCCGTCTAGAACTAGTGGATCCATGGAGAAGAACACCACCGC TCGATAAGCTTGATATCGAATTCCTAGCTCCACAGCTCCATTTC
DREB1J-N-62-sk CGCCGTCTAGAACTAGTGGATCCATGGAGAAGAACACCACCGC TCGATAAGCTTGATATCGAATTCCTAGAGCAGCCAGGCGGAGTC
DREB1J-C-62-sk CGCCGTCTAGAACTAGTGGATCCATGCACGTCCCCCGCGC TCGATAAGCTTGATATCGAATTCCTAGCTCCACAGCTCCATTTC
e-EF-1α GCACGCTCTTCTTGCTTTC AGGGAATCTTGTCAGGGTTG
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表1

引物及序列表

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