中国农业科学 ›› 2008, Vol. 41 ›› Issue (11): 3728-3734 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.11.038
郭丽琼,刘二鲜,王 杰,林俊芳
摘要：
【目的】建立PEG介导的高效银耳（Tremella fuciformis）芽孢遗传转化体系。【方法】采用PEG介导的原生质体法把表达质粒pAN7-1（含有构巢曲霉gpd-An 启动子和潮霉素抗性基因hph）和pLg-hph（含香菇gpd-Le启动子和hph基因）转化进银耳芽孢的细胞中；采用夹层法在含50 µg•ml-1潮霉素的筛选培养基中初筛银耳芽孢假定转化子，之后转接于潮霉素含量为100 µg•ml-1的PDA平板上进行第2次筛选。【结果】PEG4000浓度为25%时介导的银耳芽孢原生质体初转化率最高；pLg-hph假定转化子经过PCR鉴定及Southern 杂交验证，结果表明hph基因能有效整合进银耳芽孢的基因组中，其转化率为110个/µg DNA。而pAN7-1转化子经过PCR鉴定及Southern 杂交验证，结果表明只有部分转化子基因组中整合了hph基因，其转化率只有9个/µg DNA。银耳芽孢转化子在PDSA培养基中继代5次后仍检测到hph基因的存在，表明外源基因hph能在银耳芽孢继代中稳定遗传。【结论】25%的PEG4000能高效介导银耳原生质体的转化；香菇gpd-Le启动子是银耳芽孢表达外源hph基因的强启动子；外源hph基因能够在银耳芽孢继代培养中稳定遗传。
