猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的纯化与酶学性质研究

doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.09.037

中国农业科学 ›› 2008, Vol. ›› Issue (9): 2843-2849 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.09.037

猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的纯化与酶学性质研究

福建农林大学动物科学学院动物保健研究所

收稿日期:2007-06-07 修回日期:2007-11-20 出版日期:2008-09-01 发布日期:2008-09-01
通讯作者: 黄一帆

福建农林大学动物科学学院动物保健研究所

Received:2007-06-07 Revised:2007-11-20 Online:2008-09-01 Published:2008-09-01

摘要/Abstract

摘要：

【目的】分离纯化猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂，研究其理化性质。【方法】采用硫酸铵沉淀分级分离、DEAE-32阴离子交换柱层析、Sephadex G-100分子筛柱层析和CM-52阳离子交换柱层析方法，分离纯化猪精液的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶分子量测定；采用聚丙烯酰胺等电聚焦圆盘电泳法测定酶的等电点。【结果】经分离纯化获得比活力为17 606.15 U•mg-1、纯化倍数为270.53倍的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂。酶催化对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖（pNP-NAG）水解的最适pH为5.5，最适温度为50℃。该酶在pH 3.0～8.9区域较稳定；在45℃以下处理30 min，酶活力保持稳定。酶分子中亚基的分子量为58.03 kD,等电点为9.42。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程，测得米氏常数Km为1.94 mmol•L-1，最大反应速度Vm为27.53 µmol•L-1•min-1。酶催化pNP-NAG反应的活化能为88.73 kJ•mol-1。【结论】本试验选用的分离纯化的方法是可行的。

关键词: 猪精液, N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶, 分离纯化, 酶学特性

. 猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的纯化与酶学性质研究[J]. 中国农业科学, 2008, (9): 2843-2849 .

0
/ / 推荐

导出引用管理器 EndNote|Reference Manager|ProCite|BibTeX|RefWorks

链接本文: https://www.chinaagrisci.com/CN/10.3864/j.issn.0578-1752.2008.09.037

https://www.chinaagrisci.com/CN/Y2008/V/I9/2843

[1]	蓝群,谢颖瑜,曹嘉程,薛丽娥,陈德军,饶勇勇,林瑞意,方绍明,肖天放. 咖啡酸苯乙酯通过AMPK/FOXO3a信号通路缓解猪精液常温保存氧化应激的作用机制[J]. 中国农业科学, 2022, 55(14): 2850-2861.
[2]	李宇,汪芳,翁泽斌,宋海昭,沈新春. 酶法制备大豆蛋白成骨活性肽[J]. 中国农业科学, 2021, 54(13): 2885-2894.
[3]	李杰,贾栩超,张瑞芬,刘磊,池建伟,黄菲,董丽红,张名位. 黑芝麻黑色素的分离纯化、结构表征及体外抗氧化活性[J]. 中国农业科学, 2020, 53(12): 2477-2492.
[4]	贾丰，郭玉蓉，杨曦，刘冬，李洁. 发酵苹果渣多糖分离纯化、结构及其与加工特性的关系[J]. 中国农业科学, 2017, 50(10): 1873-1884.
[5]	宋慧芳，李应龙，马恩波，张建珍. 飞蝗β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因的表达及酶学特性分析[J]. 中国农业科学, 2016, 49(21): 4140-4148.
[6]	陈思远，刘永祥，曹小舟，张逸婧，陈海娟，沈新春. 从麦胚清蛋白分离制备高活性抗氧化肽[J]. 中国农业科学, 2016, 49(12): 2379-2388.
[7]	苏东晓1, 2, 张瑞芬1, 张名位1, 黄菲1, 2, 魏振承1, 张雁1, 遆慧慧1, 邓媛元1, 唐小俊1. 荔枝果肉酚类物质大孔树脂分离纯化工艺优化[J]. 中国农业科学, 2014, 47(14): 2897-2906.
[8]	谭永安, 肖留斌, 孙洋, 柏立新. 绿盲蝽水溶性海藻糖酶ALTre-1基因原核表达、纯化与酶学特性[J]. 中国农业科学, 2013, 46(17): 3587-3593.
[9]	刘程程, 石波, 姚喜梅, 梁平, 李静梅. 制备型硅胶柱层析分离单一聚合度纤维寡糖及其测定[J]. 中国农业科学, 2011, 44(14): 2999-3006 .
[10]	陈海英,廖富蘋,林健荣 . Paenibacillus polymyxa CP7菌抗革兰氏阴性菌活性组分的分离和结构分析[J]. 中国农业科学, 2009, 42(6): 2105-2110 .
[11]	. 猪精液0.5 ml细管快速冷冻和解冻方法的优化[J]. 中国农业科学, 2009, 42(5): 1875-1880 .
[12]	张金林,徐扩,李川,马娟,董金皋. 灰葡萄孢诱变菌株毒素的除草活性研究[J]. 中国农业科学, 2005, 38(06): 1174-1181 .
[13]	@高兴祥$山东农业大学农药毒理与应用技术. 甜菜夜蛾多酚氧化酶的特性及其对曲酸等抑制剂的反应[J]. 中国农业科学, 2004, 37(05): 687-687 .
[14]	张兆旺,吴永孝. 猪精液中式稀释液筛选研究[J]. 中国农业科学, 2000, 33(2): 104-106 .

猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的纯化与酶学性质研究

PDF

赞

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 14

Metrics

本文评价

推荐阅读 0