中国农业科学 ›› 2008, Vol. 41 ›› Issue (8): 2554-2562 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.048

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猪胰腺干细胞分离与培养

  

  1. 西北农林科技大学国家干细胞生物技术中心陕西分中心
  • 收稿日期:2007-01-15 修回日期:2007-06-07 出版日期:2008-08-10 发布日期:2008-08-10
  • 通讯作者: 窦忠英

  

  1. 西北农林科技大学国家干细胞生物技术中心陕西分中心
  • Received:2007-01-15 Revised:2007-06-07 Online:2008-08-10 Published:2008-08-10

摘要: 【目的】探寻一种简单的胰腺干细胞的分离方法,以便为糖尿病的细胞治疗研究提供丰富的种子细胞。【方法】采用胰酶消化法分离获得细胞,利用仅含有5%的血清的RPMI 1640培养基培养细胞,低浓度的血清使得细胞大量死亡漂浮,只留下少数贴壁的小圆细胞。而后将血清浓度提高到15%以上继续培养;采用免疫组化方法对获得的细胞是否具有胰腺干细胞特征予以检测,并测定了细胞的生长曲线。【结果】在血清浓度提高后每个小圆细胞能快速增殖并形成一个克隆,经过这样增殖后的细胞可以连续传代,目前已传至60代。经免疫组化检测,细胞表达PDX-1、GLUT-2、vimentin等胰腺干细胞的标志;细胞也表达Glucagon、insulin、somatostatin、polypeptide等胰腺内分泌细胞的标志.【结论】通过本方法获得的细胞经检测确定为胰腺干细胞,在体外可自发分化形成胰胰内分泌部4种主要细胞。

关键词: 胎猪, 胰岛, 胰腺干细胞, 糖尿病