溶血磷脂酸( Lysophosphatidic acid, LPA)是一种小分子甘油磷脂,在多种动物细胞中具有生长因子和激素样活性。LPA通过结合G蛋白偶联受体,激活下游信号通路,产生促卵母细胞成熟,提高胚胎发育率,促进细胞增殖等生物学效应。绵羊是我国重要的家畜之一,其体外受精效率较其他物种偏低,且目前仍未建立真正的绵羊胚胎干细胞。本研究通过在绵羊体外受精过程及囊胚接种细胞培养过程中添加LPA,以探究LPA对绵羊体外受精以及囊胚接种细胞培养的影响。首先,我们对绵羊的体外受精体系进行了筛选,选取了两种成熟液与两种SOF液进行组合,通过比较不同体系间的成熟率、卵裂率和囊胚率,最终找到最优的体外受精的体系,即IVM Ⅱ and SOF Ⅱ。然后,在绵羊体外受精过程中添加不同浓度的LPA,探讨LPA浓度对绵羊体外受精的影响。结果显示,当LPA浓度为0.1 μmol L-1 - 10 μmol L-1之间时,随着LPA浓度的增加,绵羊卵母细胞体外成熟率、囊胚率逐渐上升(P < 0.05),卵裂率无显著变化(P > 0.05),囊胚形态正常;当LPA浓度达到15 μmol L-1时,成熟率、卵裂率、囊胚率均出现显著下降 (P < 0.05),且囊胚形态发生异常,胚胎内细胞团聚集不正常,囊胚内部出现分区,不能发育成为优质的囊胚。另外,随着LPA浓度在0.1 μmol L-1- 10 μmol L-1范围内逐渐增大,LPAR2、LPAR4、TE相关基因CDX-2和多能性相关基因OCT-4在绵羊早期体外受精胚胎中的mRNA表达量也逐步增加。而15 μmol L-1 LPA处理组中,早期胚胎LPAR2、LPAR4、CDX-2和OCT-4的表达量均显著低于LPA - 10 μmol L-1处理组(P<0.05)。最后,我们将绵羊体外受精囊胚接种在不同培养体系,尝试建立胚胎干细胞。 结果表明,LPA使接种后的囊胚细胞向TSC样细胞生长。随着LPA浓度从0 μmol L-1增加到10 μmol L-1, OCT-4和CDX-2的蛋白免疫荧光强度和mRNA丰度增强(P < 0.05),而15 μmol L-1 LPA则显著降低OCT-4和CDX-2在囊胚接种细胞中的表达(P < 0.05)。同时,10 μmol L-1的LPA处理后,LPAR2和LPAR4蛋白表达显著增加。综合上述实验结果,LPA可促进绵羊体外受精早期胚胎发育,并促进囊胚接种细胞向TSC方向生长,为大动物体外受精及胚胎干细胞建系提供参考。