非洲猪瘟(ASF)的持续流行严重威胁全球养猪业的健康发展。该病目前缺乏可应用于临床的疫苗和药物,因此,早期的精准检测对于ASF的有效防控至关重要。p30蛋白在病毒感染早期表达,免疫原性较好且诱导产生抗体水平较高,这些特性使其成为较为理想的非洲猪瘟病毒(ASFV)检测靶点之一。本研究以原核表达的p30蛋白为免疫原,制备了两株可稳定分泌针对ASFV p30蛋白的单克隆抗体(mAb)细胞株,分别命名为4F2和7F3。利用Western blotting和间接免疫荧光实验鉴定两株单克隆抗体均能识别病毒感染。亚型鉴定结果显示,4F2和7F3的重链分别为IgG1和IgG2b,轻链均为κ链。随后,通过原核表达一系列截短p30蛋白鉴定4F2和7F3识别的抗原表位。经5轮截短和Western blotting实验鉴定,最终确定4F2和7F3识别的最短抗原表位分别为118SFETL122和76EHQAQEEWNMILHV89。在此基础上,进一步分析两个抗原表位在不同毒株p30蛋白序列中的保守性。序列比对结果表明,GenBank数据库中所有p30蛋白序列均包含118SFETL122 ,而另一抗原表位76EHQAQEEWNMILHV89则在非洲以外地区分离的毒株中保守。本研究制备的两株单克隆抗体及鉴定的抗原表位可为检测方法的开发提供材料和基础,同时也可为病毒致病机理和免疫机制等基础研究提供工具。
本研究深入分析了在不同氮依赖黄瓜品种的叶片中CsGS1相对表达模式,并对CsGS1蛋白进行亚细胞定位。结果表明,低氮依赖品种D0328在叶片中特异性地高表达CsGS1,而高氮依赖品种D0422的叶片、茎和根中CsGS1的表达量没有明显差异。GS1蛋白定位于细胞质上,为细胞质蛋白。进一步将CsGS1转化到两个黄瓜品种D0328和D0422中,过量表达CsGS1可显著提高黄瓜植株的光合参数、植株鲜重、株高、根长、叶绿素b含量、植株总氮量以及GS活性等指标,反义表达CsGS1使这些指标水平显著降低。黄瓜CsGS1能够响应低氮胁迫,提高黄瓜植株对低氮的耐受性,因此CsGS1的高效表达可以作为提高黄瓜氮素利用效率的潜在育种目标。