甘蔗具有庞大、复杂的多倍体基因组,阻碍了其基因组学和分子标记辅助选择的研究进展。简便易用的微卫星分子标记(SSR)因其理想的遗传属性而备受关注,但由于此前缺乏高质量染色体水平的甘蔗基因组,这些标记尚未在甘蔗全基因组范围内进行开发。本研究从甘蔗高贵种和割手密种基因组中鉴定到744,305和361,638个候选SSRs。为验证这些预测SSR的可靠性,使用11份代表性甘蔗材料(包括高贵种、割手密种、大茎野生种和现代栽培种)对1,200对种间特异SSR引物的多态性进行检测。结果表明,共有660对SSR标记在这些材料中呈现为种间多态性。此外,随机选取了100对SSR标记,对39份具有代表性的甘蔗材料进行遗传多样性分析。利用100条多态性引物共获得320个等位位点,每对SSR标记的等位位点为2-7个。遗传多样性分析结果表明,这些种质资源主要分布在4个类群中,分别为I类(14份割手密种)、II类(2份高贵种)、III类(18份现代甘蔗杂交种)和IV类(5份大茎野生种)。实验结果证明了本研究中基于甘蔗基因组预测所获得的SSR分子标记的可靠性。基于实验验证的大量SSR分子标记的开发对甘蔗遗传连锁图谱构建、比较基因组分析、全基因组关联分析和分子标记辅助选择等遗传研究具有重要意义。