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冉宏标，赵丽玲，王会*，柴志欣，王吉坤，王嘉博，武志娟，钟金城*
RAN HongBiao, ZHAO LiLing, WANG Hui*, CHAI ZhiXin, WANG JiKun, WANG JiaBo, WU ZhiJuan, ZHONG JinCheng*
摘要： 【目的】拟通过腺病毒介导的超表达及siRNA干扰试验，分析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的影响，为解析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的调控机制奠定基础。【方法】采集牦牛背最长肌组织，采用酶消化法和差速贴壁法分离牦牛肌内前体脂肪细胞；构建包装lncFAM200B超表达腺病毒，设计合成其siRNA干扰序列；通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）分析lncFAM200B超表达与干扰后脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、AP2，lncFAM200B潜在靶基因SIRT1、PTEN的表达水平；采用油红O染色、甘油三酯（TAG）测定、CCK-8检测等方法检测细胞内脂滴沉积情况、甘油三酯含量变化及细胞增殖情况。【结果】从牦牛背最长肌成功分离获得肌内前体脂肪细胞；lncFAM200B超表达后，脂肪分化标志基因C/EBPα、AP2表达量显著升高（P <0.05），随着诱导分化时间的增加，lncFAM200B潜在靶基因SIRT1表达量呈先降低后升高的趋势，PTEN表达量呈现先增高后降低趋势；细胞脂滴沉积显著增加（P <0.05），且胞内形成较大脂滴；超表达4 d后，细胞内甘油三酯含量显著增加（P <0.05）。干扰lncFAM200B可显著降低脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、AP2的表达水平（P <0.05），降低细胞脂肪沉积，且诱导分化第6天细胞内甘油三酯含量显著降低（P <0.05）；干扰lncFAM200B后其潜在靶基因SIRT1呈现先升高后降低的表达趋势，PTEN则相反。CCK-8增殖实验表明，lncFAM200B超表达72 h后，细胞增殖效率显著降低（P <0.05），而干扰lncFAM200B后72 h后细胞增殖效率显著增强（P <0.05）。【结论】lncFAM200B可能通过影响脂肪分化标志基因C/EBPα和AP2，脂肪合成相关基因SIRT1和PTEN的表达从而影响牦牛肌内脂肪沉积，但其具体机制还需要进一步研究。
