牛myf6,稳定转染,成肌细胞," /> 牛myf6,稳定转染,成肌细胞,"/> bovine myf6,stable transfection,myoblasts,"/>
中国农业科学 ›› 2010, Vol. 43 ›› Issue (13): 2793-2799 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.13.020
汤展毅,严云勤,高学军,陆黎敏,朱丹丹,冀志庚
TANG Zhan-yi,YAN Yun-qin, GAO Xue-jun, LU Li-min, ZHU Dan-dan, JI Zhi-geng
摘要:
【目的】构建牛myf6基因真核表达载体,并观察myf6真核表达载体转染鲁西黄牛成肌细胞后基因的表达和细胞形态的变化。【方法】在质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点插入myf6基因构建真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6,用脂质体技术转染鲁西黄牛成肌细胞,通过G418 筛选出稳定转染的细胞株。利用Western印记、Real-time PCR技术检测成肌细胞转染前后myf6基因、肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的表达量。【结果】与对照组相比,转染质粒的成肌细胞myf6蛋白和mRNA的表达量提高(P<0.01),肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的mRNA表达量提高(P<0.01)。细胞形态观察显示成肌细胞融合为肌管。【结论】构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6能在成肌细胞中高效表达,myf6基因促进了成肌细胞向肌肉细胞分化。