中国农业科学 ›› 2008, Vol. 41 ›› Issue (11): 3626-3635 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.11.024

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转绿色荧光蛋白基因的青枯雷尔氏菌生物学特性

车建美,蓝江林,刘 波

  

  1. 福建省农业科学院农业生物资源研究所
  • 收稿日期:2007-11-16 修回日期:2007-12-28 出版日期:2008-11-10 发布日期:2008-11-10
  • 通讯作者: 刘 波

  1. 福建省农业科学院农业生物资源研究所
  • Received:2007-11-16 Revised:2007-12-28 Online:2008-11-10 Published:2008-11-10

摘要:

【目的】采用电击法对青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)进行gfp/luxAB基因双标记,研究标记前后菌株的生长差异、以及侵染性和致病性的变化。【方法】通过电击法进行青枯雷尔氏菌的遗传转化,采用番茄组培苗对标记菌株的侵染条件和侵染过程进行初步研究。【结果】成功地采用gfp/luxAB基因标记了青枯雷尔氏菌。标记后的菌体细胞形状与亲本菌株形状相同,均为长椭圆形,近杆状,整个细胞呈现绿色荧光,PCR结果表明,从标记青枯雷尔氏菌菌株的基因组DNA中扩增出约3.0 kb的gfp基因片段。标记菌在对数生长期,荧光素酶活性快速增加,到稳定期,荧光素酶活性降低。在无选择压力条件下连续移植20次,仍然保持均匀而且强烈的绿色荧光,荧光稳定性保持在100%。gfp基因标记前后的菌株在培养的最适温度、最佳pH值及生长曲线上基本一致,在番茄组培苗内的侵染路线相同,致病力均达到90%以上。【结论】将gfp和luxAB融合基因成功转入青枯雷尔氏菌,融合基因在标记菌株中的表达高效稳定。导入的gfp基因对宿主的生长特性及致病性没有影响。

关键词: 青枯雷尔氏菌, 电击法, gfp/luxAB基因