中国农业科学 ›› 2008, Vol. 41 ›› Issue (8): 2537-2545 .doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.046

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柑橘溃疡病生防菌株CQBS03的鉴定及其培养特性研究

  

  1. 重庆大学生物工程学院基因工程研究中心,重庆市基因功能及调控技术重点实验室
  • 收稿日期:2006-12-22 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-08-10 发布日期:2008-08-10
  • 通讯作者: 殷幼平

  1. 重庆大学生物工程学院基因工程研究中心,重庆市基因功能及调控技术重点实验室
  • Received:2006-12-22 Revised:1900-01-01 Online:2008-08-10 Published:2008-08-10

摘要: 【目的】筛选鉴定柑橘溃疡病菌拮抗菌,研究其培养特性及拮抗物质的初步性质,为柑橘溃疡病的生物制剂研制奠定基础。【方法】利用对峙培养法筛选对柑橘溃疡病菌具有良好抑制作用的生防菌,并通过对菌株形态、生理生化特征以及16S rDNA序列分析鉴定其分类地位;以单因素试验和正交设计方法对影响CQBS03菌株抑菌活性物质产生的各种培养条件进行优化;利用硫酸铵沉淀获得抑菌物质粗提物并测定其对温度、蛋白酶及氯仿的敏感性。【结果】经鉴定CQBS03为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。CQBS03抑菌活性成分主要存在于培养液中,能被80%饱和度硫酸铵沉淀,最高可耐受的温度范围为60~70℃;活性成分在280 nm 处有最大吸收峰,分子量大于10 kD,对蛋白酶K和胰蛋白酶稳定,而对氯仿部分敏感。培养特性研究表明,CQBS03最适培养基为YPG液体培养基,抑菌物质产生的最适培养条件为:pH 8.0左右,28℃培养72 h。【结论】枯草芽孢杆菌CQBS03所产生的抑菌物质主要成分是蛋白质,且属于外泌型蛋白;该抑菌蛋白对多种植物病原菌有抑菌作用,尤其对柑橘溃疡病菌抑菌活性高,稳定性好,是一株极具开发潜力的生防菌株。

关键词: 枯草芽孢杆菌, 拮抗细菌, 生物防治, 柑橘溃疡病, 抑菌蛋白