中国农业科学

Cre/loxP位点特异性重组系统在植物中应用的研究进展

孙家利,闫晓红,王力军,魏文辉

中国农业科学. 2010, 43(6): 1099-1107 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.001

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Cre/loxP位点特异性重组系统自发现以来,在植物基因重组领域得到了广泛应用,已成为提高转基因植物安全性的有效方法。本文介绍了该系统的基本概况及其在转基因植物表达载体构建方面的应用,尤其是在基因删除、定点整合、多基因表达以及杂种优势利用等方面的应用做了重点阐述。

小麦puroindoline及其相关基因分子遗传基础研究进展

陈锋,董中东,程西永,詹克慧,许海霞,崔党群

中国农业科学. 2010, 43(6): 1108-1116 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.002

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籽粒硬度是重要的小麦品质性状之一,对小麦的磨粉品质和加工品质有重要影响。控制籽粒硬度的主效基因puroindoline位于5D染色体的短臂上,可分为Pina和Pinb 2种类型。Pina和Pinb紧密连锁,编码区均为447个碱基,没有内含子,共同形成小麦籽粒硬度的分子遗传基础。目前,普通小麦和山羊草中均已发现多种puroindoline变异类型,其中引起小麦籽粒硬度大幅度升高的Pina-D1b类型的分子机制为从编码区第23个碱基开始缺失15 380个碱基。Puroindoline除了对小麦籽粒硬度有重要影响之外,对其它品质性状也有重要影响,不同puroindoline变异类型之间小麦品质具有一定差异。另外,与puroindoline紧密连锁的Gsp-1基因变异类型更为丰富,但对籽粒硬度没有明显的调节作用。最近发现的与puroindoline b高度同源的基因Pinb-2v具有4种类型,分别位于小麦7A、7B和7D染色体上,可能对籽粒硬度具有微效的调节作用。本文通过对puroindoline的分子特征和突变类型以及相关功能进行分析和总结,旨在为中国小麦品质的基因工程改良提供参考。

棉花咖啡酸-O-甲基转移酶基因的克隆及特征分析

倪志勇,吕萌,李波,王娟,白岩,范玲

中国农业科学. 2010, 43(6): 1117-1126 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.003

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【目的】克隆棉花木质素合成关键酶基因GhCOMT1、GhCOMT2和GhCOMT3全长cDNA序列,分析其在不同组织部位的表达情况并进行原核表达研究。【方法】根据棉花纤维特异表达cDNA文库分析得到的EST序列设计引物,采用RT-PCR技术克隆基因,用生物信息学方法对获得的cDNA序列及推定的氨基酸序列进行分析。采用半定量RT-PCR方法研究GhCOMT1、GhCOMT2和GhCOMT3在不同组织中的表达。构建了基因的原核表达载体,经酶切鉴定后转化到大肠杆菌BL21（DE3）中并诱导表达。【结果】从发育的棉花纤维中克隆了3个COMT基因cDNAs, GhCOMT1（GenBank登录号为FJ479708）、GhCOMT2（GenBank登录号为FJ479709）和GhCOMT3（GenBank 登录号为FJ848869）分别具有1 101 bp、1 098 bp、1 071 bp的开放阅读框,各自编码366、365和356个氨基酸。GhCOMT1、GhCOMT2和GhCOMT3在棉花各个组织中都有表达,GhCOMT1和GhCOMT2在根部的表达量最高,GhCOMT3在茎中表达量最高。SDS-PAGE电泳分析表明,3个蛋白的最佳诱导表达条件均为0.2 mmol•L-1IPTG在37℃下诱导6 h。【结论】从棉花中克隆了3个木质素合成关键酶基因GhCOMT1、GhCOMT2和GhCOMT3,为进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。

不同类型水稻材料成熟胚组织培养力的比较

阎丽娜,李霞,吴丹

中国农业科学. 2010, 43(6): 1127-1135 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.004

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【目的】研制适应性广的不同类型水稻成熟胚再生技术。【方法】采用生产上应用价值高的不同类型水稻品种成熟胚为外植体材料,比较研究9个粳稻、9个籼稻和11个新近培育的超级杂交稻（两系或三系）或优势组合在不同培养基中的出愈、分化和再生等组织培养力表现。【结果】以M8为基本培养基,在添加30 g•L-1蔗糖、8 g•L-1琼脂和2 mg•L-1 2,4-D（2,4-苯氧乙酸）相同成分的基础上,供试粳稻材料单独添加较低浓度的细胞分裂素,即0.3 mg•L-1 6-BA（6-苄基嘌呤）可获得较高的出愈率,出愈率在89.2%-61.7%之间;而供试籼稻材料则需在添加2 mg•L-1 6-BA和0.5 mg•L-1 KT（激动素）两种细胞分裂素的基础上,再添加1 mg•L-1 NAA（萘乙酸）生长素类激素,可明显提高出愈率,出愈率在100%-9.1%之间;而11个偏籼型超级杂交稻则表现在添加1 mg•L-1 6-BA和1 mg•L-1 KT（激动素）两种细胞分裂素,即可获得较高的出愈率,出愈率在86.3%-40%之间。在此基础上,在添加了0.5 mg•L-1 2,4-D和1 mg•L-1 6-BA的MS分化培养基（粳稻）以及0.2 mg•L-1 2,4-D和0.5 mg•L-1 6-BA（籼稻和超级杂交稻）的分化培养基上,可分别获得59.5%-9.2%（粳稻）、87.5%-3.6%（籼稻）和43.2%-17.2%（杂交稻）的植株再生率。【结论】初步建立了适合相同水稻类型成熟胚高频再生技术。

玉米生产限制因素评估与技术优先序

王崇桃,李少昆

中国农业科学. 2010, 43(6): 1136-1146 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.005

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【目的】明确中国玉米生产的主要限制因素和技术发展优先领域。【方法】采用参与式方法,对中国主产省和东北春玉米、黄淮海春、夏播玉米和西南山地玉米三大主产区生产限制因素进行评估,并基于限制因素影响程度、解决的可能性评估,建立玉米生产技术优先序。【结果】当前限制中国玉米产量潜力实现的主要因素：一是以耕作栽培管理粗放、施肥方法不科学、技术到位率低等为主的栽培管理技术问题,在不同生态区玉米产量损失占28.8%—57.7%;二是以干旱为主的自然逆境因素,产量损失占9.3%—35.1%;三是玉米品种遗传基础狭窄,品种“多、乱、杂”、缺乏高产稳产的区域主导品种,良种良法配套差以及种子质量问题,产量损失占11.4%—19.8%;四是水土流失、耕层浅、土壤瘠薄等土壤障碍因素,产量损失占4.8%—20.2%;五是病、虫、草、鼠等生物逆境危害,产量损失占4.5%—11.0%。【结论】加强“轻、简、化”栽培技术研究;选育耐密、抗逆、广适高产优质品种,并筛选确立区域主导品种;推进科技入户和玉米生产机械化,提高技术到位率是近期政府制定相关玉米生产政策时应考虑的重要领域。

美国西北部59个小麦品种（系）抗条锈病基因分子检测及对中国条锈菌系抗性鉴定#br#

白玉路,孙权,张春宇,崔娜,林凤,徐世昌,章振羽,高阳,徐晓丹

中国农业科学. 2010, 43(6): 1147-1155 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.006

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【目的】了解59份美国西北部小麦品种（系）对中国当前条锈菌流行小种的抗性水平,分析其抗病基因的存在情况,为培育中国抗条锈病新品种提供资源和依据。【方法】选用中国小麦条锈菌优势小种条中31号、条中32号和条中33号对大部分具有高温成株抗性的美国59份小麦品种（系）苗期及成株期进行抗性接种鉴定,利用与当前有效的全生育期抗性基因Yr10、Yr15、成株抗性基因Yr18、高温成株抗性基因Yr39紧密连锁的分子标记对供试材料进行分子检测。【结果】抗性鉴定表明,Expresso、02W50076、ACS52610、WA008012、WA008018等5份材料苗期与成株期对条中31号、条中32号和条中33号混合菌均表现为抗病,属于全生育期抗病品种。 33份材料苗期表现感病而成株期表现抗病,属于成株期抗病品种。分子检测发现59份材料均不含有Yr10;含有Yr15、Yr18和Yr39的材料分别为12、33和29份,占20%、56%和49%。【结论】Yr18、Yr39在美国西北部小麦品（系）中的分布较普遍,并且大部分可以抵抗中国当前流行的条锈菌生理小种,可应用这些抗性材料配制中国小麦抗条锈病新品种。

小麦条锈菌一个产孢相关基因PsCon1的克隆及表达特征分析

陈玥颖,郭军,代西维,段迎辉,魏国荣,黄丽丽,康振生

中国农业科学. 2010, 43(6): 1156-1163 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.007

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【目的】克隆小麦条锈菌产孢相关基因PsCon1,分析其在病菌不同发育时期的表达水平。【方法】利用RT-PCR和PCR技术克隆PsCon1的cDNA序列和基因组序列,采用生物信息学技术预测分析该基因的DNA序列结构及其编码蛋白的保守域等基本特性,运用实时荧光定量RT-PCR技术分析PsCon1在夏孢子,芽管以及不同侵染时间的表达水平。【结果】PsCon1由3个外显子和2个内含子构成,开放阅读框长为252 bp,编码83个氨基酸;编码的蛋白PSCON1不含跨膜区,无信号肽,定位在细胞质,具有2个conidiation-specific protein 6保守结构域。PsCon1与小麦秆锈菌核苷酸序列的一致性在外显子区为78%,内含子区为43%,与小麦秆锈菌（Puccinia graminis）的亲缘关系最近,与烟曲霉（Aspergillus fumigatus）和费氏新萨托（Neosartorya fischeri）的亲缘关系次之。PsCon1在小麦条锈菌萌发夏孢子时期基因表达量为新鲜夏孢子中的1.69倍。在亲和组合中,PsCon1在小麦条锈菌接种小麦后6 h和24 h表达量最高,分别为在新鲜夏孢子中表达量的3.21倍和2.91倍;在接种后24 h至168 h,基因表达基本呈下调趋势,在接种后168 h的表达量最低,仅为夏孢子时期的0.0004倍,在接种后216 h和264 h,表达量有所增加,表达量约为接种后168 h的15倍。在非亲和组合中,PsCon1在小麦条锈菌接种小麦后36 h表达量最高,但仅为新鲜夏孢子基因表达量的0.13倍,基因表达总体呈下调趋势。【结论】PsCon1参与了小麦条锈菌对小麦的侵染,可能作为一个致病相关基因影响了条锈菌芽管和吸器的形成,同时促进了条锈菌在侵染过程中的产孢。PsCon1的克隆为进一步研究该基因在小麦与条锈菌互作过程中的功能奠定了基础。

好气和淹水处理间苏南水稻土有机碳矿化量差异的变化特征#br#

郝瑞军,李忠佩,车玉萍

中国农业科学. 2010, 43(6): 1164-1172 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.008

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【目的】探讨好气与淹水处理间水稻土有机碳矿化量差异的变化特征。【方法】采集江苏省常熟市全市范围的代表性水稻土样品并布置室内好气与淹水处理的恒温培育试验,观测土壤有机碳矿化的动态过程及矿化量变化,比较分析不同水分状况处理的土壤有机碳矿化量差异及形成机制。【结果】培养过程中不同水分状况处理下土壤有机碳日均矿化量变化趋势有显著差异,好气处理下培养前期迅速下降,而淹水处理下则迅速升高,并均在培养10 d后趋于稳定;好气与淹水处理间有机碳日均矿化量差异主要表现在培养前期,随培养时间延长而不断减小,以致培养后期差异不明显。好气处理下土壤的基础呼吸强度、有机碳日均矿化量和累计矿化量分别是淹水处理的2.26—19.11、0.96—2.41、0.96—2.41倍。统计分析表明,土壤中微生物生物量碳、氮含量越高则好气与淹水处理间呼吸强度差异越大,而若土壤中微生物生物量氮、水溶性有机碳含量越高则好气与淹水处理间土壤有机碳日均矿化量差异越大。【结论】淹水处理造成土壤微生物活性降低是导致土壤呼吸强度下降的主要原因,而在整个培养过程中土壤有机碳矿化量的变化还与水溶性有机碳含量有关。

长期不同培肥处理对土壤有机氮组分及氮素矿化特性的影响

王媛,周建斌,杨学云

中国农业科学. 2010, 43(6): 1173-1180 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.009

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【目的】揭示长期不同培肥处理对黄土高原南部土垫旱耕人为土（土）土壤有机氮组分、氮素矿化的影响以及有机氮组分对氮素矿化潜力的贡献。【方法】采用Stanford和Smith间歇淋洗好气培养法测定了土19年长期不同施肥处理土壤矿化氮的数量,并采用Bremner法测定了培养前、后土壤有机氮各组分含量的变化。【结果】各处理土壤有机氮各组分含量高低顺序为：氨基酸氮＞非酸解氮＞酸解未知氮＞氨态氮＞氨基糖态氮。与不施肥对照相比,长期单施化肥处理土壤有机氮各组分含量有不同程度的增加,但幅度有限;化肥配施秸秆或有机肥处理显著提高了各有机氮组分含量,其中以氨基酸氮含量增加幅度最大;化肥配施秸秆或有机肥处理降低了酸解有机氮占全氮的比例。化肥长期配施有机肥或秸秆,显著提高了土壤氮素矿化势（N0）以及矿化率,其中化肥配施有机肥土壤N0大于化肥配施秸秆处理。相关分析表明,土壤氮素矿化势N0与培养前后土壤氨基酸氮变化量间呈显著负相关关系(P＜0.05),与土壤酸解未知态氮和非酸解氮的变化量间的负相关关系未达显著水平（P＞0.05）。【结论】化肥配施有机肥或秸秆,是提高土壤供氮潜力的有效手段;氨基酸氮是土壤可矿化态氮的主要贡献者。

外源钙施用时期对缓解盐胁迫番茄幼苗伤害的作用

杨凤军,李天来,臧忠婧,鲁少尉

中国农业科学. 2010, 43(6): 1181-1188 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.010

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【目的】探讨钙施用时期对提高番茄耐盐性的作用。【方法】以番茄辽园多丽为材料,研究不同时期（提前3 d、同时、延后3 d）营养液增施Ca2+（10 mmol•L-1）对NaCl（100 mmol•L-1 ）胁迫下番茄幼苗的生物量、外渗电导率、相对含水量、脯氨酸含量、可溶性糖含量、丙二醛含量、Ca2+-ATPase活性的影响,探讨Ca2+对盐胁迫伤害的缓解作用。【结果】在各处理中,100 mmol•L-1NaCl（T2）胁迫条件下,番茄幼苗的生长较对照（T1）显著受到抑制,上述相关生理代谢受到影响;提前3 d（T5）营养液增施钙,在NaCl胁迫时停止增施钙,结果对缓解盐胁迫伤害无显著作用;在NaCl胁迫情况下同时增施10 mmol•L-1CaCl2（T3）,显著缓解了盐胁迫对番茄幼苗的伤害,但提前3 d增施钙处理（T4）,未能进一步显著增强这种缓解作用。【结论】盐胁迫同时增施外源Ca2+具有显著缓解NaCl盐胁迫对番茄幼苗伤害的作用,但盐胁迫之前增施外源Ca2+不具备这种作用,可见外源钙提高番茄耐盐性不是诱导效应,而主要是与Na+共存的离子竞争效应。

苹果叶片的高光谱特征及其色素含量监测

朱西存,赵庚星,王瑞燕,董芳,王凌,雷彤

中国农业科学. 2010, 43(6): 1189-1197 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.011

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【目的】分析苹果叶片的高光谱特征,探索建立苹果叶片色素含量的高光谱监测模型,以促进高光谱技术在苹果长势监测中的应用。【方法】通过方差分析方法,分析苹果春梢和秋梢停止生长两个时期功能叶片的不同部位、不同含水率、不同品种的高光谱特征。利用相关分析方法,研究高光谱参数与叶片色素含量间的关系,并建立基于光谱参数的叶片色素含量监测模型。【结果】在760—1 300 nm的近红外波段,叶片光谱反射率后部低、前部高、中部居于二者之间;随着叶片含水率降低,光谱反射率逐渐增大;不同品种的叶片,光谱反射率差异显著。光谱参数R800/R550、红边面积Sr和绿峰反射率Rg与叶片色素含量之间有较好的相关性,并分别建立了色素含量监测模型。其中以Sr建立的Chl a、Chl（a+b）、Car含量监测模型和以R800/R550建立的Chl b含量监测模型为最佳。经均方根误差（RMSE）和相对误差（RE%）指标测试表明,模型能较好地监测苹果叶片色素含量。【结论】用红边面积Sr和波段组合R800/R550来监测苹果叶片色素含量效果较好,为苹果长势遥感监测提供了理论依据。

云南省主要野生食用菌中重金属调查

黄晨阳,陈强,赵永昌,张金霞

中国农业科学. 2010, 43(6): 1198-1203 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.012

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【目的】调查云南主要野生食用菌中砷（As）、镉（Cd）、汞（Hg）、铅（Pb）的背景值,研究不同种类野生食用菌的重金属富集规律,为野生食用菌食品安全评估提供科学依据。【方法】在云南省25个县采集茶褐牛肝菌(Boletus brunneissimus)、皱皮疣柄牛肝菌(Boletus duriusculus)、美味牛肝菌（Boletus edulis）、白牛肝菌(Boletus granulatus)、灰褐牛肝菌（Boletus griseus）、华丽牛肝菌（Boletus magnificus）、鸡油菌（Cantharellus cibarius）、梭柄松苞菇（Catathelasma ventricosum）、变绿红菇（Russula virescens）、鸡菌（Termitomyces albuminosus）、干巴菌（Thelephora ganbajun）、松茸（Tricholoma matsutake）等12种野生食用菌共165个鲜样,分别采用硝酸-高氯酸湿式消解法和高压消解法对As、Cd、Hg、Pb含量进行测定。【结果】不同种类的野生食用菌中As、Cd、Hg、Pb含量存在差异。其中,As平均含量为0.055—0.515 mg•kg-1,最高的是松茸,最低的是华丽牛肝菌;Cd平均含量为0.039—1.280 mg•kg-1,最高的是鸡菌,最低的是茶褐牛肝菌;Hg平均含量为0.015—0.608 mg•kg-1,最高的是美味牛肝菌,最低的是干巴菌;Pb平均含量为0.272—1.782 mg•kg-1,最高的是鸡菌,最低的是白牛肝菌。【结论】在这12种食用菌中,不同种类的野生食用菌As、Cd、Hg和Pb含量存在显著差异。

面粉品质与饺子皮品质性状间的关系

兰静,傅宾孝,Esey Assefaw,王乐凯,李辉,戴常军, 赵琳,李宛,赵乃新,李哲滨,苏萍

中国农业科学. 2010, 43(6): 1204-1211 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.013

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【目的】明确面粉特性对饺子皮品质的影响,为改良饺子皮品质提供理论依据。【方法】选用中国和加拿大小麦品种及澳大利亚和美国商业小麦及中国商业面粉共计15份样品,进行面粉理化指标、直链淀粉含量、快速黏度仪（RVA）等参数测定,并对饺子皮品质进行感官评价。【结果】形成时间、稳定时间、拉伸面积等参数与生饺子皮色泽呈显著正相关（r分别为0.60、0.55、0.47,P＜0.05）,与熟饺子皮弹性呈显著负相关（r分别为-0.55、-0.59、-0.48,P＜0.05）;最大拉伸阻力与生饺子皮色泽、熟饺子皮表观和黏性呈极显著正相关（r分别为0.64、0.72、0.67,P＜0.01）,与熟饺子皮弹性和硬度评分呈极显著负相关（r分别为-0.81和-0.72,P＜0.01）。淀粉含量与饺子皮的黏性呈极显著负相关（r=-0.68,P＜0.01）,直链淀粉含量与饺子皮的弹性呈显著负相关（r=-0.60,P＜0.05）,最低黏度、最终黏度及峰值时间显著影响饺子皮黏性（r分别为0.61、0.54、0.53,P＜0.05）,稀懈值显著影响饺子皮的硬度（r=0.58,P＜0.05）。【结论】面团强度指标对饺子皮弹性和硬度评分具有负向作用,对饺子皮外观起正向作用。高淀粉含量能降低饺子皮硬度和黏性,直链淀粉含量越低,饺子皮弹性越好。

1-MCP和DPA对砀山酥梨黑皮病的抑制效果

惠伟,牛瑞雪,宋要强,李德英

中国农业科学. 2010, 43(6): 1212-1219 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.014

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【目的】探讨1-MCP和DPA对砀山酥梨黑皮病的抑制效果及其可能的机理,为梨的黑皮病控制提供技术参考和理论依据。【方法】以砀山酥梨为材料,在果实冷藏（2±0.5℃）前,分别采用1 000μL•L-1、2 000μL•L-1的DPA溶液浸泡1 min和0.5μL•L-1的l-MCP气体处理12 h,定期对果实部分采后生理指标进行测定,并在贮藏末期对其黑皮病发病情况进行观察统计。【结果】1 000μL•L-1、2 000μL•L-1的DPA溶液和0.5μL•L-1 1-MCP处理,显著地抑制了果皮α-法尼烯、共轭三烯、总酚、MDA的含量、细胞膜透性的增加和PPO活性的升高,并极其显著地抑制了果实在贮藏期黑皮病的发生,延迟了其在货架期的发病。【结论】采后适宜浓度的1-MCP和DPA处理,均能显著地抑制和延缓砀山酥梨冷藏期和货架期黑皮病的发生,但二者的作用机理可能不同。

伽师瓜采后生理、贮期病害及贮藏保鲜技术

张有林,张润光,孙刚,陈婷

中国农业科学. 2010, 43(6): 1220-1228 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.015

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【目的】研究伽师瓜采后生理和贮期病害,探讨贮藏保鲜技术。【方法】以新疆伽师瓜为试材,研究采后呼吸类型和贮期主要病害,探讨贮藏温度、pH、噻苯咪唑（TBZ）熏蒸、壳聚糖涂膜对伽师瓜贮期品质和主要病害黑斑病的影响,测定TBZ和壳聚糖处理后伽师瓜多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）、果胶酶（PE）和过氧化氢酶（CAT）的活性变化。【结果】伽师瓜为呼吸跃变型果实,贮期病害黑斑病病原菌为丛梗孢科（Moniliaceae）青霉属（Penicillium LK, ex Fries）鲜绿青霉（P. viridicatum Westling）,TBZ熏蒸和壳聚糖涂膜对PPO、POD、PE酶活性和病原菌抑制作用显著。伽师瓜采后先用TBZ熏蒸,再用pH 5.0、浓度为5mg•mL-1的壳聚糖溶液涂膜,在0.5—1.5℃的温度下贮藏105 d,腐烂指数0.15,商品果率95%。【结论】TBZ和壳聚糖是伽师瓜良好的保鲜剂,结合适宜的pH和贮藏温度保鲜效果理想。

母猪哺乳期蛋白限饲对子代血脂水平、肌内脂肪含量及H-FABP基因表达的影响

张宏宇,单安山,徐林,李建平,程宝晶

中国农业科学. 2010, 43(6): 1229-1234 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.016

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【目的】本试验旨在研究哺乳期母猪蛋白限饲对子代血脂水平、肌内脂肪含量及H-FABP基因表达的影响。【方法】选取胎次、体重相近（180±5 kg）、经同期纯种繁育的民猪及长白猪妊娠母猪12头（民猪和长白猪各6头）。将每个品种母猪随机分为2组,每组3个重复,每个重复1头母猪。供试母猪妊娠期营养水平相同,哺乳期对照组日粮蛋白水平为18%,限饲组蛋白水平为9%。在子代猪断奶（28 d）和出栏（180 d）时测定血清中血脂水平、背最长肌中肌内脂肪含量及心脏脂肪酸结合蛋白（H-FABP）基因相对表达量。【结果】母猪哺乳期蛋白限饲显著提高了长白猪子代28 d时血清总胆固醇（CHO）含量（P＜0.05）,对180 d子代影响不显著;有提高长白猪子代28 d及180 d时血清甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）,降低高密度脂蛋白（HDL）含量的趋势,但差异不显著;民猪限饲组子代28 d及180 d时血清中CHO、TG和LDL含量高于对照组,HDL含量低于对照组,但差异均不显著。母猪哺乳期蛋白限饲显著提高了长白猪子代28 d时肌内脂肪含量及H-FABP mRNA 相对表达量（P＜0.05）,对180 d子代也有一定程度的提高,且有提高民猪子代28 d和180 d肌内脂肪含量及H-FABP mRNA相对表达量的趋势,但差异均不显著。【结论】母猪哺乳期蛋白限饲可对子代早期脂肪沉积产生不同程度的母体效应,但这种影响随着日龄的增加而减弱,存在补偿效应,且猪种间表现出一定的差异。

表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒对小鼠免疫原性的研究

展小过,乔传玲,杨焕良,陈艳,孔维,辛晓光,陈化兰

中国农业科学. 2010, 43(6): 1235-1241 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.017

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【目的】构建一株表达H3N2亚型猪流感病毒（SIV）HA基因的复制缺陷型重组腺病毒,并测定其对小鼠的免疫效力。【方法】以含有SIV A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)HA基因的重组质粒pMD18-H3HA为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增HA基因,将其亚克隆入质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有H3HA及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP。利用脂质体转染方法将穿梭质粒pDC315-H3HA-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选重组腺病毒rAd-H3HA- EGFP。将重组病毒rAd-H3HA-EGFP以108TCID50两次接种6周龄的Balb/c小鼠,时间间隔为3周,通过检测免疫小鼠的抗体水平及对病毒攻击的保护情况评价该重组病毒的免疫原性。【结果】HA基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物性活性。重组腺病毒rAd-H3HA-EGFP经增殖、纯化后其TCID50可达1.58×1010•mL-1,以108 TCID50的剂量免疫小鼠后,能够诱导产生高水平的特异性抗体,并对H3亚型SIV的攻击提供有效保护。【结论】构建了一株具有良好免疫原性的复制缺陷型重组腺病毒,为H3亚型SI活载体疫苗的研制奠定了基础。

以合成肽为抗原建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测ELISA试剂盒#br#

杨继飞,杨苏珍,杨艳艳,职爱民,赵东,郅玉宝,邢广旭,邓瑞广,柴书军,张改平

中国农业科学. 2010, 43(6): 1242-1247 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.018

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【目的】建立合成多肽抗原检测FMD NSP 抗体的 ELISA 方法。【方法】固相法合成特异性FMDV NSP B细胞表位肽,将其偶联在BSA载体蛋白上,作为抗原包被在ELISA板上,制备检测抗FMDV NSP抗体的ELISA 试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。【结果】抗原包被浓度选择2.5μg•mL-1; 检测199 份血清标本,与美国UBI商品试剂盒符合率达到96.48%,与国产3ABC ELISA比较,符合率为97.48%,显示极好的一致性。【结论】该合成肽ELISA试剂盒可以用以检测NSP抗体,从而鉴别FMD的自然感染与疫苗免疫,试剂盒特异性强,重复性好、稳定性高,操作简便。

复方益母生化散对奶牛子宫内膜细胞CYP450表达和免疫功能的影响

杜金梁,秦建华,褚景生,徐丽娜,马玉忠

中国农业科学. 2010, 43(6): 1248-1254 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.019

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【目的】探讨复方益母生化散对奶牛子宫内膜炎的作用机理。【方法】体外实验：分离奶牛子宫内膜细胞,细菌脂多糖（LPS）诱导子宫内膜细胞炎症模型,复方益母生化散处理子宫内膜炎症细胞48 h、72 h,Western blotting法检测CYP450的表达;体内实验：复方益母生化散栓剂治疗患有子宫内膜炎的奶牛,检测血清中IgG、IgA含量的变化。【结果】复方益母生化散处理后,子宫内膜炎症细胞CYP450的表达随复方益母生化散剂量的增加而呈升高的趋势,血清中IgG、IgA的含量与对照组相比明显升高。【结论】2 000 µg•mL-1的复方益母生化散作用奶牛子宫内膜炎症细胞48 h,CYP450的表达最明显。

鸡白细胞介素-1β基因内含子1、2多态与部分免疫性状的相关性分析#br#

王存波,常国斌,周琼,廖菁,龚琳琳,陈蓉,胡国顺,雷黎丽,张海波,王克华,包文斌,陈国宏

中国农业科学. 2010, 43(6): 1255-1264 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.020

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【目的】以白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）基因为候选基因,研究其单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）,及其与部分免疫性状的关系。【方法】根据红色原鸡IL-1β基因序列设计引物一对,利用PCR-SSCP方法检测了如皋鸡、文昌鸡以及安卡鸡IL-1β基因内含子1、2的SNP,同时检测了56日龄的血清IL-1浓度、异嗜性粒细胞/淋巴细胞（heterophil/lymphocyte,H/L）值、绵羊红细胞（sheep red blood cell,SRBC）抗体滴度、新城疫（newcastle disease,ND）抗体滴度、禽流感（avian influenza,AI）抗体滴度5个免疫性状, 并进一步分析了SNP位点与免疫性状的关系。【结果】共检测出6个SNP位点,分别为T107G突变、T130A突变、C143T突变、A208C突变、T241G突变及T274C突变。经关联分析,发现107、208、241及274位点存在显著的基因型效应（P＜0.05或P＜0.01）,基因型组合对H/L值及ND抗体滴度两个性状上存在显著效应（P＜0.05）。【结论】241位点突变型个体3个免疫性状均优于野生型,有望在鸡的抗病育种中筛选为新的标记位点。利用基因型组合选择效果优于对单个位点的选择。

保水剂对烤烟光合特性日变化的影响

赵铭钦,赵进恒,张迪,韩富根,张广富,李元实,金洪石

中国农业科学. 2010, 43(6): 1265-1273 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.021

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【目的】探讨保水剂对烤烟光合特性的影响,在保水剂不同施用量条件下,对烤烟净光合速率及其生理生态因子日变化进行研究。【方法】利用LI-6400便携式光合测定系统测定烤烟光合指标日变化,并采用Excel2007和SPSS13.0对试验数据进行方差分析、相关分析和通径分析。【结果】4个处理的净光合速率（Pn）、气孔导度（Gs）和蒸腾速率（Tr）日变化均为单峰曲线,峰值多出现在9：00或11：00,没有“午休现象”;随保水剂施用量的增加,烟叶的光合能力总体上逐渐增强;未施保水剂的烟株净光合速率主要受蒸腾速率和大气相对湿度的影响,施用保水剂的烟株净光合速率主要受气孔导度和大气相对湿度的影响。【结论】保水剂可以增强烟叶的光合能力;4个处理以保水剂施用量为45 kg•hm-2的光合能力最强;延边雨季为土壤提供了充足的水分,这是烤烟成熟期没有“午休”现象的主要原因;保水剂主要是通过调节烟叶的气孔导度,进而影响其净光合速率。

提高超级杂交稻库容量的施氮数量和时期运筹

石丽红,纪雄辉,朱校奇,李洪顺,彭华,刘昭兵

中国农业科学. 2010, 43(6): 1274-1281 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.022

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【目的】探索提高超级杂交稻库容量的氮素优化措施,对于提高氮肥利用效率和实现超级杂交稻养分高产高效具有重要现实意义。【方法】以具有代表性的超级杂交稻品种Y两优1号为材料,通过不同氮素施用量（基、穗施氮比例80﹕20下施氮量为0-270 kg•hm-2）与施用时期运筹（施氮量180 kg•hm-2下基、蘖、穗、粒不同施氮比例）的田间试验结合水稻主要生长性状调查和数学回归方法,分析构建超级稻最大库容量的指标及其氮素优化措施。【结果】施氮量与超级杂交稻有效分蘖（穗）线性相关,与穗实粒数、总实粒数和产量二次抛物线相关;基、穗施氮比例80﹕20条件下超级杂交稻施氮量为215.6 kg•hm-2时,单位面积总实粒数最大;施氮量为245.9 kg•hm-2时,产量达到最高（11.42 t•hm-2）。基、穗两时期施氮比例为60﹕40,以及进一步分配为基、蘖、穗、粒施氮比例10﹕50﹕25﹕15时,超级杂交稻的穗实粒数、总实粒数和产量显著增加,在减少施氮65.9 kg•hm-2基础上,可分别比基-穗施氮比例80﹕20条件下,施氮－产量模拟方程求得的最高产量增加2.01%、2.89%。【结论】通过减少基肥氮比例、增加蘖肥氮和穗粒肥氮比例等氮后移的优化措施,可提高分蘖数、增加成穗率和穗实粒数,从而显著提高最大库容量（总实粒数）和产量,充分发挥品种的产量潜力,并有效减少施氮量。

大豆菌核病田间快速接种鉴定方法研究

韩广振,韩粉霞,孙君明,于绍轩,葛一楠,闫淑荣,杨华

中国农业科学. 2010, 43(6): 1282-1287 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.023

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【目的】在大田环境下建立快速有效的大豆菌核病田间接种鉴定方法,为大豆抗菌核病育种服务。【方法】采用收集不同地区和寄主来源的菌核病分离物,经PDA培养基再生培养,再接种麦粒形成麦粒接种体,利用微创结合锡箔纸捆绑麦粒接种体的方法建立大豆菌核病田间接种鉴定方法。【结果】不同大豆种质间的病情指数和病斑长度存在显著差异,不同分离物间的病情指数和病斑长度也存在显著差异,而重复间的病情指数和病斑长度差异不显著,病斑长度与病情指数呈极显著正相关(r = 0.8301,P＜0.0001)。【结论】该大豆菌核病田间接种鉴定方法能够有效地对大豆菌核病分离物的致病性和大豆植株抗性进行鉴定和筛选,可用于大豆抗菌核病育种。

环介导等温扩增技术检测菊花中番茄不孕病毒

刘佳,黄丛林,吴忠义,张秀海,王永勤

中国农业科学. 2010, 43(6): 1288-1294 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.024

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摘要:[目的] 环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）是一种特异、灵敏、快速的新型基因检测技术。本研究拟用该新型技术建立菊花番茄不孕病毒的检测方法。[方法]针对靶基因的6 个区域设计4 种特异引物，对LAMP反应的MgCl2、dNTPs、甜菜碱、内引物、外引物各个成分进行了优化；建立利用LAMP技术快速检测菊花番茄不孕病毒的技术体系；比较LAMP和RT-PCR两种不同方法的灵敏度，并用该方法检测。 [结果] 建立了菊花番茄不孕病毒LAMP的检测方法；LAMP与RT-PCR相比具有灵敏度高、快速、简便等优点。 [结论] LAMP是在等温条件下进行，具有时间少，成本低，特异性高，检测方法多等优点；适于生产上推广使用。

雌雄同株黄瓜单性结实性遗传分析

闫立英,娄丽娜,李晓丽,娄群峰,冯志红,陈劲枫

中国农业科学. 2010, 43(6): 1295-1301 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.025

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【目的】分析雌雄同株黄瓜单性结实性的主基因+多基因混合遗传特点,为选育强单性结实雌雄同株黄瓜品种提供理论依据。【方法】通过强单性结实雌雄同株黄瓜自交系‘6457’与非单性结实自交系‘6429’和‘6426’构建的6个世代群体,应用植物数量性状主基因+多基因联合分离分析方法,分析不同遗传背景和季节雌雄同株黄瓜单性结实性遗传表现。【结果】雌雄同株黄瓜单性结实性遗传受2对主基因+多基因控制（E-1-0,E-1-2）。两主基因的加性效应值均较大,B1、B2、F2主基因遗传率分别为72.2%—88.8%、52.5%—93.1%、88.6%—95.4%,相应的多基因遗传率分别为0—11.2%、0—43.1%、0—1.5%。【结论】强单性结实性雌雄同株黄瓜品种选育以双亲均为强单性结实为宜,常规杂交育种早期世代选择有效。

基于AFLP的菊属、亚菊属及其近缘属的属间关系

赵宏波,缪恒彬,吴国盛,陈发棣,郭维明

中国农业科学. 2010, 43(6): 1302-1313 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.026

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【目的】由于研究材料、地理分布等条件的限制,菊属（Dendranthema）、亚菊属（Ajania）及其近缘属的属间关系未得到很好解决。核糖体ITS区和叶绿体trnL/trnF间区等相关分子序列解析用于研究植物系统进化具有较大优势,但在菊属及其近缘属等相关类群间存在信息位点低的问题,而AFLP标记以其高多态性的优点在亲缘关系很近类群的系统演化研究中表现出一定的优势,因此本研究利用AFLP技术对菊属、亚菊属及其近缘属的属间关系进行研究,旨在分析和探讨菊属、亚菊属及其近缘属的系统关系,同时为菊花（D. ×grandiflorum）等材料的遗传育种提供参考。【方法】利用9对荧光标记引物对东亚蒿亚族菊属、亚菊属及其近缘类群共50个分类单元进行AFLP分析,同时分别利用SPSS 11.0软件采用非加权平均数UPGMA 方法和PAUP* 4.0 b10软件采用最大简约法进行聚类分析。【结果】AFLP分析共获得1 695个多态性条带。根据相似性系数,无论是整个蒿亚族及其近缘类群内部,还是菊属、亚菊属内部,均表现出较高的遗传多样性,种间分化明显。【结论】无论是UPGMA聚类分析结果还是构建的最大简约树,AFLP结果均将菊属和Arctanthemum先聚为一亚分支,各自形成两个种群,各自种群包含亚菊属的个别类群;亚菊属的大部分类群和太行菊属（Opisthopappus）形成另一亚分支,与菊属亚分支互为姐妹群形成菊属-亚菊属大分支。这说明菊属和亚菊属可能是由共同的祖先类群平行演化而来,其中亚菊属的多花亚菊（A. myriantha）、铺散亚菊（A. khartensis）等与菊属亲缘关系较近,而原产日本的矶菊（A. pacifica）、盐菊（A. shiwogiku）等是亚菊属中较进化类型;太行菊属的系统地位可能更接近于蒿亚族;短舌菊属（Brachanthemum）则被排除于菊属群之外。柳叶亚菊（A. salicifolia）、异叶亚菊（A. variifolia）等应从亚菊属中分离出来,支持单列成栎叶菊属（Phaeostigma）。

温汤处理种球对亚洲百合幼苗耐热性的影响

刘雪凝,杨利平,马川,向地英

中国农业科学. 2010, 43(6): 1314-1320 . doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2010.06.027

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【目的】研究温汤处理种球对亚洲百合幼苗耐热性的影响。【方法】以亚洲百合‘多安娜’（Pollyanna）为试材,研究种球在45℃下,经历不同时间梯度（0、10、20、30、40、50 min）温汤处理后,其幼苗抗性生理指标及电阻抗图谱参数对38℃胁迫的反应。【结果】种球热锻炼20 min,植株SOD活性及可溶性糖含量分别高于对照51.41%（P＜0.01）和23.45%（P＜0.01）,根系活力比对照增加57.11%（P＜0.01）,弛豫时间与对照无显著性差异;处理30 min后,SOD活性及可溶性糖含量分别达到峰值,但与处理20 min差异不显著,且根系活力下降至低于对照。【结论】种球温汤处理20 min显著提高亚洲百合‘多安娜’幼苗耐热性。

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