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1. 含CpG序列PRRSV ORF5基因真核质粒构建及其免疫原性的研究

温建新,李俊,周顺,任慧英,刘文华,邹玲,徐文,牛钟相,王金宝,吴家强

2008, 41 (5): 1503-1510 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.05.033

摘要（1345）

PDF （385KB）（792）

【目的】提高猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）基因免疫的效果，构建含CpG基序和PRRSV ORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。【方法】经酶切鉴定和序列测定，将重组质粒转染COS-7细胞，经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSV GP5蛋白。免疫SPF小鼠，检测鼠的特异性抗体滴度、脾T淋巴细胞亚群数量（CD4+和CD8+）以及淋巴细胞增殖反应（MTT法）水平。【结果】本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的体液免疫与细胞免疫。【结论】CpG-ODN可提高PRRSV基因疫苗的免疫效果。

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2. 复方中药对禽流感病毒的防治研究

李艳华,闫清波,于康震,佟恒敏,孙元

2008, 41 (5): 1511-1518 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.05.034

摘要（1292）

PDF （351KB）（953）

【目的】探讨自行研制的由贯众、板蓝根、黄芪、柴胡、连翘、黄连、金银花、黄芩及甘草配制的复方中药在体内、体外对禽流感病毒的抑制作用、药物代谢动力学、急性毒性试验及对SPF鸡免疫功能的影响。【方法】在鸡胚、MDCK细胞上进行复方中草药对H5N1和H9N2亚型禽流感病毒的直接灭活作用、治疗作用和预防作用；在体内通过药物累计法研究复方中药在昆明鼠体内的药物代谢动力学；采取口服和腹腔注射两种给药途径研究复方中药对昆明鼠的急性毒性试验；通过免疫器官的指数、在FAC上测量CD3+、CD4+、CD8+及TCR+的含量及采用血凝抑制（HI）方法检测血清中H9亚型禽流感抗体滴度研究复方中草药的对SPF鸡免疫功能的影响；通过体外试验研究其对H5N1禽流感病毒的治疗作用。【结果】该复方药物在鸡胚内对H5N1亚型禽流感病毒的有效灭活浓度、治疗浓度及预防浓度分别是31.25 mg•ml-1、125 mg•ml-1及250 mg•ml-1，对H9N2亚型禽流感病毒的有效灭活浓度、治疗浓度及预防浓度分别是31.25 mg•ml-1、15.625 mg•ml-1及62.5 mg•ml-1；在MDCK上对H5N1亚型禽流感病毒的有效灭活浓度及预防浓度分别是31.25 mg•ml-1、125 mg•ml-1，治疗浓度未测出。对H9N2亚型禽流感病毒的有效灭活浓度、治疗浓度及预防浓度分别是15.625 mg•ml-1、31.25 mg•ml-1及31.25 mg•ml-1；其在小白鼠体内的经时过程为一室模型。其药-时方程式为：C=650.66e-4.9078t ；口服复方中药后对昆明小鼠无毒；腹腔注射复方中药后对昆明小鼠的半数致死量（LD50）为425.6 mg•kg-1；给药后21 d，CD3+、CD4+、CD8+及TCR+的含量分别为64.01%、27.39%、45.05%和32.19%；免疫后半个月，给药-免疫组的禽流感抗体滴度比免疫组高1.6个滴度；同群感染组中，该复方中药预防组的保护率达30%，而治疗组为20%；【结论】体外试验表明，复方中药不仅对禽流感病毒有直接灭活作用，而且对吸附于细胞表面和进入细胞内的禽流感病毒都有抑制作用；其药物代谢动力学特征是吸收快、消除慢；该复方中药不仅安全、而且能增强鸡的体液免疫、细胞免疫功能、增加免疫器官指数。体内试验表明，该复方中药能延长鸡的平均死亡时间，预防效果强于治疗效果。总之，自行研制的复方中药具有预防、安全、延长感染鸡的存活时间、增强机体免疫力的作用。

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3. 鸭肝炎病毒(DHV-1)及水飞蓟素对雏鸭生长的影响

刘为民,王丙云,陈建红,王军,计慧琴,袁生,黄德纯,李康林

2008, 41 (5): 1519-1523 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.05.035

摘要（1571）

PDF （304KB）（853）

【目的】观察雏鸭接种亚致死量鸭肝炎病毒后生长速度的改变及水飞蓟素对其的影响。【方法】100只雏鸭分为8组，于10日龄接种病毒。第1、2、3组腿肌接种105倍稀释的病毒尿囊液，并分别口服0、30、50 mg•kg-1bw•d-1的水飞蓟素；第4、5、6组腿肌接种5×105倍稀病毒尿囊液并分别口服0、10、30 mg•kg-1bw•d-1的水飞蓟素；第7组为水飞蓟素对照组，不接种病毒，但口服水飞蓟素10 mg•kg-1bw•d-1；第8组为空白对照组，仅腿肌注射0.2 ml灭菌生理盐水。水飞蓟素连续给药5 d，于攻毒的第5天采集血浆，测定血浆T3、甲状腺素（T4）、IGF-Ⅰ浓度。于攻毒后10 d测定体重。【结果】用5×105倍稀释病毒尿囊液接种雏鸭，动物显示出显著高的生长速度（P＜0.01，与对照组比较），此种效应可被口服水飞蓟素剂量依赖性的抑制。T4水平在接种病毒后极显著的降低，未见水飞蓟素对其显著的影响，生长速度与血浆T3水平在一定程度上呈正相关关系，与IGF-Ⅰ水平相关性不强。【结论】亚致死量鸭肝炎病毒可显著促进雏鸭的生长，水飞蓟素可拮抗病毒的这种作用，血浆T3水平与动物生长速度关系密切。

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4. 己烯雌酚特异性抗体的制备

岳磊,单国强,刘雅红,贺利民,张琴

2008, 41 (5): 1524-1529 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.05.036

摘要（1218）

PDF （364KB）（924）

【目的】制备抗己烯雌酚（DES）的高亲和力特异性抗体，建立检测DES的间接竞争ELISA标准曲线，为进一步研究DES快速检测试剂盒打下基础。【方法】应用DES人工免疫抗原免疫新西兰大白兔，采集抗DES的特异性抗血清，用KCjunior软件进行4参数非线性回归，建立检测DES的间接竞争ELISA标准曲线，各药物浓度在同一批次酶标板中做4次重复，共做4个批次对标准曲线进行评价，用己烷雌酚（HEX）、双烯雌酚（DIEN）、雌二醇（E2）、乙炔雌二醇（EE2）和L-酪氨酸（Tyr）来评价抗体的特异性。【结果】5只家兔免疫产生了抗DES的特异性抗血清，其中4号家兔抗血清效价达到了1﹕4 096 000竞争抑制效果最好，工作稀释浓度为1﹕1 024 000时，线性范围在0.01～50 μg•L-1，标准曲线的IC50在0.71～1.0 μg•L-1，R2在0.9952～0.9978。获得各标准浓度下B/B0的批内变异系数在0.52%～22.48%，批间变异系数在2.64%～19.51%。交叉反应试验表明，4号家兔抗血清对与DES结构相似的人工合成二苯乙烯类雌激素药物己烷雌酚（HEX）和双烯雌酚（DIEN）的交叉反应率分别为8.5%和38.5%，与天然雌激素类药物雌二醇（E2）和乙炔雌二醇（EE2）以及L-酪氨酸（Tyr）的交叉反应均小于0.001%。【结论】本文报道的抗体特异性好、亲和力高，可满足目前中国动物性食品安全评价检测的需要，为研究组织中DES残留检测的ELISA方法及其开发DES快速检测试剂盒奠定了基础。

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5. 应用蜜蜂营养杂交技术培育抗螨蜂种

谢宪兵,彭文君,曾志将

2008, 41 (5): 1530-1535 . DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.05.037

摘要（1248）

PDF （250KB）（1010）

【目的】大蜂螨是中国饲养的西方蜜蜂最重要病虫害之一，多年来药物防治蜂螨，一方面蜜蜂对药物产生了很强的抗药性，另一方面治螨药物在一定程度上会污染蜂产品。本研究通过蜜蜂营养杂交，探讨培育抗螨蜂种的可行性。【方法】采用中华蜜蜂的蜂王浆饲喂意大利蜜蜂工蜂小幼虫，然后测定营养杂交后代工蜂形态指标、苹果酸脱氢酶Ⅱ的基因型频率和基因频率、蜂群遗传相似系数以及抗螨力。【结果】营养杂交子后代工蜂的吻长、右前翅面积、腹部第3+4背板总长、第4背板突间距、第6腹节面积、蜡镜面积6个指标与亲本工蜂之间存在显著差异，但肘脉指数、跗节指数和翅钩数与亲本差异不显著；营养杂交子后代工蜂的苹果酸脱氢酶Ⅱ基因型频率和基因频率存在一定的变异；营养杂交子后代之间遗传相似系数明显高于亲本意大利蜜蜂；营养杂交子后代的工蜂抗螨力显著高于亲本意大利蜜蜂。【结论】通过蜜蜂营养杂交，可以改变营养杂交后代工蜂形态、生理生化、分子遗传相似性及抗螨力等特性。蜜蜂营养杂交可成为蜜蜂育种一条新途径。

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